埃博拉病毒（Ebola virus,EBOV）屬于絲狀病毒屬,能引起人類和非人靈長類嚴(yán)重的出血熱,具有50%⁹0%的死亡率,對全球公共衛(wèi)生安全造成嚴(yán)重威脅,據(jù)WHO報(bào)道,截止2016年6月10日,全球已確診及疑似感染病例28 616,其中死亡人數(shù)達(dá)11 310,且于2018年5月8日在剛果金再發(fā)暴發(fā),截至5月21日此次暴發(fā)累計(jì)疑似病例58例,其中28例確診,27人死亡。蘇丹型埃博拉病毒（Sudan virus,SUDV）引起的蘇丹型埃博拉病毒病曾暴發(fā)于1976、1979、2000、2004、2011以及2012年,平均死亡率為53.76%,是除扎伊爾型埃博拉病毒（Zaire Ebolavirus,ZEBOV）外致死率及暴發(fā)率最高的病毒亞型,但是目前為止仍沒有上市的可有效預(yù)防或控制蘇丹型埃博拉病毒病頻發(fā)暴發(fā)的疫苗和藥物。因此研發(fā)一種安全有效的針對SUDV的疫苗對預(yù)防和控制SUDV的感染具有重要的意義。病毒樣顆粒（Virus-like particles,VLPs）是由病毒的一種或多種結(jié)構(gòu)蛋白組成的高度有序的重復(fù)結(jié)構(gòu),VLPs依賴于病毒蛋白自然結(jié)合的天然能力,形成與活... 

【文章來源】：軍事科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞表
摘要
Abstract
前言
第一章 蘇丹型埃博拉病毒抗體間接ELISA檢測方法的建立
    1.1 材料
        1.1.1 菌株、載體和血清
        1.1.2 試劑和儀器
        1.1.3 溶液配制
    1.2 方法
        1.2.1 引物設(shè)計(jì)與合成
        1.2.2 目的片段的擴(kuò)增及重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.2.3 SUDV GP重組蛋白表達(dá)及純化
        1.2.4 SUDV GP抗體間接ELISA檢測方法的建立
        1.2.5 ELISA方法的驗(yàn)證
    1.3 結(jié)果
        1.3.1 GP基因的擴(kuò)增與重組表達(dá)質(zhì)粒的鑒定
        1.3.2 SUDV GP重組蛋白的表達(dá)及純化
        1.3.3 重組蛋白SUDV GP的鑒定
        1.3.4 SUDV GP抗體間接ELISA檢測方法的建立
        1.3.5 ELISA方法的驗(yàn)證
    1.4 討論
    1.5 小結(jié)
第二章 蘇丹型埃博拉病毒病毒樣顆粒的構(gòu)建與鑒定
    2.1 材料
        2.1.1 基因、載體、細(xì)胞及抗體
        2.1.2 主要試劑及試劑盒
        2.1.3 主要溶液及配方
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 基因合成
        2.2.2 引物設(shè)計(jì)及合成
        2.2.3 SUDV GP和VP40片斷擴(kuò)增及純化回收
        2.2.4 重組質(zhì)粒pFD-GP-GP和pFD-VP40-VP40的構(gòu)建
        2.2.5 重組桿粒rBacmid-GP-GP和rBacmid-VP40-VP40的制備
        2.2.6 重組桿粒rBacmid-GP-GP和rBacmid-VP40-VP40的鑒定
        2.2.7 重組桿狀病毒rBac-GP-GP和rBac-VP40-VP40的拯救
        2.2.8 重組桿狀病毒rBac-GP-GP和rBac-VP40-VP40的鑒定
        2.2.9 蘇丹型埃博拉病毒病毒樣顆粒的制備
        2.2.10 蘇丹型埃博拉病毒病毒樣顆粒的鑒定
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 SUDV GP基因和VP40基因的擴(kuò)增
        2.3.2 重組質(zhì)粒pFD-GP-GP和pFD-VP40-VP40的鑒定
        2.3.3 重組桿粒rBacmid-GP-GP和rBacmid-VP40-VP40的鑒定
        2.3.4 重組桿狀病毒rBac-GP-GP和rBac-VP40-VP40的鑒定
        2.3.5 蘇丹型埃博拉病毒病毒樣顆粒的鑒定
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 蘇丹型埃博拉病毒病毒樣顆粒實(shí)驗(yàn)免疫研究
    3.1 材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        3.1.2 免疫原及佐劑
        3.1.3 試劑
        3.1.4 溶液配制
    3.2 方法
        3.2.1 最佳佐劑的篩選
        3.2.2 小鼠免疫
        3.2.3 ELISA檢測SUDV VLP免疫小鼠IgG抗體
        3.2.4 假病毒檢測SUDV VLP免疫小鼠中和抗體
        3.2.5 B細(xì)胞活化流式分析
        3.2.6 IFN-γ與IL-4酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測
        3.2.7 ELISA檢測細(xì)胞因子
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 最佳佐劑的篩選
        3.3.2 SUDV VLPs免疫小鼠抗體效價(jià)檢測
        3.3.3 免疫小鼠淋巴結(jié)B細(xì)胞活化
        3.3.4 IFN-γ與IL-4分泌檢測
        3.3.5 ELISA檢測細(xì)胞因子分泌量
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 結(jié)論和展望
參考文獻(xiàn)
作者在學(xué)期間取得的學(xué)術(shù)成果
主要簡歷
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]埃博拉病毒包膜糖蛋白研究進(jìn)展[J]. 丁國永,王志玉,高璐,姜寶法.  病毒學(xué)報(bào). 2013(02)
[2]埃博拉病毒NP蛋白的單克隆抗體制備及抗原肽的定位[J]. 王曉杜,劉陽,王皓婷,史子學(xué),趙凡凡,魏建超,邵東華,馬志永.  生物工程學(xué)報(bào). 2012(11)

博士論文
[1]中東呼吸綜合征冠狀病毒病毒樣顆粒的構(gòu)建與應(yīng)用研究[D]. 王翀.東北林業(yè)大學(xué) 2016
[2]狂犬病病毒樣顆粒的構(gòu)建、制備及免疫效果評價(jià)[D]. 齊瑛琳.吉林大學(xué) 2015

碩士論文
[1]PPRV病毒樣顆粒的構(gòu)建、制備及免疫原性研究[D]. 閆飛虎.中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2016
[2]狂犬病病毒樣顆粒免疫原的制備與實(shí)驗(yàn)免疫研究[D]. 孫宏宇.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[3]重組埃博拉VLP疫苗制備及免疫效果初步研究[D]. 任天宇.寧夏醫(yī)科大學(xué) 2015



本文編號：3196845