隨著我國肉牛產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展和人們生活水平的不斷提高,諸如“雪花牛肉”等優(yōu)質(zhì)肉類受到廣大消費(fèi)者的青睞。牛肉的肌內(nèi)脂肪沉積和脂肪酸組成影響牛肉品質(zhì),高比例的不飽和脂肪酸與牛肉風(fēng)味有關(guān),有利于提高肉類營養(yǎng)價(jià)值。長鏈脂酰CoA合成酶1（Long-chain acyl-CoA synthetase 1,ACSL1）能夠催化依賴ATP的脂肪酸酰化為�；o酶A,此過程是脂肪酸合成和進(jìn)入細(xì)胞后的第一步。關(guān)聯(lián)分析表明,ACSL1基因第五內(nèi)含子的基因變異與骨骼肌中脂肪酸的相對(duì)含量和比例顯著相關(guān)。另外,前期研究發(fā)現(xiàn),在牛ACSL1基因的核心啟動(dòng)子區(qū)特異性結(jié)合著多個(gè)與脂肪細(xì)胞中不飽和脂肪酸合成相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子,協(xié)同調(diào)控ACSL1基因的表達(dá),意味著ACSL1基因可能在牛肌內(nèi)脂肪細(xì)胞中不飽和脂肪酸的合成過程中發(fā)揮重要調(diào)控作用。但目前關(guān)于該基因調(diào)控牛肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞不飽和脂肪酸合成的作用機(jī)制尚未見報(bào)道。本研究以秦川牛脂肪細(xì)胞為研究對(duì)象,利用腺病毒體系過表達(dá)和siRNA干擾ACSL1基因,根據(jù)下游靶基因表達(dá)和脂肪細(xì)胞內(nèi)脂肪酸組分的變化,來明確ACSL1基因?qū)ε＜?nèi)前體脂肪細(xì)胞不飽和脂肪酸合成的作用。具體試驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論如... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

pcDNA3.1（+/-）載體圖譜

甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)2020屆碩士學(xué)位論文182.2.8ACSL1基因腺病毒過表達(dá)載體構(gòu)建（1）用EcoRI和BamHI對(duì)構(gòu)建的pcDNA3.1-ACSL1重組質(zhì)粒和空載腺病毒穿梭質(zhì)粒pAdeno-EF1A(S)-mNeonGreen-CMV-MCS-3FLAG（H12588）（載體圖譜如圖2-2）分別進(jìn)行雙酶切，酶切體系如表2-7：圖2-2空載質(zhì)粒pAdeno-EF1A(S)-mNeonGreen-CMV-MCS-3FLAG（H12588）載體圖譜Figure2-2pAdeno-EF1A(S)-mNeonGreen-CMV-MCS-3FLAG(H12588)vectormap表2-7酶切體系Table2-7Digestionreactionsystem試劑Reagent使用量Volume（μL）pcDNA3.1-ACSL1/H125884.0（1000ng）QuickcutEcoRI1.0QuickcutBamHI1.010×QuickcutGreenBuffer5.0加ddH2O補(bǔ)充至50.0瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后分別用試劑盒進(jìn)行回收純化，之后用SolutionI連接酶連接，連接體系如表2-8：

ACSL1基因?qū)εＶ炯?xì)胞中不飽和脂肪酸合成的影響27第三章結(jié)果與分析3.1ACSL1基因重組腺病毒過表達(dá)載體構(gòu)建與鑒定3.1.1ACSL1基因的克隆與鑒定ACSL1基因CDS區(qū)的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物約2100bp，經(jīng)電泳檢測(cè)條帶單一可見，如圖3-1所示。EcoRI和BamHI雙酶切pcDNA3.1-ACSL1質(zhì)粒，瓊脂糖凝膠電泳分別得到約5328bp和2100bp兩條片段（圖3-2），與預(yù)期結(jié)果一致，表明ACSL1克隆載體構(gòu)建成功。圖3-1牛ACSL1基因CDS區(qū)的PCR產(chǎn)物Marker：DL2000DNAmarker；1：帶限制性酶切位點(diǎn)的ACSL1基因的CDS區(qū)片段Figure3-1PCRproductofCDSregionofACSL1geneofcattleMarker：DL2000DNAmarker；1：FragmentofCDSregionofACSL1genewithrestrictionsites

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3229475