產(chǎn)腸毒素大腸桿菌F4ac型（Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC F4ac）是導(dǎo)致仔豬腹瀉的主要病原菌之一,ETEC產(chǎn)生的腸毒素能引起仔豬腹瀉。ETEC表面的F4菌毛蛋白能與仔豬小腸的受體蛋白結(jié)合協(xié)助腸毒素進(jìn)入小腸上皮細(xì)胞并引起腹瀉,如果小腸能夠編碼受體蛋白則仔豬表現(xiàn)為腹瀉,不表達(dá)菌毛蛋白的個(gè)體即使感染了ETEC也不會(huì)發(fā)生腹瀉。因此,菌毛蛋白的受體基因決定仔豬對(duì)ETEC是否易感。豬13號(hào)染色體的MUC13基因被認(rèn)為是控制仔豬ETECF4ac⁺易感或抗性的候選基因。本文主要針對(duì)ETEC F4ac⁺菌的受體基因MUC13內(nèi)含子7以及全部外顯子中的SNP位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè),采用等位基因特異性PCR（Allele-specific PCR）方法對(duì)貴州地方豬種MUC13基因的多態(tài)性進(jìn)行群體研究;通過(guò)定點(diǎn)突變,將兩種基因型的編碼區(qū)連接到釀酒酵母表達(dá)載體pYES3-CT上,構(gòu)建重組質(zhì)粒pYES3-MUC13并進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)兩種目的蛋白。用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)兩種目的蛋白與ETEC F4ac⁺菌的結(jié)合能力,獲得了... 

