口蹄疫（Foot-and-mouth disease, FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth virus disease, FMDV）引起的一種急性、熱性和高度接觸性傳染病,主要感染牛、豬和羊等多種家畜和野生哺乳動(dòng)物,對(duì)畜牧產(chǎn)業(yè)和國(guó)民經(jīng)濟(jì)造成嚴(yán)重的損失。FMD已經(jīng)成世界性分布。雖然化學(xué)方法滅活的全病毒疫苗在FMD的預(yù)防和控制過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用,但是,在疫苗應(yīng)用實(shí)踐中凸顯出很多不足。如純化病毒顆粒難度大,病毒株儲(chǔ)存條件苛刻,疫苗接種免疫效果不穩(wěn)定等。更為重要的潛在危險(xiǎn)還有在疫苗大規(guī)模生產(chǎn)過(guò)程中,FMDV的未完全滅活和來(lái)自疫苗生產(chǎn)期間從生物安全設(shè)施中逃脫的活病毒等。此外,多年以來(lái)我國(guó)的FMD疫情表現(xiàn)了0、A、Asia I多個(gè)血清型交替流行,單一種類型疫苗難以成效,導(dǎo)致疫苗免疫效果不盡人意。本研究應(yīng)用PCR方法從嗜酸性乳桿菌基因組DNA中成功擴(kuò)增出約1200bp的S-層蛋白全基因。應(yīng)用CPH models-3.0（http://www.cbs.dtu.dk/services/CPHmodels）、 Swiss-Model和Swiss-PdbViewer等3種在線軟件成功預(yù)... 

