發(fā)布時間：2021-05-31 13:38

　　豬嗜血支原體（Mycoplasmas suis/M.suis）又稱豬附紅細(xì)胞體（porcine eperythrozoon/PE）,是傳染性貧血病（Infectious anemia）的病原體,危害全球養(yǎng)豬業(yè)。目前豬嗜血支原體被鑒定出至少有8種病原蛋白,其中MSG1蛋白黏附紅細(xì)胞和糖酵解的功能,被認(rèn)為是重要的病原蛋白。本研究成功制備5株抗MSG1蛋白的單克隆抗體,并鑒定獲得的3個表位（251-255aa,268-274aa,291-299aa）.為豬嗜血支原體表位疫苗研究奠定重要基礎(chǔ)。本研究同時還利用制備的單克隆抗體建立了MSG1蛋白雙抗體夾心ELISA方法,有望為建立豬嗜血支原體的快速診斷方法奠定基礎(chǔ)。研究內(nèi)容主要分為以下3部分：1.豬嗜血支原體MSG1蛋白單克隆抗體的制備以實(shí)驗(yàn)室保存的含豬嗜血支原體msg1基因的重組質(zhì)粒pBAD/His-msgl轉(zhuǎn)化至宿主菌Top10中,并誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組MSG1蛋白。將純化的重組蛋白MSG1與等量的弗氏佐劑混合乳化,皮下多點(diǎn)注射免疫BALB/c小鼠。取抗體檢測陽性的小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合,通過間接ELISA方法篩選出5株能穩(wěn)定分泌抗豬嗜血支原... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    第一章 豬嗜血支原體的研究進(jìn)展
        1 豬嗜血支原體的病原學(xué)
            1.1 起源與分類地位
            1.2 分布與危害
            1.3 培養(yǎng)特性
        2 病原蛋白
            2.1 MSG1
            2.2 HspA1
            2.3 其他病原蛋白
        3 豬嗜血支原體病的檢測方法
            3.1 形態(tài)學(xué)檢測
            3.2 免疫學(xué)方法檢測
            3.3 分子生物學(xué)檢測
        參考文獻(xiàn)
    第二章 單克隆抗體技術(shù)與抗原表位分析
        1 單克隆抗體技術(shù)和應(yīng)用
            1.1 單克隆抗體技術(shù)歷史與進(jìn)展
            1.2 單克隆抗體技術(shù)
            1.3 單克隆抗體的應(yīng)用
        2 抗原表位的研究方法
            2.1 表位的概念及研究意義
            2.2 表位預(yù)測方法
        參考文獻(xiàn)
第二部分 實(shí)驗(yàn)研究
    第三章 豬嗜血支原體MSG1蛋白的原核表達(dá)及單克隆抗體的制備
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 細(xì)胞、菌株、實(shí)驗(yàn)動物
            1.2 主要試劑
            1.3 重組抗原蛋白的制備及純化
        2 單克隆抗體的制備和鑒定
            2.1 動物免疫
            2.2 間接ELISA方法的建立
            2.3 單克隆抗體的制備
            2.4 單克隆抗體的鑒定
        3 結(jié)果
            3.1 抗原蛋白的制備和純化
            3.2 單克隆抗體的鑒定
        4 討論
        參考文獻(xiàn)
        ABSTRACT
    第四章 豬嗜血支原體MSG1蛋白B細(xì)胞表位的鑒定
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 毒株、質(zhì)粒及其他材料
            1.2 MSG1蛋白基因分段克隆引物設(shè)計(jì)及合成
            1.3 基因擴(kuò)增與重組表達(dá)載體的構(gòu)建
            1.4 目的蛋白的表達(dá)及鑒定
            1.5 ELISA方法鑒定MSG1 B細(xì)胞表位
            1.6 Western blot鑒定MSG1 B細(xì)胞表位
        2 結(jié)果
