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發(fā)布時間:2021-06-14 08:45
  隨著我國肉牛產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展和人們生活水平的不斷提高,諸如“雪花牛肉”等優(yōu)質(zhì)肉類受到廣大消費者的青睞。牛肉的肌內(nèi)脂肪沉積和脂肪酸組成影響牛肉品質(zhì),高比例的不飽和脂肪酸與牛肉風味有關(guān),有利于提高肉類營養(yǎng)價值。長鏈脂酰CoA合成酶1(Long-chain acyl-CoA synthetase 1,ACSL1)能夠催化依賴ATP的脂肪酸酰化為;o酶A,此過程是脂肪酸合成和進入細胞后的第一步。關(guān)聯(lián)分析表明,ACSL1基因第五內(nèi)含子的基因變異與骨骼肌中脂肪酸的相對含量和比例顯著相關(guān)。另外,前期研究發(fā)現(xiàn),在牛ACSL1基因的核心啟動子區(qū)特異性結(jié)合著多個與脂肪細胞中不飽和脂肪酸合成相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子,協(xié)同調(diào)控ACSL1基因的表達,意味著ACSL1基因可能在牛肌內(nèi)脂肪細胞中不飽和脂肪酸的合成過程中發(fā)揮重要調(diào)控作用。但目前關(guān)于該基因調(diào)控牛肌內(nèi)前體脂肪細胞不飽和脂肪酸合成的作用機制尚未見報道。本研究以秦川牛脂肪細胞為研究對象,利用腺病毒體系過表達和siRNA干擾ACSL1基因,根據(jù)下游靶基因表達和脂肪細胞內(nèi)脂肪酸組分的變化,來明確ACSL1基因?qū)ε<?nèi)前體脂肪細胞不飽和脂肪酸合成的作用。具體試驗結(jié)果及結(jié)論如... 

【文章來源】:甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】:77 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【部分圖文】:

ACSL1基因?qū)εV炯毎胁伙柡椭舅岷铣傻挠绊? src='http://image.cnki.net/getimage.ashx?id=1020649169.nh0001'  style='max-width:500px'></p><br> pcDNA3.1(+/-)載體圖譜<br><p align='center'><img src='http://image.cnki.net/getimage.ashx?id=1020649169.nh0002' alt='質(zhì)粒,載體,圖譜,體系' style='max-width:500px'></p><br> 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)2020屆碩士學(xué)位論文182.2.8ACSL1基因腺病毒過表達載體構(gòu)建(1)用EcoRI和BamHI對構(gòu)建的pcDNA3.1-ACSL1重組質(zhì)粒和空載腺病毒穿梭質(zhì)粒pAdeno-EF1A(S)-mNeonGreen-CMV-MCS-3FLAG(H12588)(載體圖譜如圖2-2)分別進行雙酶切,酶切體系如表2-7:圖2-2空載質(zhì)粒pAdeno-EF1A(S)-mNeonGreen-CMV-MCS-3FLAG(H12588)載體圖譜Figure2-2pAdeno-EF1A(S)-mNeonGreen-CMV-MCS-3FLAG(H12588)vectormap表2-7酶切體系Table2-7Digestionreactionsystem試劑Reagent使用量Volume(μL)pcDNA3.1-ACSL1/H125884.0(1000ng)QuickcutEcoRI1.0QuickcutBamHI1.010×QuickcutGreenBuffer5.0加ddH2O補充至50.0瓊脂糖凝膠電泳檢測后分別用試劑盒進行回收純化,之后用SolutionI連接酶連接,連接體系如表2-8: <br><br><p align='center'><img src='http://image.cnki.net/getimage.ashx?id=1020649169.nh0003' alt='基因,載體,片段,飽和脂肪酸' style='max-width:500px'></p><br> ACSL1基因?qū)εV炯毎胁伙柡椭舅岷铣傻挠绊?7第三章結(jié)果與分析3.1ACSL1基因重組腺病毒過表達載體構(gòu)建與鑒定3.1.1ACSL1基因的克隆與鑒定ACSL1基因CDS區(qū)的PCR擴增產(chǎn)物約2100bp,經(jīng)電泳檢測條帶單一可見,如圖3-1所示。EcoRI和BamHI雙酶切pcDNA3.1-ACSL1質(zhì)粒,瓊脂糖凝膠電泳分別得到約5328bp和2100bp兩條片段(圖3-2),與預(yù)期結(jié)果一致,表明ACSL1克隆載體構(gòu)建成功。圖3-1牛ACSL1基因CDS區(qū)的PCR產(chǎn)物Marker:DL2000DNAmarker;1:帶限制性酶切位點的ACSL1基因的CDS區(qū)片段Figure3-1PCRproductofCDSregionofACSL1geneofcattleMarker:DL2000DNAmarker;1:FragmentofCDSregionofACSL1genewithrestrictionsites <br><br>【參考文獻】:<br>期刊論文<br>[1]反芻動物肌內(nèi)脂肪及脂肪酸調(diào)控研究進展[J]. 李鶴瓊,羅海玲.  中國畜牧雜志. 2019(08)<br>
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[7]RNAi技術(shù)在動物功能基因組研究中的應(yīng)用[J]. 梅盈潔,凌飛,李加琪.  廣東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2006(07)<br>
[8]RNAi技術(shù)及其在哺乳動物基因功能研究中的應(yīng)用[J]. 劉蘇健,鄧勇志.  山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2006(04)<br>
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<br>博士論文<br>[1]雞脂肪酸結(jié)合蛋白基因的克隆及其與肌內(nèi)脂肪含量關(guān)系的研究[D]. 葉滿紅.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2003<br>
<br>碩士論文<br>[1]FABP3及FABP4基因SNP檢測及其與秦川肉牛肉質(zhì)性狀的關(guān)聯(lián)性分析[D]. 余橫偉.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2017<br>
[2]FABP3基因在奶牛乳腺上皮細胞中的功能研究[D]. 梁夢瑤.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014<br>
<br><!--https://kns.cnki.net/kcms/detail/detail.aspx?dbcode=CMFD&dbname=CMFD202002&filename=1020649169.nh&v=Y0iCwQGZt1GMmLzA5lqpDwCgB4EVP35NbAt5R%25mmd2B5HeeXAngtqmY1XE5AVblINOzPu-->
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