為表達(dá)豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）BJ3毒株N蛋白及制備抗N蛋白單克隆抗體,將N基因克隆至原核表達(dá)載體pColdⅠ,利用大腸桿菌BL21表達(dá)出了N蛋白。將IPTG誘導(dǎo)的細(xì)菌反復(fù)凍融3次后超聲裂解,離心后分別收集上清和沉淀,用鎳柱親和層析分別純化,SDS-PAGE結(jié)果顯示,N蛋白主要以包涵體的形式存在。用純化的N蛋白免疫小鼠,取免疫小鼠脾細(xì)胞和SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合,間接ELISA法篩選陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞,3次亞克隆后獲取1株P(guān)RRSV N單抗,命名為F4。F4可與大腸桿菌BL21、不同PRRSV分離株表達(dá)的N蛋白發(fā)生特異性反應(yīng)。本試驗(yàn)為進(jìn)一步研究N蛋白的結(jié)構(gòu)、功能及建立快速診斷PRRSV方法奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2020,50(09)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 病毒、菌株、動(dòng)物和細(xì)胞
    1.2 主要試劑
    1.3 引物
    1.4 目的片段的PCR擴(kuò)增
    1.5 原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.6 PRRSV N基因的原核表達(dá)及其N蛋白的純化與鑒定
        1.6.1 PRRSV N基因的原核表達(dá)
        1.6.2 N蛋白的純化與鑒定
    1.7 動(dòng)物免疫
    1.8 N蛋白抗原性分析
        1.8.1 超免疫血清效價(jià)的ELISA檢測(cè)
        1.8.2 超免疫血清的Western-blotting鑒定
    1.9 單克隆抗體的制備
        1.9.1 飼養(yǎng)層細(xì)胞的制備
        1.9.2 細(xì)胞的融合與篩選
    1.1 0 單克隆抗體的鑒定
        1.1 0. 1 單克隆抗體的Western-blotting
        1.1 0. 2 單克隆抗體腹水的制備
        1.1 0. 3 單克隆抗體穩(wěn)定性的鑒定
        1.1 0. 4 單克隆抗體的IFA鑒定
2 結(jié)果
    2.1 目的基因的PCR與原核載體的構(gòu)建
    2.2 PRRSV N基因的原核表達(dá)及其N蛋白的純化與鑒定
        2.2.1 PRRSV N基因的原核表達(dá)
        2.2.2 N蛋白的純化與鑒定
    2.3 N蛋白抗原性分析
        2.3.1 超免疫血清效價(jià)的測(cè)定
        2.3.2 超免疫血清的Western-blotting鑒定
    2.4 單克隆抗體的制備
        2.4.1 細(xì)胞融合
        2.4.2 雜交瘤細(xì)胞的篩選
    2.5 單克隆抗體的鑒定
        2.5.1 單克隆抗體的Western-blotting鑒定
        2.5.2 單克隆抗體腹水效價(jià)及穩(wěn)定性的鑒定
        2.5.3 單克隆抗體的IFA鑒定
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬圓環(huán)病毒3型Cap蛋白的表達(dá)純化及單克隆抗體的制備[J]. 陳桂華,孫媛,周玲,李迪,白楊,麥凱杰,高金銘,馬靜云.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2019(01)
[2]豬繁殖與呼吸綜合征病毒核衣殼蛋白的原核可溶性表達(dá)和間接ELISA抗體檢測(cè)方法的初步建立[J]. 王俊,代軍飛,馬炳,丁耀忠,歐云文,劉永生,趙樂輝,張永光,張杰.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2018(04)

碩士論文
[1]PRRSV貴州分離株GZZJ11、GZBJ12對(duì)解旋酶DDX6、Mov10的影響[D]. 張升波.貴州大學(xué) 2019



本文編號(hào)：3204611