鄰苯二甲酸二乙基己酯（diethylhexyl phthalate, DEHP）是目前使用最為廣泛,年產(chǎn)量最大的一種塑化劑。研究表明,DEHP能通過吞咽、呼吸和皮膚直接接觸等方式進(jìn)入人體和動物體內(nèi),并可對生殖系統(tǒng)、血液、腎臟、肝臟等造成損害。此外,DEHP對神經(jīng)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能的影響也有研究,一項針對學(xué)齡兒童的調(diào)查研究表明,兒童尿液中鄰苯二甲酸酯代謝物含量與其智力的水平呈負(fù)相關(guān)；但是DEHP影響神經(jīng)系統(tǒng)認(rèn)知功能的具體機(jī)制并不清楚。本文以小鼠的神經(jīng)瘤細(xì)胞為研究對象,在細(xì)胞水平上探究了DEHP誘導(dǎo)的過氧化損傷對微管相關(guān)蛋白tau、蛋白激酶A（Protein kinase A, PKA）、環(huán)腺苷酸反應(yīng)原件結(jié)合蛋白（cAMP response elementbinding protein,CREB）等認(rèn)知功能相關(guān)蛋白水平和功能的影響,以期為DEHP對學(xué)習(xí)認(rèn)知功能影響的機(jī)制性研究提供一些借鑒和參考。本實驗中,我們用500μM DEHP處理小鼠的神經(jīng)瘤細(xì)胞（N2a）24小時,或者用維生素E（Vitamin E,VitE）（25、50μM）預(yù)處理細(xì)胞1小時后,再用DEHP （500μM）處理細(xì)胞24... 

【文章來源】：華中師范大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 鄰苯二甲酸二乙基己酯(diethylhexyl phthalate,DEHP)的簡介
    1.2 DEHP與過氧化損傷的關(guān)系
    1.3 過氧化損傷與認(rèn)知功能的關(guān)系
    1.4 微管相關(guān)蛋白tau及其生物學(xué)功能與認(rèn)知功能的關(guān)系
    1.5 突觸前蛋白(Synapsin-1)和突觸后致密蛋白(PSD95)在認(rèn)知功能中的作用
    1.6 PKA-CREB信號通路在認(rèn)知功能中的作用
    1.7 研究的目的和意義
2 材料和方法
    2.1 主要試劑
    2.2 主要儀器
    2.3 小鼠神經(jīng)瘤細(xì)胞(N2a)的傳代培養(yǎng)和藥物處理
    2.4 收集樣品
    2.5 BCA法測定蛋白濃度
    2.6 檢測DEHP對細(xì)胞過氧化損傷的作用
        2.6.1 細(xì)胞內(nèi)總超氧化物歧化酶(T-SOD)活力的測定
        2.6.2 細(xì)胞內(nèi)丙二醛(MDA)含量的測定
        2.6.3 細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)含量的測定(DCF法)
    2.7 免疫印跡(Western blotting)
    2.8 統(tǒng)計學(xué)分析
3 結(jié)果
    3.1 不同濃度的DEHP對N2a細(xì)胞過氧化損傷的影響
    3.2 VitE對DEHP誘導(dǎo)的N2a細(xì)胞過氧化損傷的阻止作用
    3.3 DEHP對N2a細(xì)胞形態(tài)的影響
    3.4 DEHP對N2a細(xì)胞內(nèi)微管相關(guān)蛋白tau磷酸化修飾的影響
    3.5 DEHP對微管相關(guān)蛋白tau與微管結(jié)合功能的影響
    3.6 DEHP對細(xì)胞內(nèi)GSK-3β總量及活性的影響
    3.7 DEHP對突觸前蛋白(Synapsin-1)和突觸后致密蛋白(PSD95)水平的影響
    3.8 DEHP對cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)含量和活性的影響
    3.9 DEHP對細(xì)胞內(nèi)蛋白激酶A(PKA)活性的影響
4 討論
    4.1 DEHP能誘導(dǎo)過氧化損傷的發(fā)生以及對神經(jīng)元形態(tài)的影響
    4.2 DEHP誘導(dǎo)的過氧化損傷對tau蛋白磷酸化水平和生理功能的影響及其機(jī)制
    4.3 DEHP誘導(dǎo)的過氧化損傷對突觸蛋白(Synapsin-1和PSD95)的影響
    4.4 DEHP誘導(dǎo)的過氧化損傷對PKA-CREB信號通路的影響
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雌激素神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制:線粒體功能的調(diào)節(jié)[J]. 郭家彬,鐵璐,Diana N Krause,Sue P Duckles,李學(xué)軍.  生理科學(xué)進(jìn)展. 2010(03)



本文編號：3230354