浮艦蛋白與細(xì)胞型朊蛋白在中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的研究
發(fā)布時(shí)間：2021-06-11 14:51
瘋牛病等海綿狀腦病是由細(xì)胞型朊蛋白PrPC)構(gòu)象轉(zhuǎn)變形成的朊病毒（PrPSc）導(dǎo)致的。PrPC廣泛分布于各種細(xì)胞內(nèi)并參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等細(xì)胞事件。PrPC在卵巢和輸卵管內(nèi)表達(dá),與卵泡發(fā)育和受精卵形成有關(guān)。浮艦蛋白（flotillins）形成的脂筏不僅是PrPC轉(zhuǎn)變成PrPSc的場(chǎng)所,而且為PrPC發(fā)揮生理功能提供了平臺(tái)。研究PrPC與flotillins相互作用對(duì)卵巢細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響對(duì)于明晰PrPC在卵巢細(xì)胞內(nèi)的作用具有重要意義。本研究旨在實(shí)現(xiàn)全長(zhǎng)PrP （PrP-ORF）、成熟PrP（PrP25-241）、浮艦蛋白-1（flotillin-1,Flot-1）和浮艦蛋白-2（flotillin-2,Flot-2）在野性型中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞CHO-K1內(nèi)的表達(dá),為了進(jìn)一步的免疫共沉淀確定兩者之間的相互作用,以及利用CHO-K1基因組表達(dá)譜芯片分析兩者相互作用對(duì)CHO-K1細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響奠定基礎(chǔ)。為確定Kozak序列對(duì)外源基因在CHO-K1中表達(dá)的影響,首先以氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶（chloramphenicol acetyltransferase,CAT）編碼基因和pcDNA3.1/Myc-Hi...
【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市
【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
CAT-01F、CAT-02F、CAT-03F的PCR擴(kuò)增結(jié)果
圖 2.2 CAT-OIF. CAT-02F、CAT-03F 的 PCR 產(chǎn)物膠回收結(jié)果Fig.2.1 PCR products of CAT-OIF、CAT-02F、CAT-03F分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1: CAT-0】F擴(kuò)增產(chǎn)物；2: CAT-02F Jf增產(chǎn)物；3: CADNA Marker; 1 :PCR product of CAT-01F;2:PCR product of CAT-02F;CAT-03F
37°C酶切3h后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，雙酶切鑒定結(jié)果如圖2.3。oooobpSjpjp . .7000bp焉 b ‘ _g|:P1 ooobp & pfw.EHgjM 3 ooobp50O5 巧,—..-fSS-^OObp::_bp圖2,3重組質(zhì)粒的雙酶切鑒定結(jié)果Fig2.3 Restriction enzyme digestion analysis of the recombinant plasmidMl、M2: DNA 分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1: pcDNA3,l/Myc-His(-)B-CAT-01F 的瓜雙酶切結(jié)果；2 ： pcDNA3.1/Myc-His(-)B-CAT-02F 的 Xho I +所％7111 雙酶切結(jié)果；3： pcDNA3.1/Myc-His(-)B-CAT-0:3F 的 I雙酶切結(jié)果。M1:DL2000 DNA Marker;M2:DL10000 DNA Marker;1 :Product of pcDNA3.1 /Myc-His(-)B-CAT-01F digested by Xho I -^HindSS.；2 :Product ofpcDNA3.1/Myc-His(-)B-CAT-02F digested Xho I ；3:Product of pcDNA3.1/Myc-His(-)B-CAT-03F digested by Xho I根據(jù)酶切鑒定結(jié)果，最后將酶切鑒定結(jié)果為陽(yáng)性的質(zhì)粒送到北京金唯智公司測(cè)序。將測(cè)序結(jié)果用NCBI BLAST軟件比對(duì)結(jié)果顯示：CAT的測(cè)序結(jié)果與GenBank中CAT基因序列的同源性為99%，因此確定構(gòu)建的重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。17
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]脂筏標(biāo)記蛋白flotillin-2生理功能的研究進(jìn)展[J]. 趙峰,張杰,李麗. 中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2012(01)
本文編號(hào)：3224745
【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市
【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
CAT-01F、CAT-02F、CAT-03F的PCR擴(kuò)增結(jié)果
圖 2.2 CAT-OIF. CAT-02F、CAT-03F 的 PCR 產(chǎn)物膠回收結(jié)果Fig.2.1 PCR products of CAT-OIF、CAT-02F、CAT-03F分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1: CAT-0】F擴(kuò)增產(chǎn)物；2: CAT-02F Jf增產(chǎn)物；3: CADNA Marker; 1 :PCR product of CAT-01F;2:PCR product of CAT-02F;CAT-03F
37°C酶切3h后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，雙酶切鑒定結(jié)果如圖2.3。oooobpSjpjp . .7000bp焉 b ‘ _g|:P1 ooobp & pfw.EHgjM 3 ooobp50O5 巧,—..-fSS-^OObp::_bp圖2,3重組質(zhì)粒的雙酶切鑒定結(jié)果Fig2.3 Restriction enzyme digestion analysis of the recombinant plasmidMl、M2: DNA 分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1: pcDNA3,l/Myc-His(-)B-CAT-01F 的瓜雙酶切結(jié)果；2 ： pcDNA3.1/Myc-His(-)B-CAT-02F 的 Xho I +所％7111 雙酶切結(jié)果；3： pcDNA3.1/Myc-His(-)B-CAT-0:3F 的 I雙酶切結(jié)果。M1:DL2000 DNA Marker;M2:DL10000 DNA Marker;1 :Product of pcDNA3.1 /Myc-His(-)B-CAT-01F digested by Xho I -^HindSS.；2 :Product ofpcDNA3.1/Myc-His(-)B-CAT-02F digested Xho I ；3:Product of pcDNA3.1/Myc-His(-)B-CAT-03F digested by Xho I根據(jù)酶切鑒定結(jié)果，最后將酶切鑒定結(jié)果為陽(yáng)性的質(zhì)粒送到北京金唯智公司測(cè)序。將測(cè)序結(jié)果用NCBI BLAST軟件比對(duì)結(jié)果顯示：CAT的測(cè)序結(jié)果與GenBank中CAT基因序列的同源性為99%，因此確定構(gòu)建的重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。17
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]脂筏標(biāo)記蛋白flotillin-2生理功能的研究進(jìn)展[J]. 趙峰,張杰,李麗. 中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2012(01)
本文編號(hào)：3224745
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