發(fā)布時間：2021-05-26 16:25

　　脂肪肝是圍產(chǎn)期奶牛高發(fā)的一個重要營養(yǎng)代謝性疾病,降低奶牛的生產(chǎn)性能。由于奶牛產(chǎn)后干物質(zhì)采食量（DMI）降低,而泌乳能量需求增加,致使奶牛機(jī)體進(jìn)入能量負(fù)平衡狀態(tài),而為了滿足妊娠和泌乳的能量需求而動員脂肪導(dǎo)致大量非酯化脂肪酸（NEFAs）進(jìn)入血液,形成高NEFA血癥。大量NEFA進(jìn)入肝臟后酯化形成甘油三酯（TG）,進(jìn)而導(dǎo)致脂肪肝的產(chǎn)生。血漿NEFA,脂肪肝和脂質(zhì)過氧化之間的聯(lián)系均與代謝應(yīng)激有關(guān)。細(xì)胞內(nèi)Ca²⁺的穩(wěn)態(tài)是細(xì)胞保持正常結(jié)構(gòu)和功能的前提與基礎(chǔ)。鈣池引發(fā)的鈣離子進(jìn)入（SOCE）是非興奮性細(xì)胞調(diào)控其細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度Ca²⁺的主要通道。Orai1是SOCE在細(xì)胞膜上的孔蛋白。本研究團(tuán)隊(duì)前期發(fā)現(xiàn)Orai1調(diào)控圍產(chǎn)期奶牛高NEFA引起的肝脂肪從頭合成通路,進(jìn)而形成脂肪肝。而Orai1是否通過代謝應(yīng)激引起肝脂沉積尚不明確。因此,本研究旨在明確高NEFA在肝脂沉積過程中是如何調(diào)控氧化應(yīng)激與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。本研究利用高NEFA刺激原代犢牛肝細(xì)胞構(gòu)建的肝脂沉積模型進(jìn)行研究。首先原代犢牛肝細(xì)胞經(jīng)1.2 mM NEFA分別刺激0.5、1、3、6、9、12 h。結(jié)果... 