【文章來(lái)源】：貴州大學(xué)貴州省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：93 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞表
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 研究背景
    2 大腸桿菌的致病機(jī)制
    3 F4ac型產(chǎn)腸毒素大腸桿菌
        3.1 F4ac型產(chǎn)腸毒素大腸桿菌
        3.2 腸毒素
    4 產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(ETEC)受體基因的研究進(jìn)展
        4.1 產(chǎn)腸毒素大腸桿菌受體基因的定位研究
        4.2 菌毛蛋白F4受體基因的研究進(jìn)展
    5 SNP檢測(cè)方法
    6 定點(diǎn)突變技術(shù)
    7 釀酒酵母表達(dá)系統(tǒng)
    8 研究目的及意義
第二章 材料與方法
    1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器試劑
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.4 試劑的配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 基因組DNA的提取與檢測(cè)
        2.2 MUC13基因內(nèi)含子7的AS-PCR檢測(cè)
        2.3 目的DNA片段的克隆轉(zhuǎn)化
        2.4 MUC13基因所有外顯子SNP位點(diǎn)的檢測(cè)
        2.5 黏附實(shí)驗(yàn)
        2.6 小腸組織RNA的提取及檢測(cè)
        2.7 豬小腸cDNA的合成及MUC13基因mRNA的擴(kuò)增
        2.8 ETECF4ac受體基因MUC13外顯子6變異位點(diǎn)定點(diǎn)突變
        2.9 ETECF4ac受體基因MUC13表達(dá)載體的構(gòu)建
    3 重組質(zhì)粒pYES3-CT-MUC13的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.1 重組蛋白MUC13-Thr/MUC13-Ser的提取及檢測(cè)
        3.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)重組蛋白MUC13-Thr/MUC13-Ser與ETEC F4ac的結(jié)合
第三章 結(jié)果與分析
    1 基因組DNA的提取
    2 ETECF4ac受體基因MUC13位點(diǎn)基因型分析
        2.1 ETECF4ac受體基因MUC13內(nèi)含子7候選SNP位點(diǎn)檢測(cè)
        2.2 ETECF4ac受體基因MUC13外顯子SNP位點(diǎn)分析
        2.3 ETECF4ac受體基因MUC13兩個(gè)SNP位點(diǎn)相關(guān)特異性分析
    3 黏附實(shí)驗(yàn)
    4 重組質(zhì)粒PYES3-CT-MUC13表達(dá)載體構(gòu)建及表達(dá)
        4.1 大白豬小腸及MUC13基因編碼區(qū)的擴(kuò)增
        4.2 ETECF4ac受體MUC13基因外顯子6定點(diǎn)突變
        4.3 ETECF4ac受體MUC13基因酵母表達(dá)載體構(gòu)建
        4.4 重組質(zhì)粒pYES3-CT-MUC13的誘導(dǎo)表達(dá)及檢測(cè)
        4.5 MUC13-Thr/MUC13-Ser蛋白分析
    5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MUC13-Thr/MUC13-Ser蛋白與ETECF4ac菌的結(jié)合
第四章 討論
    1 產(chǎn)腸毒素大腸桿菌F4ac與仔豬腹瀉
    2 ETECF4ac受體基因MUC13的內(nèi)含子與外顯子遺傳特異性分析
    3 釀酒酵母的表達(dá)分析
    4 ETECF4ac受體基因MUC13編碼蛋白對(duì)豬抗腹瀉性狀影響分析
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄
論文資助
在校期間已發(fā)表的文章
在校期間獲得的獎(jiǎng)勵(lì)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]一種二倍體片段測(cè)序中SNP檢測(cè)系統(tǒng)的構(gòu)建[J]. 鄧?yán)^忠,林偉森,甘四明,黃華盛,李梅,金濟(jì),何明昊.  華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(03)
[2]小麥TaGAPC定點(diǎn)突變體基因載體構(gòu)建及其原核表達(dá)[J]. 郭子平,翟清華,曾令鋒,鄧西平,楊淑慎.  華北農(nóng)學(xué)報(bào). 2016(01)
[3]蘇淮豬群體抗腹瀉基因MUC13和FUT1多態(tài)性分析及其抗腹瀉選育方案研究[J]. 方宇瑜,吳艷,高碩,李強(qiáng),李會(huì)智,付玲玲,任二都,李平華,黃瑞華.  畜牧與獸醫(yī). 2015(12)
[4]MUC13、FUT1基因在2個(gè)種豬核心群中的分子標(biāo)記輔助選擇研究[J]. 楊明,王青來(lái),劉敬順,劉珍云,溫淑賢,吳珍芳,羅旭芳.  華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(06)
[5]不同禽源致病性大腸桿菌毒力基因分布規(guī)律研究[J]. 胡會(huì)杰,張琪,周明旭,朱國(guó)強(qiáng).  中國(guó)家禽. 2015(10)
[6]MUC13基因第2內(nèi)含子插入/缺失突變對(duì)基因表達(dá)和經(jīng)濟(jì)性狀的影響[J]. 孫麗,朱世平,夏日煒,黃小國(guó),吳圣龍,包文斌.  中國(guó)畜牧雜志. 2015(09)
[7]SNP檢測(cè)方法的研究進(jìn)展[J]. 許家磊,王宇,后猛,李強(qiáng).  分子植物育種. 2015(02)
[8]MUC13的研究進(jìn)展[J]. 黃禮燕,張聲.  臨床與病理雜志. 2014(03)
[9]ChIFN-α釀酒酵母工程菌的發(fā)酵條件優(yōu)化[J]. 秦捷敏,宋莉,盧凌霄,趙德剛.  山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報(bào). 2014(02)
[10]抗仔豬斷奶前腹瀉豬專門(mén)化新品系的培育[J]. 唐建紅,鄧政,林峰,任軍,肖石軍,王闖,李錦炎,侯利娟,黃弋軒,劉先先,熊信威,黃路生,丁能水.  豬業(yè)科學(xué). 2013(10)

博士論文
[1]仔豬產(chǎn)腸毒素大腸桿菌（ETEC）F4ac受體基因的鑒定及功能驗(yàn)證[D]. 王文文.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]大腸桿菌Ⅰ型群體感應(yīng)功能研究[D]. 羊揚(yáng).揚(yáng)州大學(xué) 2014
[3]豬源腸毒素大腸桿菌K88ac和F18ac菌毛蛋白基因的表達(dá)及其在卵黃抗體生產(chǎn)中的應(yīng)用[D]. 王劼.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007

碩士論文
[1]腸外致病性大腸桿菌icmF基因功能研究和侵入腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)基因的篩選[D]. 張?zhí)?華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]人參皂苷Rh2酵母工程菌的構(gòu)建[D]. 許田慧.吉林大學(xué) 2016
[3]ETEC F4ac易感和抗性豬只小腸差異蛋白的鑒別[D]. 陳一杰.江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3207668