鴨疫里默氏桿菌（Riemerella anatipestiferr,RA）是屬于黃桿菌科的革蘭氏陰性菌,是引起鴨和其它家禽傳染性漿膜炎和敗血癥的病原菌。本次試驗將研究Feo系統(tǒng)在鴨疫里默氏桿菌轉(zhuǎn)運亞鐵離子過程中的作用,以及缺失Feo系統(tǒng)對鴨疫里默氏桿菌定殖能力的影響。主要試驗結(jié)果如下:1 RA ATCC 11845株feoA,feoB和feoAB基因缺失株及回補菌株的構(gòu)建分別將feoA、feoB和feoAB基因的上下游約800 bp的同源臂及紅霉素抗性基因片段用PCR擴增并融合,融合的基因片段通過自然轉(zhuǎn)化的方法導(dǎo)入RAATCC 11845菌株中,再用紅霉素抗性篩選及PCR鑒定,成功構(gòu)建了RA ATCC11845（35）feoA,RA ATCC 11845（35）feoB和RA ATCC 11845（35）feoAB菌株。隨后,將feoA,feoB和feoAB基因克隆至穿梭質(zhì)粒pFY02,將重組質(zhì)粒通過結(jié)合轉(zhuǎn)移的方法轉(zhuǎn)入相應(yīng)缺失菌株中,成功構(gòu)建相應(yīng)的回補菌株。2 RA ATCC 11845株Feo系統(tǒng)的功能鑒定在TSB,含有60μmol/L Dip（二價鐵離子螯合劑）的TSB和含有40μ... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

擴增HighEXP，pRA0726ori及oriT基因Fig.1-1AmplificationofHighEXP,pRA0726oriandoriT注：M:DNAMarker,Lane1:HighEXP,Lane2:pRA0726ori,Lane3:oriT.

1-1 擴增 High EXP，pRA0726 ori 及 o Amplification of High EXP, pRA0726Marker, Lane 1: High EXP, Lane 2: pRA0PM5::oriT粒的結(jié)合轉(zhuǎn)移效率，本研究將轉(zhuǎn)性內(nèi)切酶 Sph I 和 Hind III 雙酶切段并連接兩個片段，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)性篩選后長出的菌落，再經(jīng) PCR電泳結(jié)果可以看出與預(yù)期結(jié)果一致將新構(gòu)建質(zhì)粒命名為 pPM5::oriT。

圖 1-3 PCR 鑒定 pRA0726 ori 基因Fig.1-3 The PCR identification of pRA072注： M: DNAMarker, Lane 1: pRA0726 pFY02片段插入穿梭質(zhì)粒上且提高基因的表多個酶切位點的高表達啟動子序列酶切 High EXP 序列和質(zhì)粒 pFY01，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至 E. coli DH5α，通過，再經(jīng) PCR 鑒定 High EXP 基因（其與預(yù)期結(jié)果一致（圖 1-4）。抽提質(zhì)命名為 pFY02。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]鴨疫里默氏桿菌RecA作為一種內(nèi)參蛋白的評價[J]. 廖何斌,劉馬峰,程安春.  中國生物工程雜志. 2015(06)
[2]革蘭氏陰性菌血紅素轉(zhuǎn)運系統(tǒng)結(jié)構(gòu)及功能特點[J]. 程興軍,劉馬峰,程安春.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報. 2014(09)



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