牛病毒性腹瀉/粘膜�。˙ovineviraldiarrhea/mucosaldisease）是由牛病毒性腹瀉病毒引起的、主要發(fā)生于牛的一種急性、熱性傳染病，其臨診特征為黏膜發(fā)炎、糜爛、壞死和腹瀉。本病呈世界性分布，廣泛存在于歐美等許多養(yǎng)牛業(yè)發(fā)達的國家。自1980年以來我國從國外引進奶牛和種牛，將本病傳入我國，并對病毒進行了分離鑒定。發(fā)達國家針對感染牛群多采取大量淘汰或屠殺，目前尚無有效的疫苗對BVDV進行預防，給畜牧業(yè)生產(chǎn)造成巨大的經(jīng)濟損失，促使人們不斷尋求新的防治BVDV的途徑，以便更好的控制該病的發(fā)生和流行。自雜交瘤細胞技術(shù)問世，單克隆抗體已被廣泛用于疾病的診斷和治療�？贵w來自于有機體，使用過程中無毒性，在人們看來抗體用于治療疾病似乎具有無限的潛力。然而傳統(tǒng)的單克隆抗體依然存在各種缺陷，比如：體積大、穩(wěn)定性差、制備工藝繁瑣、耗資高、必須人源化等。駝科動物和鯊魚體內(nèi)存在一種特殊的天然缺失輕鏈的重鏈抗體。這種重鏈抗體的可變區(qū)序列具有體積小、容易獲得、高水溶性和穩(wěn)定性、能夠識別溝槽或縫隙間的抗原表位及結(jié)合活性好等優(yōu)點，被稱作是單域抗體，又稱納米抗體。鑒于單域抗體的這些優(yōu)點，已被廣泛應用于... 

【文章來源】：石河子大學新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
英文縮略表
引言
第一章 文獻綜述
    綜述一 牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）的研究進展
        1 BVDV概述
            1.1 BVDV病毒特性
            1.2 病毒的生物型
        2 病毒基因組及其編碼蛋白
            2.1 病毒基因組
            2.2 編碼結(jié)構(gòu)蛋白
            2.3 編碼的非結(jié)構(gòu)蛋白
        3 BVDV感染抑制宿主的免疫反應
            3.1 BVDV感染抑制宿主適應性免疫
            3.2 BVDV感染抑制宿主固有免疫
    綜述二 納米抗體的研究進展
        1 納米抗體的概述
            1.1 納米抗體的發(fā)現(xiàn)
            1.2 納米抗體的結(jié)構(gòu)及功能
            1.3 納米抗體的特性
        2 納米抗體在抗感染中的應用
            2.1 VHH抗細菌的應用
            2.2 納米抗體用于抵抗真菌生物和寄生蟲
            2.3 VHH靶向病毒
第二章 試驗研究
    實驗一 牛病毒性腹瀉病毒E~(RNS)、E2蛋白的表達純化
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 目的基因的擴增
            2.2 重組質(zhì)粒PMD19-T-E~(RNS)/E2的鑒定結(jié)果
            2.3 重組表達質(zhì)粒的鑒定
            2.4 原核產(chǎn)物的表達
        3 討論
            3.1 牛病毒性腹瀉病毒囊膜蛋白E2、E~(RNS)的研究
            3.2 原核表達載體的構(gòu)建及蛋白的誘導表達
            3.3 包涵體純化應注意的問題
        4 小結(jié)
    實驗二 噬菌體展示ANTI-BVDV納米抗體文庫的構(gòu)建
        摘要
        1 材料和方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 病毒增殖
            2.2 常規(guī)微量法測定BVDV-NADL株TCID50
            2.3 全病毒抗原的滅活檢測
            2.4 免疫后抗體效價的測定
            2.5 總RNA的提取與分析
            2.6 納米抗體基因（VHH）的擴增
            2.7 重組質(zhì)粒PCANTAB5E-VHH酶切鑒定
            2.8 初始文庫的抗體序列多樣性和庫容量測定
            2.9 噬菌體抗體庫的庫容量測定
        3 討論
            3.1 駝源單域抗體基因序列的擴增
            3.2 噬菌體抗體庫的構(gòu)建
        4 小結(jié)
結(jié)論
創(chuàng)新點
參考文獻
附錄：主要試劑的配制
    一、分子克隆所需試劑的配制
    二、蛋白表達與純化所需試劑的配制
    三、細胞培養(yǎng)所需試劑的配制
    四、試劑盒操作說明書
致謝
作者簡介
導師評閱表


【參考文獻】：
期刊論文
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[2]具有熒光標簽的豬瘟病毒Erns蛋白在桿狀病毒表達系統(tǒng)中的表達[J]. 陳柳,余斌,云濤,倪征,華炯鋼,李雙茂.  華北農(nóng)學報. 2011(01)
[3]牦牛病毒性腹瀉/黏膜病和傳染性鼻氣管炎血清學調(diào)查[J]. 韓志輝,圈華,賀曉龍,魏科峰,額爾德尼扎布.  中國動物傳染病學報. 2010(06)
[4]牛病毒性腹瀉的研究概況[J]. 謝西鋒,崔保安.  中國獸醫(yī)雜志. 2001(11)
[5]雙抗體夾心ELISA檢測牛病毒性腹瀉病毒的研究[J]. 王新平,任文陟,朱維正,李佑民,宣華,常國權(quán),丁壯.  中國獸醫(yī)學報. 1995(03)
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本文編號：3195451