            2.1 pET-32a-MSG1-F2—F24基因片段的擴(kuò)增
            2.2 重組質(zhì)粒pET-32a-MSG1-F2—F24的構(gòu)建與鑒定
            2.3 重組蛋白的表達(dá),純化和抗原性鑒定
            2.4 ELISA方法鑒定MSG1 B細(xì)胞表位
            2.5 Western blot方法鑒定MSG1 B細(xì)胞表位
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
        ABSTRACT
    第五章 豬嗜血支原體MSG1蛋白雙抗體夾心ELISA檢測方法的建立
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 試劑、菌株、細(xì)胞及血清
            1.2 抗原蛋白的制備
            1.3 雙抗體夾心ELISA
            1.4 包被抗體的確定
            1.5 抗體的純化
            1.6 雙抗體夾心ELISA最佳反應(yīng)條件的選擇
            1.7 雙抗體夾心ELISA的性能評價
        2 結(jié)果
            2.1 包被抗體的確定
            2.2 單克隆抗體的純化
            2.3 雙抗體夾心ELISA最佳反應(yīng)條件的選擇
            2.4 雙抗體夾心ELISA的性能評價
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
        ABSTRACT
全文總結(jié)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]抗原表位鑒定方法的研究進(jìn)展[J]. 文雪霞,陳化蘭,熊永忠,王秀榮.  中國畜牧獸醫(yī). 2012(07)
[2]單克隆抗體在水產(chǎn)病原微生物檢測中的應(yīng)用[J]. 黃華,杜天舒,李強(qiáng),王軼南,李華.  中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報. 2012(02)
[3]豬嗜血支原體酶標(biāo)單抗阻斷ELISA檢測方法的建立[J]. 張長瑩,李玉峰,姜平.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2011(11)
[4]抗豬（嗜血）支原體MSG1蛋白單克隆抗體的制備及鑒定[J]. 張長瑩,李玉峰,曹彥瓊,宋艷華,陳聞,姜平.  畜牧與獸醫(yī). 2011(10)
[5]單克隆抗體制備技術(shù)的最新進(jìn)展及應(yīng)用前景[J]. 孔君,劉箐,韓躍武,王天昌,劉金芝.  免疫學(xué)雜志. 2011(02)
[6]Flag標(biāo)簽抗原的偶聯(lián)及其單克隆抗體的應(yīng)用研究[J]. 王云龍,李忠信,李恒思,李玉林,王繼美,劉旺根,李兆學(xué).  動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2011(01)
[7]淺談ELISA的影響因素[J]. 張玉霞,周杰釗.  中國民族民間醫(yī)藥. 2010(18)
[8]豬附紅細(xì)胞體MSG1蛋白的表達(dá)和多克隆抗體的制備[J]. 繆芬芳,劉明亞,李玉峰,陳聞,許家榮,王先煒,姜平.  畜牧與獸醫(yī). 2010(05)
[9]豬附紅細(xì)胞體雙抗夾心ELISA檢測方法的建立[J]. 朱凝瑜,袁聰俐,楊志彪,華修國.  上海交通大學(xué)學(xué)報(農(nóng)業(yè)科學(xué)版). 2010(02)
[10]B細(xì)胞表位定位的研究進(jìn)展[J]. 王洪林,陳明亮,劉文毅,楊帆,胡曉豐,楊斌,李晉濤.  生命科學(xué). 2009(02)

博士論文
[1]豬嗜血支原體病原特性、流行特點(diǎn)及與宿主互作機(jī)制研究[D]. 袁聰俐.上海交通大學(xué) 2009

碩士論文
[1]豬附紅細(xì)胞體雙抗夾心ELISA檢測方法及小鼠病理模型的建立[D]. 朱凝瑜.上海交通大學(xué) 2010
[2]乙腦病毒IgG抗體單克隆抗體捕獲ELISA檢測方法的建立[D]. 高曉艷.中國疾病預(yù)防控制中心 2008
[3]豬附紅細(xì)胞體病臨床調(diào)查與診斷分析[D]. 劉小燕.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004



本文編號：3208365