巴貝斯蟲是一類蜱傳性寄生于紅細(xì)胞內(nèi)的血液原蟲，能對各種家畜和人造成嚴(yán)重危害。臨床上表現(xiàn)出貧血、發(fā)熱、黃疸、血紅蛋白尿等。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，目前已經(jīng)建立了多種用于檢測巴貝斯蟲的方法，然而各種方法各有利弊，需要更敏感、快速、簡單的診斷方法。為此，本研究建立了套式PCR檢測方法，并利用該方法對豫西地區(qū)寵物犬只血液樣品的血液原蟲進(jìn)行鑒定和流行病學(xué)調(diào)查。⑴犬的巴貝斯蟲套式PCR檢測方法的建立。本研究根據(jù)GenBank中收錄的犬的巴貝斯蟲18S rRNA基因序列，設(shè)計(jì)合成三組6對特異性診斷引物，利用實(shí)驗(yàn)室中原有陽性標(biāo)準(zhǔn)品選出最優(yōu)組引物并建立套式PCR診斷方法。⑵利用套式PCR方法，對豫西地區(qū)（洛陽、平頂山、三門峽）各個縣市共20個動物醫(yī)院，15個大中型犬場（大于等于30只）的寵物犬進(jìn)行調(diào)查，共采集犬血樣2960份，捕捉媒介蜱蟲813只。采用常規(guī)染色法、常規(guī)PCR法、套式PCR法進(jìn)行檢測，并計(jì)算犬的巴貝斯蟲感染率。運(yùn)用SZM系列體視顯微鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)進(jìn)行蜱蟲觀察，以鑒定傳播犬巴貝斯蟲病的媒介中蜱蟲的種類。⑶將隨機(jī)抽取的25份陽性樣品送至華大基因科技服務(wù)有限公司進(jìn)行測序，測序結(jié)果先用NCBI中的BLA... 

【文章來源】：河南科技大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 巴貝斯蟲的病理學(xué)影響及分布情況
    1.2 犬巴貝斯蟲病概述
        1.2.1 傳染源
        1.2.2 傳播途徑
        1.2.3 易感動物
    1.3 實(shí)驗(yàn)室診斷
        1.3.1 病原學(xué)檢查
        1.3.2 免疫學(xué)診斷
        1.3.3 分子生物學(xué)診斷
第2章 犬巴貝斯蟲套式 PCR 檢測方法的建立
    2.1 目的與意義
    2.2 材料與方法
        2.2.1 主要試劑和器材
        2.2.2 犬血液的采集及全血基因組 DNA 的抽提
        2.2.3 設(shè)計(jì)合成引物
        2.2.4 PCR 產(chǎn)物凝膠電泳成像觀察
        2.2.5 巴貝斯蟲 18sRNA 基因的擴(kuò)增
        2.2.6 PCR 產(chǎn)物的克隆、濃度及序列測定
        2.2.7 套式 PCR 靈敏度測定
        2.2.8 套式 PCR 特異性的測定
        2.2.9 病原株和巴貝斯蟲及泰勒蟲系統(tǒng)進(jìn)化分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 三組引物分別擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)
        2.3.2 套式 PCR 擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)
        2.3.3 PCR 產(chǎn)物濃度測定
        2.3.4 套式 PCR 特異性實(shí)驗(yàn)
        2.3.5 套式 PCR 靈敏度實(shí)驗(yàn)
        2.3.6 序列測定同源性比較
        2.3.7 18s RNA 進(jìn)化樹的分析
    2.4 討論
        2.4.1 套式 PCR 檢測方法的建立
        2.4.2 18S rRNA 各分離株進(jìn)化樹分析
    2.5 小結(jié)
第3章 豫西地區(qū)犬巴貝斯蟲病及媒介調(diào)查
    3.1 材料與方法
        3.1.1 樣品來源及犬巴貝斯蟲病的判定標(biāo)準(zhǔn)
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 犬血涂片的染色鏡檢
        3.1.4 犬巴貝斯蟲的套式 PCR 檢測
        3.1.5 犬巴貝斯蟲病的判定標(biāo)準(zhǔn)
        3.1.6 犬體表蜱蟲的初步調(diào)查
        3.1.7 統(tǒng)計(jì)分析
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 犬巴貝斯蟲病臨床檢查
        3.2.2 犬血液涂片染色鏡檢
        3.2.3 犬血液基因組 DNA 的套式 PCR 檢測
        3.2.4 犬巴貝斯蟲病在全年調(diào)查中感染情況
        3.2.5 蜱蟲形態(tài)觀察及帶蟲率
    3.3 討論
        3.3.1 犬巴貝斯蟲病臨床癥狀
        3.3.2 犬巴貝斯蟲病在豫西地區(qū)的流行情況
        3.3.3 豫西地區(qū)犬生活場地蜱蟲類型和帶蟲率的情況
        3.3.4 犬巴貝斯蟲病發(fā)病因素分析
    3.4 小結(jié)
第4章 犬巴貝斯蟲病的診療體會
    4.1 犬巴貝斯蟲病的治療
    4.2 疑似病例的鑒別性診斷
    4.3 防制措施
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間的研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3206757