布魯氏菌BP26蛋白對鼠源樹突狀細胞分化及抗原提呈作用
發(fā)布時間：2021-06-16 03:05
構建pET-30a-BP26并在大腸桿菌中表達獲得重組布魯氏菌BP26蛋白,研究重組表達蛋白對鼠髓源樹突狀細胞分化及抗原提呈作用。設計布魯氏菌BP26蛋白引物,PCR擴增該基因并酶切、連接在pET-30a載體上。將構建成功的pET-30a-BP26轉化至感受態(tài)細胞BL21表達獲得重組BP26蛋白。采用SDS-PAGE和Western-Blot檢測蛋白表達量和反應原性后,用重組蛋白刺激BALB/C小鼠分離髓源樹突狀細胞（BM-DCs）,觀察BM-DCs的成熟分化并利用流式細胞術進行表型分析。成功獲得BP26重組蛋白,SDS-PAGE和Western-Blot分析結果表明,BP26重組蛋白可溶性高且具有良好的反應原性,流式細胞術檢測結果顯示,BP26能刺激BM-DCs分化成熟和抗原提呈作用。
【文章來源】：江蘇農業(yè)學報. 2020,36(04)北大核心CSCD
【文章頁數(shù)】：8 頁
【圖文】：
表達載體雙酶切圖譜
SDS-PAGE鑒定pET-30a-BP26表達結果
將純化誘導表達上清液中的BP26蛋白的各濃度咪唑洗脫液經SDS-PAGE鑒定分析,發(fā)現(xiàn)在泳道1有BP26蛋白和大量雜蛋白質出現(xiàn),證明誘導表達上清中的蛋白質并未完全與High Affinity Ni-Charged Resin FF結合;泳道2出現(xiàn)了與泳道1相同的情況,證明LE Buffer據(jù)有將蛋白質從高親和力樹脂上洗脫下來的能力,泳道3～6并未出現(xiàn)明顯的蛋白質條帶,但是從泳道7、泳道8可以觀察出BP26蛋白的表達量較多,而雜蛋白質條帶幾乎沒有。說明20～160 mmol/L濃度咪唑洗脫液可以充分將雜蛋白質從親和樹脂上洗脫下來,洗脫效果最佳的咪唑濃度為40 mmol/L(圖3)。2.3 BP26蛋白Western blotting檢測結果
【參考文獻】：
期刊論文
[1]羊口瘡病毒ORFV129蛋白對樹突狀細胞成熟和功能的影響[J]. 杜國玉,吳錦艷,曹小安,李玲霞,馮倩,尹雙輝,周建華,劉永杰,尚佑軍,劉湘濤,劉永生. 中國獸醫(yī)科學. 2019(06)
[2]共刺激分子CD80、CD86及抗原遞呈細胞DC在鼻咽疾病的應用研究[J]. 王麗祥,方琦. 微創(chuàng)醫(yī)學. 2017(02)
[3]布魯氏菌5種蛋白的原核表達及其作為間接ELISA檢測用抗原的適用性比較[J]. 王勇,南文龍,鞏明霞,張悅勇,彭大新,陳義平. 中國動物檢疫. 2015(10)
[4]檢測OMP28抗體不能有效診斷羊布魯氏菌病[J]. 王芳,蔣卉,朱良全,王楠,張閣,鑫婷,朱鴻飛,丁家波. 微生物學通報. 2015(08)
[5]布魯氏菌外膜蛋白BP26細胞毒性作用的研究[J]. 陳瑞花,張輝,唐利燕,孟茹,張豫,王震,李志強,張俊波,陳創(chuàng)夫. 中國農業(yè)科學. 2012(16)
[6]Semaphorins分子與樹突狀細胞的免疫功能[J]. 于秀石,田菊霞. 健康研究. 2011(06)
[7]布魯氏菌BP26蛋白遲發(fā)型變態(tài)反應的研究[J]. 劉景福,李恪梅,王國治. 藥物分析雜志. 2011(07)
[8]一對重要的免疫調節(jié)分子:CTLA-4及其抗體[J]. 蔡雷,任大明. 中國免疫學雜志. 2004(05)
博士論文
[1]CD80/CD86基因RNA干擾慢病毒載體的構建及其在抗異基因小鼠心臟移植排斥的作用[D]. 顧曉冬.復旦大學 2010
碩士論文
[1]布魯氏菌主要外膜蛋白對樹突狀細胞成熟度及抗原遞呈的影響[D]. 童志霞.石河子大學 2018
[2]布魯氏菌中CRISPR-Cas9基因編輯技術研究[D]. 李娜.華中農業(yè)大學 2017
[3]布魯氏菌L7/L12、Omp31及其融合基因真核表達載體的構建及免疫原性研究[D]. 李仲樂.吉林農業(yè)大學 2016
[4]馬耳他布氏菌弱毒疫苗M5-90外膜蛋白BP26和OMP31抗原表位及其疫苗免疫評價[D]. 吳靜波.南方醫(yī)科大學 2013
[5]共刺激分子CD28/CTLA-4在白癜風患者外周血T淋巴細胞的表達[D]. 杜軍波.鄭州大學 2012
[6]STIM1/STIM2對人外周血單核細胞來源的樹突狀細胞表型及免疫功能的影響[D]. 文津.瀘州醫(yī)學院 2012
