豬偽狂犬�。≒seudorabies, PR）是由豬偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus, PRV）引起的一種急性傳染病。近年來(lái)，豬偽狂犬病的感染區(qū)域不斷擴(kuò)大，對(duì)世界各地的養(yǎng)殖業(yè)都造成了不同程度的經(jīng)濟(jì)損失，因此，建立有效的檢測(cè)、診斷方法對(duì)控制乃至最終消滅豬偽狂犬病有著重要意義。本研究利用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)了PRV gB蛋白的主要抗原區(qū)；并分別以純化的豬偽狂犬病毒（S株）和gB重組蛋白為免疫原制備單克隆抗體，最終，篩選得到6株能夠穩(wěn)定分泌PRV單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株�；钚詸z測(cè)表明，雜交瘤細(xì)胞株2D8、3G7與豬瘟病毒（HCV）、豬圓環(huán)病毒（PCV）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）及正常PK-15細(xì)胞均不反應(yīng)，與豬偽狂犬病毒（PRV）有良好的反應(yīng)原性；制備的腹水能夠與PRV特異性結(jié)合。本研究為進(jìn)一步建立高效、特異、敏感的檢測(cè)方法及研制基因工程抗體奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：黑龍江大學(xué)黑龍江省

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
符號(hào)說(shuō)明
第1章 緒論
    1.1 偽狂犬病的研究進(jìn)展
        1.1.1 偽狂犬病的流行病學(xué)研究
        1.1.2 豬偽狂犬病臨床癥狀
        1.1.3 豬偽狂犬病的防治現(xiàn)狀
    1.2 豬偽狂犬病的檢測(cè)方法
        1.2.1 病毒的分離鑒定
        1.2.2 動(dòng)物接種試驗(yàn)
        1.2.3 免疫學(xué)診斷方法
        1.2.4 分子生物學(xué)診斷方法
    1.3 豬偽狂犬病毒的研究現(xiàn)狀
        1.3.1 豬偽狂犬病毒的結(jié)構(gòu)
        1.3.2 豬偽狂犬病毒的理化特性
        1.3.3 豬偽狂犬病毒的主要糖蛋白
    1.4 單克隆抗體的研究進(jìn)展
        1.4.1 單克隆抗體技術(shù)
        1.4.2 單克隆抗體的特點(diǎn)
        1.4.3 單克隆抗體的應(yīng)用
    1.5 研究目的及意義
第2章 豬偽狂犬病毒gB蛋白抗原表位區(qū)的克隆、表達(dá)及純化
    2.1 材料與儀器
        2.1.1 菌株、載體和病毒株
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 豬偽狂犬病毒的培養(yǎng)
        2.2.2 目的基因的獲得及擴(kuò)增
        2.2.3 重組克隆載體的構(gòu)建
        2.2.4 重組表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.5 表達(dá)產(chǎn)物的鑒定
        2.2.6 重組gB蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.2.7 重組gB蛋白的純化
    2.3 試驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.3.1 PRV 在雞胚成纖維細(xì)胞的增殖
        2.3.2 增殖病毒的鑒定
        2.3.3 PRV gB 蛋白目的片段的擴(kuò)增
        2.3.4 目的片段的測(cè)定與分析
        2.3.5 重組表達(dá)載體 pET-gB 的構(gòu)建
        2.3.6 表達(dá)蛋白的鑒定
        2.3.7 表達(dá)蛋白誘導(dǎo)條件的確定
        2.3.8 表達(dá)蛋白的純化
    2.4 本章小結(jié)
第3章 豬偽狂犬病毒單克隆抗體的制備
    3.1 材料與儀器
        3.1.1 毒株、細(xì)胞與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 主要試劑與藥品
        3.1.3 主要儀器與設(shè)備
    3.2 病毒的純化
    3.3 動(dòng)物免疫
    3.4 間接ELISA方法的建立
    3.5 SP2/0細(xì)胞的制備
    3.6 飼養(yǎng)層細(xì)胞的制備
    3.7 脾淋巴細(xì)胞的制備
    3.8 細(xì)胞融合
    3.9 陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞的篩選
    3.10 陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞的克隆
    3.11 雜交瘤細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇
    3.12 試驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.12.1 間接ELISA最佳工作條件的確定
        3.12.2 單克隆抗體的篩選
    3.13 本章小結(jié)
第4章 豬偽狂犬病毒重組gB蛋白單克隆抗體的活性分析
    4.1 材料與儀器
        4.1.1 細(xì)胞與動(dòng)物
        4.1.2 主要試劑與藥品
        4.1.3 主要儀器與設(shè)備
    4.2 單克隆抗體亞型的鑒定
    4.3 雜交瘤細(xì)胞染色體的計(jì)數(shù)分析
    4.4 單克隆抗體特異性的鑒定
    4.5 單克隆抗體穩(wěn)定性的檢測(cè)
    4.6 單克隆抗體腹水的制備
    4.7 腹水效價(jià)的測(cè)定
    4.8 PRV 在 PK-15 的擴(kuò)增
    4.9 豬偽狂犬病毒的鑒定
        4.9.1 豬偽狂犬病毒 DNA 的提取
        4.9.2 豬偽狂犬病毒的 PCR 鑒定
    4.10 間接免疫熒光試驗(yàn)
    4.11 試驗(yàn)結(jié)果與分析
        4.11.1 單克隆抗體的亞型鑒定
        4.11.2 雜交瘤細(xì)胞染色體的計(jì)數(shù)分析
        4.11.3 單克隆抗體特異性的鑒定
        4.11.4 單克隆抗體穩(wěn)定性的檢測(cè)
        4.11.5 單克隆抗體腹水效價(jià)的測(cè)定
        4.11.6 PRV 在 PK-15 的擴(kuò)增
        4.11.7 豬偽狂犬病毒的鑒定
        4.11.8 間接免疫熒光試驗(yàn)
    4.12 本章小結(jié)
第5章 結(jié)論
    5.1 PRVgB蛋白主要抗原表位的表達(dá)
    5.2 豬偽狂犬病毒單克隆抗體的制備
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間的學(xué)術(shù)成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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