亞甲藍(lán)（Methylene blue,MB）是一種廣泛應(yīng)用于生物和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一種吩噻嗪鹽,研究表明MB在線粒體中可以充當(dāng)電子載體增強(qiáng)呼吸鏈功能,減輕細(xì)胞線粒體損傷、改善氧化應(yīng)激和提高線粒體中ATP生成。目前尚未見(jiàn)亞甲藍(lán)對(duì)生殖細(xì)胞保護(hù)作用的研究報(bào)道。因此,本研究旨在探討亞甲藍(lán)對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟（In Vitro Maturation,IVM）和孤雌胚胎體外發(fā)育的影響,為進(jìn)一步優(yōu)化豬卵母細(xì)胞體外成熟體系提供理論依據(jù)。首先探討IVM液添加不同濃度MB（對(duì)照組:0nM;試驗(yàn)組:10nM、50nM、100nM、200nM）處理40h-44h后對(duì)豬卵母細(xì)胞的影響。通過(guò)統(tǒng)計(jì)卵丘細(xì)胞擴(kuò)展情況及卵母細(xì)胞第一極體排出率、MⅡ期卵母細(xì)胞孤雌激活后早期胚胎卵裂率、囊胚率,得出較優(yōu)MB處理濃度。結(jié)果顯示,體外成熟培養(yǎng)液中添加10nmol/L濃度MB組的卵丘細(xì)胞擴(kuò)展分值（2.588±0.018）和卵母細(xì)胞第一極體排出率（69.73±3.56）顯著高于0nmol/L對(duì)照組（2.372±0.029、60.13±3.31）（P<0.05）;隨后,孤雌激活早期胚胎發(fā)育后顯示,10nmol/L處理組的卵裂率（84.... 

【文章來(lái)源】：貴州大學(xué)貴州省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
文獻(xiàn)綜述
    1.卵母細(xì)胞體外成熟研究進(jìn)展
        1.1 卵母細(xì)胞的發(fā)育
            1.1.1 卵母細(xì)胞核成熟
            1.1.2 卵母細(xì)胞質(zhì)成熟
        1.2 影響卵母細(xì)胞體外成熟的因素
            1.2.1 卵母細(xì)胞來(lái)源
            1.2.2 卵泡和卵泡液
            1.2.3 卵丘顆粒細(xì)胞
            1.2.4 培養(yǎng)體系
            1.2.5 氧化應(yīng)激
    2.線粒體與卵細(xì)胞成熟
        2.1 卵細(xì)胞中線粒體形態(tài)及分布
        2.2 卵細(xì)胞中線粒體功能
    3.亞甲藍(lán)研究進(jìn)展
        3.1 關(guān)于亞甲藍(lán)
        3.2 亞甲藍(lán)的分子結(jié)構(gòu)和生化特性
        3.3 亞甲藍(lán)對(duì)線粒體作用
        3.4 亞甲藍(lán)具有增強(qiáng)能量代謝和抗氧化劑功能
        3.5 亞甲藍(lán)副作用
試驗(yàn)研究
    試驗(yàn)一 亞甲藍(lán)對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟及孤雌胚胎發(fā)育的影響
        1.材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 豬卵巢的來(lái)源
                1.1.2 主要儀器
                1.1.3 主要試劑
            1.2 方法
                1.2.1 試劑配制
                1.2.2 豬卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體(COCs)的收集
                1.2.3 MB對(duì)COCs起始階段豬卵母細(xì)胞體外成熟的影響
                1.2.4 MB對(duì)PBI起始階段孤雌胚體外發(fā)育的影響
            1.3 數(shù)據(jù)處理
        2.結(jié)果
            2.1 不同發(fā)育階段豬卵母細(xì)胞形態(tài)特征
                2.1.1 卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體
                2.1.2 卵母細(xì)胞中第一極體
                2.1.3 各階段卵母細(xì)胞卵裂
                2.1.4 卵母細(xì)胞囊胚
            2.2 MB對(duì) COCs起始階段豬卵母細(xì)胞體外成熟的影響
                2.2.1 COCs擴(kuò)展指數(shù)分析
                2.2.2 第一極體(PBI)排出率統(tǒng)計(jì)
                2.2.3 孤雌激活后卵裂率、囊胚率統(tǒng)計(jì)
            2.3 MB對(duì)PBI起始階段孤雌胚體外發(fā)育的影響
        3.分析與討論
        4.小結(jié)
    試驗(yàn)二 亞甲藍(lán)對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟作用機(jī)制的研究
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 豬卵巢的來(lái)源
                1.1.2 主要儀器
                1.1.3 主要試劑
                1.1.4 引物設(shè)計(jì)及合成
            1.2 試驗(yàn)方法
                1.2.1 卵母細(xì)胞的收集
                1.2.2 亞甲藍(lán)對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟的影響
                1.2.3 活性氧簇(ROS)含量的檢測(cè)
                1.2.4 總谷胱甘肽(GSH)含量測(cè)定
                1.2.5 線粒體膜電位(JC-1)含量測(cè)定
                1.2.6 卵母細(xì)胞微量RNA提取反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增
                1.2.7 普通PCR
                1.2.8 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            1.3 數(shù)據(jù)分析
        2 結(jié)果
            2.1 成熟液中添加亞甲藍(lán)對(duì)豬卵母細(xì)胞內(nèi)ROS水平影響
            2.2 成熟液中添加亞甲藍(lán)對(duì)豬卵母細(xì)胞內(nèi)總谷胱甘肽含量的影響
            2.3 成熟液中添加亞甲藍(lán)對(duì)豬卵母細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位(JC-1)含量測(cè)定
            2.4 成熟液中添加亞甲藍(lán)對(duì)卵母細(xì)胞基因表達(dá)的影響
            2.5 成熟液中添加亞甲藍(lán)對(duì)豬卵母細(xì)胞母體發(fā)育基因表達(dá)的影響
        3 分析與討論
        4 小結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3194670