水牛是中國南方極具開發(fā)潛力的主要家畜,具有耐粗飼、乳品品質(zhì)好等優(yōu)點(diǎn)。但由于我國本地水牛產(chǎn)奶性能低下,致使奶水牛產(chǎn)業(yè)的發(fā)展緩慢。因此,如何應(yīng)用現(xiàn)代生物技術(shù)培育出高產(chǎn)奶量的水牛新品種是目前要解決的主要問題。本研究首先分析了水牛泌乳期和非泌乳期乳腺組織基因表達(dá)譜,尋找差異表達(dá)基因,研究水牛的泌乳機(jī)制,并為培育高產(chǎn)奶量的轉(zhuǎn)基因水牛提供豐富的候選基因素材；然后,探索轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)在水牛轉(zhuǎn)基因中的應(yīng)用,以期提高水牛轉(zhuǎn)基因的效率；構(gòu)建了乳腺特異性生長激素基因（GH）轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體,在乳腺細(xì)胞和乳腺組織中進(jìn)行檢測,分析外源GH基因的表達(dá)對乳蛋白等基因表達(dá)的影響；最后,采用隨機(jī)整合、轉(zhuǎn)座子主動整合等轉(zhuǎn)基因技術(shù)將重組GH基因?qū)胨；蚪M,生產(chǎn)GH轉(zhuǎn)基因的水牛胚胎,以期培育出高產(chǎn)奶量轉(zhuǎn)基因水牛新品種。本研究取得的主要結(jié)果總結(jié)如下：1.水牛泌乳期與非泌乳期基因表達(dá)譜及差異表達(dá)分析。構(gòu)建水牛泌乳期和非泌乳期乳腺組織基因表達(dá)譜,分析差異表達(dá)和泌乳期高豐度表達(dá)的基因,探討水牛泌乳的分子機(jī)制,也為轉(zhuǎn)基因水牛提供外源基因乳腺泌乳期特異性表達(dá)啟動子�；虮磉_(dá)譜序列拼接后獲得114,014個單一的Unigenes,與牛的基因... 

【文章來源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：133 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
目錄
縮略詞(Abbreviations)
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    第一章 乳腺發(fā)育與生長激素轉(zhuǎn)基因動物
        1 乳腺發(fā)育機(jī)理
        2 血液中的乳蛋白成份
        3 生長激素
            3.1 概況
            3.2 牛生長激素
        4 外源注射BST促進(jìn)產(chǎn)奶量
            4.1 BST處理安全性
            4.2 BST處理效果
            4.3 BST注射促進(jìn)泌乳的機(jī)制
        5 生長激素轉(zhuǎn)基因動物研究進(jìn)展
        6 乳腺特異性表達(dá)生長激素
        7 生長激素轉(zhuǎn)基因的影響
            7.1 對內(nèi)源性生長激素的影響
            7.2 對生長性狀的影響
        8 生長激素轉(zhuǎn)基因動物存在的問題與展望
    第二章 轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)基因動物研究進(jìn)展
        1 轉(zhuǎn)座子概述
        2 主動整合與轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)基因
        3 PB轉(zhuǎn)座子(PIGGYBAC TRANSPOSON)
        4 SB轉(zhuǎn)座子(SLEEPING BEAUTYTRANSPOSON)
        5 PP轉(zhuǎn)座子(PASSPORT TRANSPOSON)
    研究的目的與意義
第二部分 實(shí)驗內(nèi)容
    第三章 水牛乳腺基因表達(dá)譜分析與乳腺細(xì)胞永生化
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 試驗材料
            1.2 主要試劑與儀器
            1.3 實(shí)驗方法
            1.4 統(tǒng)計分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 水牛乳腺組織基因表達(dá)譜構(gòu)建
            2.2 基因表達(dá)譜中差異表達(dá)基因
            2.3 水牛泌乳期與非泌乳期期基因表達(dá)
            2.4 水牛乳腺上皮細(xì)胞(BME)及永生化
            2.5 永生化BME細(xì)胞,泌乳期與非泌乳期乳腺組織基因表達(dá)對比
        3 討論
            3.1 乳腺基因表達(dá)譜分析
            3.2 乳蛋白基因表達(dá)
            3.3 泌乳相關(guān)基因表達(dá)
            3.4 水牛乳腺上皮細(xì)胞的永生化
        4 小結(jié)
    第四章 水牛轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)基因的初步研究
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 藥品與試劑
            1.2 轉(zhuǎn)基因載體
            1.3 實(shí)驗方法
            1.4 統(tǒng)計分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 轉(zhuǎn)基因BFF細(xì)胞熒光觀察與neo整合檢測
            2.2 外源基因整合位點(diǎn)檢測
            2.3 隨機(jī)整合與轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)基因效率比較
            2.4 轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)基因系統(tǒng)的優(yōu)化
            2.5 轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)基因拷貝數(shù)檢測
        3 討論
            3.1 隨機(jī)整合與主動整合轉(zhuǎn)基因效率
            3.2 轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)基因體系優(yōu)化
            3.3 轉(zhuǎn)基因整合拷貝數(shù)
        4 小結(jié)
    第五章 生長激素轉(zhuǎn)基因水牛的初步研究
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料與試劑
            1.2 儀器與設(shè)備
            1.3 實(shí)驗方法
        2. 結(jié)果與分析
            2.1 人、奶牛、水牛GH基因
            2.2 GH轉(zhuǎn)基因在Bcap37乳腺細(xì)胞中的表達(dá)
            2.3 GH轉(zhuǎn)基因?qū)ME乳腺細(xì)胞基因表達(dá)的影響
            2.4 轉(zhuǎn)GH基因水牛胚胎發(fā)育觀察及早產(chǎn)轉(zhuǎn)基因克隆水牛的鑒定
        3. 討論
            3.1 生長激素基因及轉(zhuǎn)基因表達(dá)
            3.2 生長激素轉(zhuǎn)基因?qū)θ橄偌?xì)胞和乳腺組織的影響
            3.3 GH轉(zhuǎn)基因牛
        4 小結(jié)
研究結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄 (APPENDIX)
    附錄1：水牛生長激素基因編碼區(qū)序列GENBANK提交(JF894306)
    附表1：水牛乳腺泌乳期與非泌乳期乳腺差異表達(dá)基因-KEGG歸類
    附表2：泌乳期表達(dá)量上調(diào)的基因列表(部分)
    附表3：泌乳期表達(dá)量下調(diào)的基因列表(部分)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文



本文編號：3217530