[7]流產布魯氏菌BP26蛋白B細胞線性表位的鑒定[D]. 羨東堡.東北農業(yè)大學 2012
[8]抗人CD80單鏈抗體（ScFv）及雙價抗體（diabody）的研制及生物學功能初步研究[D]. 陳昌友.蘇州大學 2011
[9]布氏桿菌BP26抗原特異單克隆抗體的制備與初步應用[D]. 楊帆.東北農業(yè)大學 2010
[10]共刺激分子B7-1，B7-2在大鼠熱缺血再灌注肝臟表達的實驗研究[D]. 紀志鵬.山東大學 2006
本文編號：3232232
【文章來源】：江蘇農業(yè)學報. 2020,36(04)北大核心CSCD
【文章頁數(shù)】：8 頁
【圖文】：
表達載體雙酶切圖譜
SDS-PAGE鑒定pET-30a-BP26表達結果
將純化誘導表達上清液中的BP26蛋白的各濃度咪唑洗脫液經SDS-PAGE鑒定分析,發(fā)現(xiàn)在泳道1有BP26蛋白和大量雜蛋白質出現(xiàn),證明誘導表達上清中的蛋白質并未完全與High Affinity Ni-Charged Resin FF結合;泳道2出現(xiàn)了與泳道1相同的情況,證明LE Buffer據(jù)有將蛋白質從高親和力樹脂上洗脫下來的能力,泳道3～6并未出現(xiàn)明顯的蛋白質條帶,但是從泳道7、泳道8可以觀察出BP26蛋白的表達量較多,而雜蛋白質條帶幾乎沒有。說明20～160 mmol/L濃度咪唑洗脫液可以充分將雜蛋白質從親和樹脂上洗脫下來,洗脫效果最佳的咪唑濃度為40 mmol/L(圖3)。2.3 BP26蛋白Western blotting檢測結果
【參考文獻】：
期刊論文
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[2]共刺激分子CD80、CD86及抗原遞呈細胞DC在鼻咽疾病的應用研究[J]. 王麗祥,方琦. 微創(chuàng)醫(yī)學. 2017(02)
[3]布魯氏菌5種蛋白的原核表達及其作為間接ELISA檢測用抗原的適用性比較[J]. 王勇,南文龍,鞏明霞,張悅勇,彭大新,陳義平. 中國動物檢疫. 2015(10)
[4]檢測OMP28抗體不能有效診斷羊布魯氏菌病[J]. 王芳,蔣卉,朱良全,王楠,張閣,鑫婷,朱鴻飛,丁家波. 微生物學通報. 2015(08)
[5]布魯氏菌外膜蛋白BP26細胞毒性作用的研究[J]. 陳瑞花,張輝,唐利燕,孟茹,張豫,王震,李志強,張俊波,陳創(chuàng)夫. 中國農業(yè)科學. 2012(16)
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[7]布魯氏菌BP26蛋白遲發(fā)型變態(tài)反應的研究[J]. 劉景福,李恪梅,王國治. 藥物分析雜志. 2011(07)
[8]一對重要的免疫調節(jié)分子:CTLA-4及其抗體[J]. 蔡雷,任大明. 中國免疫學雜志. 2004(05)
博士論文
[1]CD80/CD86基因RNA干擾慢病毒載體的構建及其在抗異基因小鼠心臟移植排斥的作用[D]. 顧曉冬.復旦大學 2010
碩士論文
[1]布魯氏菌主要外膜蛋白對樹突狀細胞成熟度及抗原遞呈的影響[D]. 童志霞.石河子大學 2018
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[3]布魯氏菌L7/L12、Omp31及其融合基因真核表達載體的構建及免疫原性研究[D]. 李仲樂.吉林農業(yè)大學 2016
[4]馬耳他布氏菌弱毒疫苗M5-90外膜蛋白BP26和OMP31抗原表位及其疫苗免疫評價[D]. 吳靜波.南方醫(yī)科大學 2013
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[6]STIM1/STIM2對人外周血單核細胞來源的樹突狀細胞表型及免疫功能的影響[D]. 文津.瀘州醫(yī)學院 2012
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[10]共刺激分子B7-1，B7-2在大鼠熱缺血再灌注肝臟表達的實驗研究[D]. 紀志鵬.山東大學 2006
本文編號：3232232
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