發(fā)布時(shí)間：2021-06-15 23:19

　　狂犬病是由狂犬病毒引起的高度致死性和接觸性人獸共患病,幾乎所有哺乳動(dòng)物均可感染,一旦發(fā)病就意味著死亡。我國(guó)是狂犬病高發(fā)國(guó)家之一,加之疆土幅員遼闊,狼、狐貍等野生動(dòng)物攜帶狂犬病毒的可能性較大,因此牧區(qū)牛羊受野生動(dòng)物攻擊而感染狂犬病的情況時(shí)有發(fā)生,如山西、內(nèi)蒙、新疆塔城等地均有牛羊被其咬傷導(dǎo)致其感染狂犬病的報(bào)道。羊痘病毒作為痘病毒科的成員,是大型的線形DNA病毒,可容納大量外源基因而不影響病毒的正常生長(zhǎng)繁殖,因此常被作為載體生產(chǎn)活載體多價(jià)疫苗。為有效預(yù)防羊狂犬病,本研究以山羊痘病毒疫苗株為病毒活載體,以其腺甘酸酶基因（TK）為復(fù)制非必需區(qū),以VV7.5基因或GTPV-A8R基因?yàn)閱?dòng)子,綠色熒光蛋白（GFP）為報(bào)告基因,利用基因工程技術(shù)設(shè)計(jì)構(gòu)建10株能重組狂犬病毒保護(hù)性抗原（G蛋白）的表達(dá)載體;制備培養(yǎng)羔羊睪丸原代細(xì)胞,通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將構(gòu)建成功的重組表達(dá)載體導(dǎo)入預(yù)先感染羊痘病毒疫苗株的羔羊睪丸細(xì)胞中,經(jīng)同源重組獲得能夠表達(dá)狂犬病毒G蛋白的重組羊痘病毒,然后運(yùn)用低熔點(diǎn)瓊脂糖固定、挑取熒光斑點(diǎn)和倍比稀釋傳代的方式進(jìn)行純化,經(jīng)4-6代傳代純化即可獲得較純的重組病毒,通過GFP基因表達(dá)率、細(xì)胞病... 

【文章來源】：塔里木大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-1片段模型

塔里木大學(xué)碩士學(xué)位論文第2章狂犬病毒G蛋白-羊痘病毒重組疫苗轉(zhuǎn)移載體的構(gòu)建20TK13-GFP-7.5-RVGQ-7.5、PGM-TK13-GFP-7.5-RVGW-7.5，用Acc65Ⅰ單酶切鑒定并測(cè)序。將酶切正確的重組質(zhì)粒測(cè)序，確定重組質(zhì)粒PGM-TK13-7.5-GFP、PGM-TK13-GFP-7.5-RVGQ-7.5、PGM-TK13-GFP-7.5-RVGW-7.5、PGM-TK13-7.5-GFP-RVGQ、PGM-TK13-7.5-GFP-RVGW、PGM-TK13-7.5-RVGQ-GFP、PGM-TK13-7.5-RVGW-GFP、PGM-TK13-RVGQ-A8R-GFP、PGM-TK13-RVGW-A8R-GFP，10株目標(biāo)重組質(zhì)粒獲得其中8株，PGM-TK13-GFP-7.5-7.5-RVGQ、PGM-TK13-GFP-7.5-7.5-RVGW尚未獲得，酶切鑒定結(jié)果如圖2-6及圖2-7。圖2-2G蛋白基因全長(zhǎng)及膜外區(qū)、VV7.5啟動(dòng)子分段PCR電泳圖泳道M：DNAMarker2K；泳道1：GFP基因片段720bp；泳道4：G蛋白全長(zhǎng)基因片段1575bp；泳道5：G蛋白膜外區(qū)基因片段1374bp；泳道7：?jiǎn)?dòng)子VV7.5片段180bp圖2-37.5-GFP、7.5-RVGQ、7.5-RVGW基因片段融合PCR電泳圖泳道M：DNAMarker2KPlusⅡ；泳道1：7.5-GFP基因片段900bp；泳道2：7.5-RVGQ基因片段1755bp；泳道3：7.5-RVGW基因片段1554bp

塔里木大學(xué)碩士學(xué)位論文第2章狂犬病毒G蛋白-羊痘病毒重組疫苗轉(zhuǎn)移載體的構(gòu)建20TK13-GFP-7.5-RVGQ-7.5、PGM-TK13-GFP-7.5-RVGW-7.5，用Acc65Ⅰ單酶切鑒定并測(cè)序。將酶切正確的重組質(zhì)粒測(cè)序，確定重組質(zhì)粒PGM-TK13-7.5-GFP、PGM-TK13-GFP-7.5-RVGQ-7.5、PGM-TK13-GFP-7.5-RVGW-7.5、PGM-TK13-7.5-GFP-RVGQ、PGM-TK13-7.5-GFP-RVGW、PGM-TK13-7.5-RVGQ-GFP、PGM-TK13-7.5-RVGW-GFP、PGM-TK13-RVGQ-A8R-GFP、PGM-TK13-RVGW-A8R-GFP，10株目標(biāo)重組質(zhì)粒獲得其中8株，PGM-TK13-GFP-7.5-7.5-RVGQ、PGM-TK13-GFP-7.5-7.5-RVGW尚未獲得，酶切鑒定結(jié)果如圖2-6及圖2-7。圖2-2G蛋白基因全長(zhǎng)及膜外區(qū)、VV7.5啟動(dòng)子分段PCR電泳圖泳道M：DNAMarker2K；泳道1：GFP基因片段720bp；泳道4：G蛋白全長(zhǎng)基因片段1575bp；泳道5：G蛋白膜外區(qū)基因片段1374bp；泳道7：?jiǎn)?dòng)子VV7.5片段180bp圖2-37.5-GFP、7.5-RVGQ、7.5-RVGW基因片段融合PCR電泳圖泳道M：DNAMarker2KPlusⅡ；泳道1：7.5-GFP基因片段900bp；泳道2：7.5-RVGQ基因片段1755bp；泳道3：7.5-RVGW基因片段1554bp


本文編號(hào)：3231895