【文章來源】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)黑龍江省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號說明
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 奶牛脂肪肝病的研究進(jìn)展
        1.1.1 奶牛脂肪肝病因?qū)W
        1.1.2 奶牛脂肪肝的分類及流行病學(xué)
        1.1.3 奶牛脂肪肝病的檢測
    1.2 圍產(chǎn)期奶牛氧化應(yīng)激與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的概述
        1.2.1 圍產(chǎn)期奶牛氧化應(yīng)激概述
        1.2.2 能量負(fù)平衡與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
        1.2.3 氧化應(yīng)激與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的關(guān)聯(lián)
    1.3 鈣池引發(fā)的鈣離子進(jìn)入調(diào)控機(jī)體氧化應(yīng)激與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的研究進(jìn)展
        1.3.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中鈣離子的作用
        1.3.2 鈣離子與線粒體的關(guān)系
        1.3.3 鈣池引發(fā)鈣離子的內(nèi)流
    1.4 試驗(yàn)的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 試劑與儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        2.1.2 主要試劑材料
        2.1.3 主要儀器
    2.2 原代犢牛肝細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
        2.3.1 原代犢牛肝細(xì)胞的分離
        2.3.2 原代犢牛肝細(xì)胞的培養(yǎng)
    2.3 siRNA的合成
    2.4 NEFA的準(zhǔn)備和細(xì)胞處理
        2.4.1 NEFA的制備
        2.4.2 肝細(xì)胞的分組與處理
    2.5 Western Blotting檢測
        2.5.1 總蛋白的提取
        2.5.2 蛋白濃度測定
        2.5.3 蛋白表達(dá)的測定
    2.6 Quantitative Real-Time PCR(qRT-PCR)檢測
        2.6.1 引物的設(shè)計(jì)與合成
        2.6.2 總RNA的提取
        2.6.3 反轉(zhuǎn)錄
        2.6.4 實(shí)時熒光定量PCR
    2.7 肝細(xì)胞氧化和抗氧化指標(biāo)檢測
    2.8 細(xì)胞ROS測定
    2.9 細(xì)胞中Ca~(2+)濃度測定
    2.10 免疫熒光分析
    2.11 線粒體鈣離子釋放檢測(mPTP)
    2.12 線粒體膜電位檢測(JC-1)
    2.13 透射電子顯微鏡觀察線粒體形態(tài)
    2.14 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 犢牛原代肝細(xì)胞中高NEFA介導(dǎo)氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
        3.1.1 犢牛原代肝細(xì)胞中高NEFA刺激對氧化應(yīng)激的影響
        3.1.2 犢牛原代肝細(xì)胞中NEFA刺激對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響
        3.1.3 抑制氧化應(yīng)激可緩解NEFA誘導(dǎo)肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
    3.2 犢牛原代肝細(xì)胞中高NEFA對胞內(nèi)Ca~(2+)濃度及Orai1 表達(dá)的作用
    3.3 犢牛肝細(xì)胞Orai1 調(diào)控高NEFA介導(dǎo)的氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
        3.3.1 肝細(xì)胞中Orai1對NEFA誘導(dǎo)氧化應(yīng)激的影響
        3.3.2 肝細(xì)胞中Orai1對NEFA誘導(dǎo)線粒體損傷的影響
        3.3.3 肝細(xì)胞中Orai1對NEFA誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響
        3.3.4 鈣離子對線粒體損傷的影響
4 討論
    4.1 Orai1對NEFA誘導(dǎo)的犢牛肝細(xì)胞氧化應(yīng)激與線粒體損傷的影響
    4.2 Orai1對NEFA誘導(dǎo)的犢牛肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響
    4.3 Orai1對NEFA誘導(dǎo)犢牛肝細(xì)胞氧化應(yīng)激與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激關(guān)系的影響
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]墾區(qū)規(guī)模牛場奶牛脂肪肝流行病學(xué)調(diào)查與分析[J]. 史文軍,林為民,李留江,黃新.  養(yǎng)殖與飼料. 2018(05)
[2]奶牛脂肪肝的診斷及監(jiān)測[J]. 郝寧,鄒蘇萍,陶煥青,明鵬飛,徐怡鐘,聶星燦,馮士彬,王希春,吳金節(jié),李玉.  生物學(xué)雜志. 2018(01)
[3]鈣離子依賴的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在細(xì)胞凋亡中作用研究進(jìn)展[J]. 張玉靜,鐘才高.  中國職業(yè)醫(yī)學(xué). 2017(03)
[4]內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣池操控鈣內(nèi)流研究進(jìn)展[J]. 鄭思思,項(xiàng)楠,趙福寬.  生物技術(shù)進(jìn)展. 2017(02)
[5]內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與疾病[J]. 陳娜子,姜潮,李校堃.  中國生物工程雜志. 2016(01)
[6]Bedside ultrasound in the diagnosis of nonalcoholic fatty liver disease[J]. Nancy Khov,Amol Sharma,Thomas R Riley.  World Journal of Gastroenterology. 2014(22)
[7]內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與肝臟疾病研究進(jìn)展[J]. 王洪巖,劉曉珺,杜雅菊,趙磊.  世界華人消化雜志. 2012(06)
[8]內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與肝臟損傷的治療[J]. 黃嘯,周植星,段為鋼,江振洲,孫麗新,張陸勇.  現(xiàn)代藥物與臨床. 2011(03)

碩士論文
[1]基于比較優(yōu)勢理論的中國奶牛養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)布局研究[D]. 李萌.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[2]奶牛脂肪肝綜合診斷指標(biāo)的篩選及氧化應(yīng)激對犢牛肝臟線粒體OCT活性的影響[D]. 王明瓊.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2015
[3]圍產(chǎn)期奶牛血中某些生化指標(biāo)與脂類代謝病關(guān)系的研究[D]. 薛瑞益.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號：3206683