生長抑素（Somatostatin,SS）抑制生長激素釋放和胃的蠕動、胃酸分泌、營養(yǎng)物質的吸收,阻礙飼料轉化和動物生長;在生產實踐中,如果使用SS主動免疫動物產生針對SS的特異抗體和它中和,可避免SS發(fā)揮負面作用。常用免疫方法包括注射、口服和噴霧等多種方式,其中口服免疫應用方便,可直接將疫苗投放于飼料中使用。但既往對使用SS免疫動物提高生產性能的研究多以DNA疫苗為載體,極少見到重組功能性SS蛋白的高效制備方法。飼用酶是常見的飼料添加劑,動物經口攝入飼用酶在胃腸道中發(fā)揮降解底物、促生長和調節(jié)腸道菌群等功效,因此飼用酶作為功能小肽（例如SS）的融合表達載體具有天然優(yōu)越性;其中木聚糖酶在豬、雞甚至反芻動物的飼料中均有成功應用實例,它的應用能降低食糜粘度、提高飼料轉化率。和另一種常用的飼料酶制劑纖維素酶不同,目前使用的木聚糖酶常常是單一酶類;而且我國使用畢赤酵母發(fā)酵制備重組木聚糖酶技術已經非常成熟。因此,理論上可以將木聚糖酶和SS進行融合表達以高效制備SS重組蛋白并口服免疫。本研究嘗試將三個不同微生物來源的木聚糖酶Np Xyl74（來自Neocallimastix patriciarum）、... 

【文章來源】：中國農業(yè)科學院北京市

【文章頁數】：81 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號對照表
第一章 緒論
    1.1 生長抑素的研究進展
        1.1.1 生長抑素的發(fā)現
        1.1.2 SS的種類
        1.1.3 生長抑素的分布
        1.1.4 SS-14的結構
        1.1.5 SS的作用
        1.1.6 SS的生理功能
        1.1.7 動物SS的人工干預調控研究
        1.1.8 生長抑素免疫的研究進展
    1.2 動物的免疫系統(tǒng)
    1.3 木聚糖酶研究進展
        1.3.1 木聚糖酶的分類
        1.3.2 木聚糖酶的催化機制
        1.3.3 木聚糖酶的表達
        1.3.4 木聚糖酶在飼料中作用機理
    1.4 本研究的目的與意義
第二章 生長抑素和木聚糖酶的融合表達
    2.1 實驗材料
        2.1.1 菌株和質粒
        2.1.2 實驗儀器、工具酶、試劑盒及其它生化試劑
        2.1.3 培養(yǎng)基及試劑配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 木聚糖酶-SS質粒的構建
        2.2.2 木聚糖酶和木聚糖酶-SS基因在畢赤酵母中的表達
        2.2.3 酶學性質測定
    2.3 實驗結果
        2.3.1 融合木聚糖酶-SS基因的克隆及表達載體的構建
        2.3.2 SS融合基因轉化子木聚糖酶酶活測定
        2.3.3 蛋白含量標準曲線的繪制及蛋白濃度測定
        2.3.4 木聚糖酶和木聚糖酶-SS酶學測定
    2.4 討論
    2.5 本章小結
第三章 融合表達的生長抑素抗原性和免疫原性研究
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗菌株與動物
        3.1.2 培養(yǎng)基、實驗試劑和實驗材料
    3.2 實驗儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 搖瓶水平的發(fā)酵培養(yǎng)及純化
        3.3.2 Western blot
        3.3.3 木聚糖酶-SS融合蛋白免疫小鼠
        3.3.4 ELISA檢測抗體效價
        3.3.5 收集小鼠血清
        3.3.6 斑點雜交(Dot-blot)
        3.3.7 小鼠的口服免疫
    3.4 實驗結果
        3.4.1 木聚糖酶-SS融合蛋白抗原性分析
        3.4.2 木聚糖酶-SS融合蛋白免疫原性分析
        3.4.3 小鼠口服免疫木聚糖酶-SS融合蛋白增重分析
    3.5 討論
    3.6 本章小結
第四章 木聚糖酶-生長抑素融合蛋白高效發(fā)酵表達
    4.1 實驗材料
        4.1.1 菌株
        4.1.2 實驗儀器、生化試劑
        4.1.3 培養(yǎng)基及溶劑配制
    4.2 實驗方法
        4.2.1 畢赤酵母上罐發(fā)酵表達
        4.2.2 酶活及蛋白濃度測定
    4.3 實驗結果
        4.3.1 畢赤酵母上罐發(fā)酵表達Np Xyl74-SS
        4.3.2 畢赤酵母上罐發(fā)酵表達Cb Xyn10C-SS
        4.3.3 畢赤酵母上罐發(fā)酵表達Bs Xyl11A-SS
    4.4 討論
    4.5 本章小結
第五章 全文結論
參考文獻
致謝
作者簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3202186