產(chǎn)腸毒素大腸桿菌F4ac型（Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC F4ac）是導致仔豬腹瀉的主要病原菌之一,ETEC產(chǎn)生的腸毒素能引起仔豬腹瀉。ETEC表面的F4菌毛蛋白能與仔豬小腸的受體蛋白結合協(xié)助腸毒素進入小腸上皮細胞并引起腹瀉,如果小腸能夠編碼受體蛋白則仔豬表現(xiàn)為腹瀉,不表達菌毛蛋白的個體即使感染了ETEC也不會發(fā)生腹瀉。因此,菌毛蛋白的受體基因決定仔豬對ETEC是否易感。豬13號染色體的MUC13基因被認為是控制仔豬ETECF4ac⁺易感或抗性的候選基因。本文主要針對ETEC F4ac⁺菌的受體基因MUC13內(nèi)含子7以及全部外顯子中的SNP位點進行檢測,采用等位基因特異性PCR（Allele-specific PCR）方法對貴州地方豬種MUC13基因的多態(tài)性進行群體研究;通過定點突變,將兩種基因型的編碼區(qū)連接到釀酒酵母表達載體pYES3-CT上,構建重組質(zhì)粒pYES3-MUC13并進行誘導表達兩種目的蛋白。用流式細胞術檢測兩種目的蛋白與ETEC F4ac⁺菌的結合能力,獲得了... 

【文章來源】：貴州大學貴州省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞表
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1 研究背景
    2 大腸桿菌的致病機制
    3 F4ac型產(chǎn)腸毒素大腸桿菌
        3.1 F4ac型產(chǎn)腸毒素大腸桿菌
        3.2 腸毒素
    4 產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(ETEC)受體基因的研究進展
        4.1 產(chǎn)腸毒素大腸桿菌受體基因的定位研究
        4.2 菌毛蛋白F4受體基因的研究進展
    5 SNP檢測方法
    6 定點突變技術
    7 釀酒酵母表達系統(tǒng)
    8 研究目的及意義
第二章 材料與方法
    1 實驗材料與儀器試劑
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗儀器
        1.3 實驗試劑
        1.4 試劑的配制
    2 實驗方法
        2.1 基因組DNA的提取與檢測
        2.2 MUC13基因內(nèi)含子7的AS-PCR檢測
        2.3 目的DNA片段的克隆轉化
        2.4 MUC13基因所有外顯子SNP位點的檢測
        2.5 黏附實驗
        2.6 小腸組織RNA的提取及檢測
        2.7 豬小腸cDNA的合成及MUC13基因mRNA的擴增
        2.8 ETECF4ac受體基因MUC13外顯子6變異位點定點突變
        2.9 ETECF4ac受體基因MUC13表達載體的構建
    3 重組質(zhì)粒pYES3-CT-MUC13的誘導表達
        3.1 重組蛋白MUC13-Thr/MUC13-Ser的提取及檢測
        3.2 流式細胞術檢測重組蛋白MUC13-Thr/MUC13-Ser與ETEC F4ac的結合
第三章 結果與分析
    1 基因組DNA的提取
    2 ETECF4ac受體基因MUC13位點基因型分析
        2.1 ETECF4ac受體基因MUC13內(nèi)含子7候選SNP位點檢測
        2.2 ETECF4ac受體基因MUC13外顯子SNP位點分析
        2.3 ETECF4ac受體基因MUC13兩個SNP位點相關特異性分析
    3 黏附實驗
    4 重組質(zhì)粒PYES3-CT-MUC13表達載體構建及表達
        4.1 大白豬小腸及MUC13基因編碼區(qū)的擴增
        4.2 ETECF4ac受體MUC13基因外顯子6定點突變
        4.3 ETECF4ac受體MUC13基因酵母表達載體構建
        4.4 重組質(zhì)粒pYES3-CT-MUC13的誘導表達及檢測
        4.5 MUC13-Thr/MUC13-Ser蛋白分析
    5 流式細胞術檢測MUC13-Thr/MUC13-Ser蛋白與ETECF4ac菌的結合
第四章 討論
    1 產(chǎn)腸毒素大腸桿菌F4ac與仔豬腹瀉
    2 ETECF4ac受體基因MUC13的內(nèi)含子與外顯子遺傳特異性分析
    3 釀酒酵母的表達分析
    4 ETECF4ac受體基因MUC13編碼蛋白對豬抗腹瀉性狀影響分析
第五章 結論
參考文獻
致謝
附錄
論文資助
在校期間已發(fā)表的文章
在校期間獲得的獎勵


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3207668