【文章來(lái)源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：47 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 S-層蛋白概述
        1.1.1 乳酸桿菌S-層蛋白
        1.1.2 關(guān)于S-層蛋白的應(yīng)用
    1.2 關(guān)于口蹄疫的概述
        1.2.1 口蹄疫病毒及其結(jié)構(gòu)蛋白
        1.2.2 VP1蛋白質(zhì)的特征
        1.2.3 VP1蛋白的抗原性
    1.3 本研究的目的和意義
2 嗜酸乳桿菌MG株S-層蛋白的高級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)分析及原核表達(dá)
    2.1 材料
        2.1.1 質(zhì)粒與菌種
        2.1.2 工具酶及試劑
        2.1.3 儀器與設(shè)備
        2.1.4 引物設(shè)計(jì)
    2.2 方法
        2.2.1 嗜酸乳桿菌的s1p基因PCR擴(kuò)增
        2.2.2 嗜酸乳桿菌的s1p基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的純化
        2.2.3 嗜酸乳桿菌的s1p基因的連接與轉(zhuǎn)化
        2.2.4 SLP蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        2.2.5 原核表達(dá)載體pGEX-slp的構(gòu)建
        2.2.6 重組質(zhì)粒表達(dá)條件的優(yōu)化
        2.2.7 SDS-PAGE電泳
        2.2.8 Western blotting檢測(cè)
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 s助基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物
        2.3.2 pMD-s1p雙酶切鑒定
        2.3.3 嗜酸乳桿菌SLP蛋白質(zhì)的氨基酸序列的預(yù)測(cè)
        2.3.4 SLP蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        2.3.5 重組載體pGEX-slp的酶切鑒定和PCR鑒定
        2.3.6 s助基因原核表達(dá)條件的優(yōu)化
        2.3.7 SDS-PAGE與Western blotting分析結(jié)果
    2.4 討論
3 多型口蹄疫病毒VP1基因表位嵌入型S-層蛋白原核表達(dá)載體的構(gòu)建
    3.1 材料
        3.1.1 重組質(zhì)粒與VP1基因來(lái)源
        3.1.2 工具酶和試劑
        3.1.3 儀器與設(shè)備
    3.2 方法
        3.2.1 3型口蹄疫病毒的VP1的核苷酸序列分析
        3.2.2 3型口蹄疫病毒的VP1的氨基酸序列分析
        3.2.3 3型口蹄疫病毒的VP1的表面特性分析
        3.2.4 重組表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.5 重組表達(dá)質(zhì)粒的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.2.6 表達(dá)產(chǎn)物的鑒定
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 3型口蹄疫病毒的VP1的核酸分析
        3.3.2 3型口蹄疫病毒的VP1的氨基酸分析
        3.3.3 3型口蹄疫病毒的VP1的表面特性分析
        3.3.4 重組質(zhì)粒pGEX-s1p-MultiVP1的雙酶切鑒定
        3.3.5 SDS-PAGE電泳
        3.3.6 Western blotting檢測(cè)
    3.4 討論
4 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]負(fù)載重組口蹄疫病毒VP4蛋白的樹(shù)突狀細(xì)胞啟動(dòng)的T細(xì)胞應(yīng)答[J]. 安鵬麗,李娜,李麗敏,張麗,張雷,高云歡,王家鑫.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2012(10)
[2]A型口蹄疫病毒VP3基因的克隆及原核表達(dá)[J]. 劉航,楊曉燕,劉明,趙海波,郭華花,田永強(qiáng).  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2012(06)
[3]乳酸桿菌S-層蛋白對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌黏附及入侵Caco-2細(xì)胞的拮抗作用[J]. 李鵬成,葉小蘭,王志勝,庾慶華,楊倩.  微生物學(xué)報(bào). 2010(09)
[4]幾種乳酸菌S-層蛋白的普查以及slp基因的克隆與序列分析[J]. 雙杰,包秋華,永勝,王艷霞,張和平,格日勒?qǐng)D.  中國(guó)乳品工業(yè). 2010(08)
[5]Asia 1型口蹄疫病毒VP1基因的表達(dá)鑒定及其多抗制備[J]. 朱遠(yuǎn)茂,任憲剛,史鴻飛,高欲燃,于作,馮軍科,相文華,薛飛.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2010(04)
[6]口蹄疫新型疫苗研究進(jìn)展[J]. 曹軼梅,盧曾軍,田飛鵬,劉在新.  微生物學(xué)通報(bào). 2009(11)
[7]含RGD受體結(jié)合位點(diǎn)口蹄疫病毒Asia1/JS/China/2005株的拯救及初步鑒定[J]. 李平花,白興文,曹偉軍,盧曾軍,孫普,殷宏,劉在新.  微生物學(xué)報(bào). 2009(07)
[8]一種重組口蹄疫疫苗的原核表達(dá)、純化及其活性檢測(cè)[J]. 董博翰,王華,胡小平,房明麗,張永勝,張培因,王麗穎.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2009(02)
[9]Asia Ⅰ口蹄疫vp2蛋白單克隆抗體的制備及單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法的建立[J]. 向敏,張克山,盧順,蔡利軍,羅勇,張建民,何華,王勤剛,吳斌.  生物工程學(xué)報(bào). 2008(09)
[10]亞洲1型口蹄疫病毒衣殼蛋白前體P1-2A基因和蛋白酶3C基因在昆蟲(chóng)細(xì)胞中的共表達(dá)[J]. 信愛(ài)國(guó),李華春,廖德芳,李樂(lè),高林,楊永欽,張念祖,陳保善.  中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào). 2008(06)

博士論文
[1]A、O型口蹄疫雙價(jià)疫苗研究[D]. 邵寒娟.廈門(mén)大學(xué) 2004

碩士論文
[1]AsiaⅠ型FMDV滅活疫苗毒株不同宿主系傳代中VP1基因的遺傳變異研究[D]. 朱晶晶.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
[2]AsiaⅠ型口蹄疫雙效表達(dá)載體構(gòu)建及表達(dá)[D]. 韓曉榮.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
[3]嗜酸乳桿菌發(fā)酵豆乳工藝及其凝膠特性的研究[D]. 姜濤.浙江工商大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3201899