雞新城疫（Newcastle disease, ND）、傳染性支氣管炎（Infectious bronchitis,IB）和傳染性喉氣管炎（Infectious laryngotracheitis, ILT）是危害養(yǎng)禽業(yè)的主要呼吸道疫病。生產(chǎn)中臨床癥狀的相似性,使其檢測成為一個難題,快速聯(lián)合共檢新城疫、傳染性支氣管炎和傳染性喉氣管炎方法的建立具有重要意義。本研究以NDV、 IBV和ILTV為研究對象,構(gòu)建了一套禽呼吸道疫病共檢基因芯片,該芯片用于對NDV、IBV和ILTV的快速臨床檢測。本研究主要完成工作如下：1.探針質(zhì)粒菌的克隆及鑒定本試驗(yàn)制備了3種病毒的6個探針質(zhì)粒菌。試驗(yàn)針對NDV、IBV、ILTV基因組進(jìn)行比對分析后,分別選取NDV、IBV、ILTV的2個保守基因,共設(shè)計了6對探針基因引物。試驗(yàn)以NDV LaSota株、IBV H120株和ILTV標(biāo)準(zhǔn)株為材料,用RNA/DNA試劑盒抽提病毒RNA和DNA,以反轉(zhuǎn)錄后的cDNA和DNA為模板,PCR擴(kuò)增獲得6個探針基因,分別為NDV-F （440 bp）、NDV-HN （465 bp）、IBV-M （368 bp）、IBV-N ... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－２基因芯片點(diǎn)樣設(shè)置??Ｆｉｇ．?３－２?Ｔｈｅ?ｄｅｓｉｇｎ?ｏｆ?ＤＮＡ?ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ?ｓｐｏｔｔｉｎｇ??２．?３．?３點(diǎn)樣后處理??

基基片對高溫幾乎不敏感，最終選擇使用氨基基片作為本試驗(yàn)的基因芯、片基片。??本試驗(yàn)基因芯片基片選玻璃基片，所用載玻片為氨基修飾的英光惰性的光學(xué)級??載玻片，合格基片和不合格基片的掃描圖像見圖３－５�；蛐酒c(diǎn)制結(jié)束后都需要??進(jìn)行抽檢掃描，確保沒有漏點(diǎn)。??圖３－５合格和不合格基片的掃描圍像??Ｆｉｇ．３－５?Ｑｕａｌｉｆｉｅｄ?ａｎｄ?ｕｎｑｕａｌｉｆｉｅｄ?ｓｃａｎｎｉｎｇ?ｉｍａｇｅｓ??４２??

氨基基片和醒基基片的點(diǎn)樣液均不能使用含有游離氨基的緩沖液（如Ｔｒｉｓ），這會抑??制ＤＮＡ與基片表面氨基基團(tuán)的結(jié)合。??不同點(diǎn)樣緩沖液在點(diǎn)樣后掃描的結(jié)果見圖３－６。選用３?Ｘ?ＳＳＣ點(diǎn)樣肘，提取到的??信號標(biāo)準(zhǔn)差、背景標(biāo)準(zhǔn)差分別為６６２．３、５５２．３，而選用ＢａｉＯ⑥點(diǎn)樣液點(diǎn)樣時，提取??到的信號標(biāo)準(zhǔn)差、背景標(biāo)準(zhǔn)差分別為３２１．１、６６．６。??Ｒｏｗｌ；?３ｘＳＳＣ；??Ｒｏｗ?２；?ＢａｉＯ？?ｐｒｉｎｔｉｎｇ?ｂｕｆｆｅｒ??圖３－６不同點(diǎn)樣液點(diǎn)樣的形態(tài)比較??Ｆｉｇ．３－６?Ｔｈｅ?ｓｐｏｔ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒ＾ｅｎｔ?ｐｒｉｎｔｉｎｇ?ｂｕｆｆｅｒ??結(jié)果表明，選�。常兀樱樱米鳛辄c(diǎn)樣緩沖液點(diǎn)樣時，樣點(diǎn)面積比較大，邊緣不規(guī)??貝ＩＪ；選�。拢幔椋�？點(diǎn)樣緩沖液點(diǎn)樣時，樣點(diǎn)面積比較小、形狀均一規(guī)則，而且各參數(shù)??比較理想。因此，最終確定選取ＢａｉＯ⑥點(diǎn)樣緩沖液作為點(diǎn)樣緩沖液。??３．３．３不同點(diǎn)樣濕度的選擇??在４個不同的點(diǎn)樣濕度（５０％、６０％、７０％、８０％）條件下分別進(jìn)行點(diǎn)樣，８０??°Ｃ烘干后進(jìn)行掃描，Ｗ確定不同的點(diǎn)樣濕度對樣點(diǎn)的影響，??不同濕度下點(diǎn)樣的形態(tài)掃描圖像見圖３－７。由團(tuán)可見，在５０％濕度Ｗ下點(diǎn)樣時，??樣點(diǎn)容易出現(xiàn)點(diǎn)濃縮的現(xiàn)象

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]雞傳染性喉氣管炎病毒的分離鑒定與PCR檢測方法的建立[D]. 張明偉.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號：3228952