結(jié)核病是嚴(yán)重影響人類和動(dòng)物健康的慢性消耗性傳染病,結(jié)核分枝桿菌和牛分枝桿菌是引起結(jié)核病的主要病原菌。艾滋病的廣泛流行、國(guó)家和個(gè)人對(duì)衛(wèi)生保護(hù)和知識(shí)上的匱乏,使結(jié)核病成為世界衛(wèi)生組織最重要的問(wèn)題之一。隨著耐藥結(jié)核桿菌的出現(xiàn),結(jié)核桿菌對(duì)絕大多數(shù)治療結(jié)核病的一線藥物產(chǎn)生了不同程度的耐藥性,結(jié)核病在全球范圍內(nèi)有回升趨勢(shì)。在1990-2000期間,有41.5%的發(fā)展中國(guó)家和25%的發(fā)達(dá)國(guó)家結(jié)核病疫情明顯上升1,2,3。PDZ結(jié)構(gòu)域是介導(dǎo)蛋白質(zhì)/蛋白質(zhì)之間相互作用的常見(jiàn)結(jié)構(gòu)域之一,參與細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞極性、細(xì)胞遷移與入侵及免疫細(xì)胞識(shí)別等重要的是生物學(xué)過(guò)程。因此,研究含有PDZ結(jié)構(gòu)域的蛋白有助于更好地了解結(jié)核桿菌的在體內(nèi)的耐藥和擴(kuò)散機(jī)制,為新的疫苗和藥物研發(fā)提供靶標(biāo)。本課題研究的MT3286蛋白來(lái)自結(jié)核分枝桿菌CDC1551菌株,與H37Rv、BCG等菌株在基因水平上有100%的同源性。目前關(guān)于該蛋白的結(jié)構(gòu)和功能均沒(méi)有報(bào)道,本文根據(jù)基因和載體的特點(diǎn),首先構(gòu)建pET28a-mt3286重組載體,然后在大腸桿菌BL21（DE3）中大量表達(dá)融合蛋白。經(jīng)過(guò)不斷優(yōu)化表達(dá)和純化條件,獲得了高純度的目的蛋白,蛋白... 

【文章來(lái)源】：福建農(nóng)林大學(xué)福建省

【文章頁(yè)數(shù)】：54 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?一個(gè)二聚體蛋白的三級(jí)結(jié)構(gòu)

－Ｓｙｎ的ＰＤＺ結(jié)構(gòu)域形成的“頭對(duì)尾”異源二聚體。神經(jīng)元型一氧化氮合酶（ｎ６２位氨基酸Ａｓｐ?（藍(lán)色）與其ｐ－ｆｍｇｅｒ結(jié)構(gòu)域上的第１２１位的Ａｒｇ?（紅色）神經(jīng)元型一氧化氮合成酶Ｐ－ｆｍｇｅｒ結(jié)構(gòu)域的穩(wěn)定性；ｐ－ｆｍｇｅｒ結(jié)構(gòu)域上從第１ｅ?（紫色）這一段序列，是對(duì)于因與互生ＰＤＺ結(jié)構(gòu)域結(jié)合而造成ｐ－ｆｍｇｅｒ結(jié)。??容與研究意義??容??選取結(jié)合分支桿菌ＣＤＣ１５５１全基因組中的基因進(jìn)行研究，該基Ｒｖ３１９４ｃ的同源性為１００％。研究?jī)?nèi)容主要包括四個(gè)部分：??表達(dá)載體ｐＥＴ－２８ａ和基因序列的特點(diǎn)，結(jié)合分子生物學(xué)知識(shí)，設(shè)妨，用以表達(dá)融合蛋白。??融合蛋白表達(dá)條件，確定最優(yōu)表達(dá)條件。??和層析和分子篩層析純化目的蛋白。??

?????組質(zhì)粒示意圖。Ｈｉｓ－ｔａｇ為載體ｐＥＴ－２８ａ所帶，淺綠色部分為插入的目的片段，以ＮｄＲＩ雙酶切，與酶切后質(zhì)粒連接，表達(dá)帶有Ｈｉｓ標(biāo)簽的重組蛋白。??游引物和下游引物分別設(shè)計(jì)上Ｎｄｅｌ和ＥｃｏＲＩ酶切位點(diǎn)，基因序列如下：??’

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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