發(fā)布時(shí)間：2021-06-14 07:40

　　布魯菌Ⅳ型分泌系統(tǒng)是其重要的毒力因子之一,研究其組分中VirB5基因的作用對于闡明布魯菌的致病機(jī)制具有重要意義。應(yīng)用PCR技術(shù)從B.suis S2菌株中擴(kuò)增VirB5基因,克隆到pMD19T-simple載體,經(jīng)EcoRⅠ、XhoⅠ酶切,與表達(dá)載體pET32a連接,得到重組質(zhì)粒pET32a-VirB5,測序鑒定正確后,轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌BL21（DE3）中,通過IPTG誘導(dǎo)并確定最佳誘導(dǎo)條件,采用Ni柱純化重組蛋白,并進(jìn)行SDS-PAGE和Western blot鑒定。結(jié)果表明,克隆了717 bp大小的VirB5基因,構(gòu)建了重組質(zhì)粒pET32a-VirB5,誘導(dǎo)條件篩選表明,在37℃、菌液OD₆₀₀值約為0.6時(shí),用1.0 mmol/L IPTG誘導(dǎo)6 h,蛋白表達(dá)量最高,表達(dá)的蛋白分子質(zhì)量約為45 ku,且主要以包涵體的形式存在,研究結(jié)果為布魯菌致病機(jī)制的研究提供了材料。 

【文章來源】：動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2020,41(08)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

pET32a-VirB5酶切鑒定

VirB5蛋白的純化

將提取的B.suis S2株基因組DNA樣品用10 g/L瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測,其電泳結(jié)果如圖1所示,顯示提取的DNA純度高。2.2 VirB5基因PCR擴(kuò)增及重組質(zhì)粒pMD19T-VirB5的鑒定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]布魯氏菌VirB5基因的原核表達(dá)及生物信息學(xué)分析[J]. 童志霞,李天森,張輝,陳創(chuàng)夫.  生物技術(shù). 2016(06)



本文編號：3229371