構(gòu)建pET-30a-BP26并在大腸桿菌中表達(dá)獲得重組布魯氏菌BP26蛋白,研究重組表達(dá)蛋白對鼠髓源樹突狀細(xì)胞分化及抗原提呈作用。設(shè)計(jì)布魯氏菌BP26蛋白引物,PCR擴(kuò)增該基因并酶切、連接在pET-30a載體上。將構(gòu)建成功的pET-30a-BP26轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細(xì)胞BL21表達(dá)獲得重組BP26蛋白。采用SDS-PAGE和Western-Blot檢測蛋白表達(dá)量和反應(yīng)原性后,用重組蛋白刺激BALB/C小鼠分離髓源樹突狀細(xì)胞（BM-DCs）,觀察BM-DCs的成熟分化并利用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行表型分析。成功獲得BP26重組蛋白,SDS-PAGE和Western-Blot分析結(jié)果表明,BP26重組蛋白可溶性高且具有良好的反應(yīng)原性,流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示,BP26能刺激BM-DCs分化成熟和抗原提呈作用。 

【文章來源】：江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2020,36(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【圖文】：

表達(dá)載體雙酶切圖譜

SDS-PAGE鑒定pET-30a-BP26表達(dá)結(jié)果

將純化誘導(dǎo)表達(dá)上清液中的BP26蛋白的各濃度咪唑洗脫液經(jīng)SDS-PAGE鑒定分析,發(fā)現(xiàn)在泳道1有BP26蛋白和大量雜蛋白質(zhì)出現(xiàn),證明誘導(dǎo)表達(dá)上清中的蛋白質(zhì)并未完全與High Affinity Ni-Charged Resin FF結(jié)合;泳道2出現(xiàn)了與泳道1相同的情況,證明LE Buffer據(jù)有將蛋白質(zhì)從高親和力樹脂上洗脫下來的能力,泳道3～6并未出現(xiàn)明顯的蛋白質(zhì)條帶,但是從泳道7、泳道8可以觀察出BP26蛋白的表達(dá)量較多,而雜蛋白質(zhì)條帶幾乎沒有。說明20～160 mmol/L濃度咪唑洗脫液可以充分將雜蛋白質(zhì)從親和樹脂上洗脫下來,洗脫效果最佳的咪唑濃度為40 mmol/L(圖3)。2.3 BP26蛋白Western blotting檢測結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
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