發(fā)布時間：2021-06-14 03:18

　　雞新城疫（Newcastle disease, ND）、傳染性支氣管炎（Infectious bronchitis,IB）和傳染性喉氣管炎（Infectious laryngotracheitis, ILT）是危害養(yǎng)禽業(yè)的主要呼吸道疫病。生產(chǎn)中臨床癥狀的相似性,使其檢測成為一個難題,快速聯(lián)合共檢新城疫、傳染性支氣管炎和傳染性喉氣管炎方法的建立具有重要意義。本研究以NDV、 IBV和ILTV為研究對象,構(gòu)建了一套禽呼吸道疫病共檢基因芯片,該芯片用于對NDV、IBV和ILTV的快速臨床檢測。本研究主要完成工作如下：1.探針質(zhì)粒菌的克隆及鑒定本試驗制備了3種病毒的6個探針質(zhì)粒菌。試驗針對NDV、IBV、ILTV基因組進行比對分析后,分別選取NDV、IBV、ILTV的2個保守基因,共設計了6對探針基因引物。試驗以NDV LaSota株、IBV H120株和ILTV標準株為材料,用RNA/DNA試劑盒抽提病毒RNA和DNA,以反轉(zhuǎn)錄后的cDNA和DNA為模板,PCR擴增獲得6個探針基因,分別為NDV-F （440 bp）、NDV-HN （465 bp）、IBV-M （368 bp）、IBV-N ... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－２基因芯片點樣設置??Ｆｉｇ．?３－２?Ｔｈｅ?ｄｅｓｉｇｎ?ｏｆ?ＤＮＡ?ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ?ｓｐｏｔｔｉｎｇ??２．?３．?３點樣后處理??

基基片對高溫幾乎不敏感，最終選擇使用氨基基片作為本試驗的基因芯、片基片。??本試驗基因芯片基片選玻璃基片，所用載玻片為氨基修飾的英光惰性的光學級??載玻片，合格基片和不合格基片的掃描圖像見圖３－５。基因芯片點制結(jié)束后都需要??進行抽檢掃描，確保沒有漏點。??圖３－５合格和不合格基片的掃描圍像??Ｆｉｇ．３－５?Ｑｕａｌｉｆｉｅｄ?ａｎｄ?ｕｎｑｕａｌｉｆｉｅｄ?ｓｃａｎｎｉｎｇ?ｉｍａｇｅｓ??４２??

氨基基片和醒基基片的點樣液均不能使用含有游離氨基的緩沖液（如Ｔｒｉｓ），這會抑??制ＤＮＡ與基片表面氨基基團的結(jié)合。??不同點樣緩沖液在點樣后掃描的結(jié)果見圖３－６。選用３?Ｘ?ＳＳＣ點樣肘，提取到的??信號標準差、背景標準差分別為６６２．３、５５２．３，而選用ＢａｉＯ⑥點樣液點樣時，提取??到的信號標準差、背景標準差分別為３２１．１、６６．６。??Ｒｏｗｌ；?３ｘＳＳＣ；??Ｒｏｗ?２；?ＢａｉＯ？?ｐｒｉｎｔｉｎｇ?ｂｕｆｆｅｒ??圖３－６不同點樣液點樣的形態(tài)比較??Ｆｉｇ．３－６?Ｔｈｅ?ｓｐｏｔ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒ＾ｅｎｔ?ｐｒｉｎｔｉｎｇ?ｂｕｆｆｅｒ??結(jié)果表明，選�。常兀樱樱米鳛辄c樣緩沖液點樣時，樣點面積比較大，邊緣不規(guī)??貝ＩＪ；選�。拢幔椋希奎c樣緩沖液點樣時，樣點面積比較小、形狀均一規(guī)則，而且各參數(shù)??比較理想。因此，最終確定選取ＢａｉＯ⑥點樣緩沖液作為點樣緩沖液。??３．３．３不同點樣濕度的選擇??在４個不同的點樣濕度（５０％、６０％、７０％、８０％）條件下分別進行點樣，８０??°Ｃ烘干后進行掃描，Ｗ確定不同的點樣濕度對樣點的影響，??不同濕度下點樣的形態(tài)掃描圖像見圖３－７。由團可見，在５０％濕度Ｗ下點樣時，??樣點容易出現(xiàn)點濃縮的現(xiàn)象

【參考文獻】：
期刊論文
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[8]多重聚合酶鏈反應快速檢測鑒別雞毒支原體強毒株和弱毒疫苗株的研究[J]. 謝芝勛,鄧顯文,謝志勤,龐耀珊,唐小飛,廖敏,劉加波,何競銘.  中國預防獸醫(yī)學報. 2003(06)
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博士論文
[1]水禽重要疫病的多重PCR與基因芯片檢測技術(shù)研究[D]. 鮮思美.四川農(nóng)業(yè)大學 2009
[2]偽狂犬病病毒、豬細小病毒和流行性乙型腦炎病毒檢測基因芯片的構(gòu)建及檢測技術(shù)研究[D]. 張煥容.四川農(nóng)業(yè)大學 2005

碩士論文
[1]雞傳染性喉氣管炎病毒的分離鑒定與PCR檢測方法的建立[D]. 張明偉.河南農(nóng)業(yè)大學 2009



本文編號：3228952