副豬嗜血桿菌病是由副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis,HPS）引起的以纖維素性漿膜炎、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎、胸膜炎和腦膜炎為特征的一種細(xì)菌性傳染病,給全球養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。HPS感染豬后會(huì)引起全身性炎癥和敗血癥,但其致病機(jī)理并不是很清楚。NOD1/2受體在識(shí)別病原微生物中發(fā)揮著重要的作用。NOD1/2通過接頭分子RIP2,激活下游的NF-κB和/或MAPKs信號(hào)通路,調(diào)控炎癥反應(yīng)的發(fā)生。本課題組之前的研究已證明HPS感染PK-15細(xì)胞可以激活TLRs介導(dǎo)的NF-κB和MAPKs（P38/JNK）信號(hào)通路并調(diào)控炎癥因子的分泌。在本研究中,我們進(jìn)一步探討胞質(zhì)內(nèi)的模式識(shí)別受體NOD1/2在HPS感染PK-15細(xì)胞引起炎癥反應(yīng)中的作用,并探索NOD1/2-RIP2信號(hào)通路與NF-κB和MAPKs的激活及其下游炎癥因子的關(guān)系。具體內(nèi)容如下:1.HPS感染PK-15細(xì)胞上調(diào)NOD2蛋白表達(dá)和RIP2磷酸化水平通過Western Blot方法檢測HPS感染PK-15細(xì)胞后NOD1和NOD2的變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn),HPS感染PK-15細(xì)胞后能夠顯著上調(diào)NOD2的表達(dá),并呈感染時(shí)間和劑量依... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 副豬嗜血桿菌病
    1.2 NOD信號(hào)通路
        1.2.1 NLRs結(jié)構(gòu)
        1.2.2 NOD1/2-RIP2信號(hào)通路
        1.2.3 NOD1/2 與疾病
    1.3 副豬嗜血桿菌（HPS）感染與炎癥反應(yīng)
        1.3.1 HPS感染PK-15細(xì)胞激活NF-κB和MAPKs（p38/JNK)信號(hào)通路
        1.3.2 HPS感染產(chǎn)生趨化因子
2 研究目的和意義
3 材料與方法
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)胞、菌株、質(zhì)粒和序列
        3.1.2 主要藥品與試劑盒
        3.1.3 主要培養(yǎng)基及其配制
        3.1.4 主要溶液的配制
        3.1.5 主要實(shí)驗(yàn)器材
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)菌培養(yǎng)
        3.2.2 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備（氯化鈣法）
        3.2.3 質(zhì)粒的制備與鑒定
        3.2.4 細(xì)胞的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)
        3.2.5 Western Blot檢測細(xì)胞中目的蛋白的表達(dá)
        3.2.6 細(xì)胞、感染細(xì)菌的細(xì)胞樣品總RNA的提取
        3.2.7 c DNA的合成
        3.2.8 SYBR Green I實(shí)時(shí)定量PCR
        3.2.9 相對(duì)m RNA表達(dá)水平的計(jì)算
        3.2.10 雙熒光素酶檢測實(shí)驗(yàn)
        3.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
4 結(jié)果與分析
    4.1 HPS感染PK-15細(xì)胞后NOD1/2 蛋白表達(dá)和RIP2磷酸化水平分析
        4.1.1 HPS感染PK-15細(xì)胞后NOD1/2 蛋白表達(dá)的動(dòng)力學(xué)分析
        4.1.2 HPS感染PK-15細(xì)胞后RIP2蛋白表達(dá)及其磷酸化水平分析
    4.2 NOD1/2-RIP2與HPS感染PK-15細(xì)胞激活NF-ΚB和MAPKS信號(hào)通路的分析
        4.2.1 NOD1、NOD2和RIP2干擾分子的干擾效率檢測
        4.2.2 NOD1/2、RIP2基因干擾對(duì)HPS感染PK-15細(xì)胞后NF-κB啟動(dòng)子活性的影響
        4.2.3 NOD1/2、RIP2基因干擾對(duì)HPS感染PK-15細(xì)胞后P65的磷酸化水平的影響
        4.2.4 NOD1/2、RIP2基因干擾對(duì)HPS感染PK-15細(xì)胞后MAPKs通路中P38、JNK和ERK磷酸化水平的影響
    4.3 NOD1/2、RIP2基因干擾對(duì)HPS感染PK-15細(xì)胞后CCL4、CCL5和IL-8表達(dá)的影響
5 討論
    5.1 HPS感染PK-15細(xì)胞激活NOD1/2-RIP2信號(hào)通路分子機(jī)制的研究
    5.2 HPS感染PK-15細(xì)胞激活NOD1/2 表達(dá)的研究
    5.3 HPS感染PK-15細(xì)胞激活NOD1/2 信號(hào)通路和TLRS互聯(lián)作用的研究
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3207997