發(fā)布時間：2021-06-14 07:40

　　布魯菌Ⅳ型分泌系統(tǒng)是其重要的毒力因子之一,研究其組分中VirB5基因的作用對于闡明布魯菌的致病機制具有重要意義。應用PCR技術從B.suis S2菌株中擴增VirB5基因,克隆到pMD19T-simple載體,經EcoRⅠ、XhoⅠ酶切,與表達載體pET32a連接,得到重組質粒pET32a-VirB5,測序鑒定正確后,轉化至大腸埃希菌BL21（DE3）中,通過IPTG誘導并確定最佳誘導條件,采用Ni柱純化重組蛋白,并進行SDS-PAGE和Western blot鑒定。結果表明,克隆了717 bp大小的VirB5基因,構建了重組質粒pET32a-VirB5,誘導條件篩選表明,在37℃、菌液OD₆₀₀值約為0.6時,用1.0 mmol/L IPTG誘導6 h,蛋白表達量最高,表達的蛋白分子質量約為45 ku,且主要以包涵體的形式存在,研究結果為布魯菌致病機制的研究提供了材料。 

【文章來源】：動物醫(yī)學進展. 2020,41(08)北大核心

【文章頁數】：5 頁

【部分圖文】：

pET32a-VirB5酶切鑒定

VirB5蛋白的純化

將提取的B.suis S2株基因組DNA樣品用10 g/L瓊脂糖凝膠電泳進行檢測,其電泳結果如圖1所示,顯示提取的DNA純度高。2.2 VirB5基因PCR擴增及重組質粒pMD19T-VirB5的鑒定

【參考文獻】：
期刊論文
[1]布魯氏菌VirB5基因的原核表達及生物信息學分析[J]. 童志霞,李天森,張輝,陳創(chuàng)夫.  生物技術. 2016(06)



本文編號：3229371