亞甲藍（Methylene blue,MB）是一種廣泛應用于生物和醫(yī)學領域的一種吩噻嗪鹽,研究表明MB在線粒體中可以充當電子載體增強呼吸鏈功能,減輕細胞線粒體損傷、改善氧化應激和提高線粒體中ATP生成。目前尚未見亞甲藍對生殖細胞保護作用的研究報道。因此,本研究旨在探討亞甲藍對豬卵母細胞體外成熟（In Vitro Maturation,IVM）和孤雌胚胎體外發(fā)育的影響,為進一步優(yōu)化豬卵母細胞體外成熟體系提供理論依據。首先探討IVM液添加不同濃度MB（對照組:0nM;試驗組:10nM、50nM、100nM、200nM）處理40h-44h后對豬卵母細胞的影響。通過統(tǒng)計卵丘細胞擴展情況及卵母細胞第一極體排出率、MⅡ期卵母細胞孤雌激活后早期胚胎卵裂率、囊胚率,得出較優(yōu)MB處理濃度。結果顯示,體外成熟培養(yǎng)液中添加10nmol/L濃度MB組的卵丘細胞擴展分值（2.588±0.018）和卵母細胞第一極體排出率（69.73±3.56）顯著高于0nmol/L對照組（2.372±0.029、60.13±3.31）（P<0.05）;隨后,孤雌激活早期胚胎發(fā)育后顯示,10nmol/L處理組的卵裂率（84.... 

【文章來源】：貴州大學貴州省 211工程院校

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
文獻綜述
    1.卵母細胞體外成熟研究進展
        1.1 卵母細胞的發(fā)育
            1.1.1 卵母細胞核成熟
            1.1.2 卵母細胞質成熟
        1.2 影響卵母細胞體外成熟的因素
            1.2.1 卵母細胞來源
            1.2.2 卵泡和卵泡液
            1.2.3 卵丘顆粒細胞
            1.2.4 培養(yǎng)體系
            1.2.5 氧化應激
    2.線粒體與卵細胞成熟
        2.1 卵細胞中線粒體形態(tài)及分布
        2.2 卵細胞中線粒體功能
    3.亞甲藍研究進展
        3.1 關于亞甲藍
        3.2 亞甲藍的分子結構和生化特性
        3.3 亞甲藍對線粒體作用
        3.4 亞甲藍具有增強能量代謝和抗氧化劑功能
        3.5 亞甲藍副作用
試驗研究
    試驗一 亞甲藍對豬卵母細胞體外成熟及孤雌胚胎發(fā)育的影響
        1.材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 豬卵巢的來源
                1.1.2 主要儀器
                1.1.3 主要試劑
            1.2 方法
                1.2.1 試劑配制
                1.2.2 豬卵丘卵母細胞復合體(COCs)的收集
                1.2.3 MB對COCs起始階段豬卵母細胞體外成熟的影響
                1.2.4 MB對PBI起始階段孤雌胚體外發(fā)育的影響
            1.3 數據處理
        2.結果
            2.1 不同發(fā)育階段豬卵母細胞形態(tài)特征
                2.1.1 卵丘卵母細胞復合體
                2.1.2 卵母細胞中第一極體
                2.1.3 各階段卵母細胞卵裂
                2.1.4 卵母細胞囊胚
            2.2 MB對 COCs起始階段豬卵母細胞體外成熟的影響
                2.2.1 COCs擴展指數分析
                2.2.2 第一極體(PBI)排出率統(tǒng)計
                2.2.3 孤雌激活后卵裂率、囊胚率統(tǒng)計
            2.3 MB對PBI起始階段孤雌胚體外發(fā)育的影響
        3.分析與討論
        4.小結
    試驗二 亞甲藍對豬卵母細胞體外成熟作用機制的研究
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 豬卵巢的來源
                1.1.2 主要儀器
                1.1.3 主要試劑
                1.1.4 引物設計及合成
            1.2 試驗方法
                1.2.1 卵母細胞的收集
                1.2.2 亞甲藍對豬卵母細胞體外成熟的影響
                1.2.3 活性氧簇(ROS)含量的檢測
                1.2.4 總谷胱甘肽(GSH)含量測定
                1.2.5 線粒體膜電位(JC-1)含量測定
                1.2.6 卵母細胞微量RNA提取反轉錄擴增
                1.2.7 普通PCR
                1.2.8 實時熒光定量PCR
            1.3 數據分析
        2 結果
            2.1 成熟液中添加亞甲藍對豬卵母細胞內ROS水平影響
            2.2 成熟液中添加亞甲藍對豬卵母細胞內總谷胱甘肽含量的影響
            2.3 成熟液中添加亞甲藍對豬卵母細胞內線粒體膜電位(JC-1)含量測定
            2.4 成熟液中添加亞甲藍對卵母細胞基因表達的影響
            2.5 成熟液中添加亞甲藍對豬卵母細胞母體發(fā)育基因表達的影響
        3 分析與討論
        4 小結
參考文獻
致謝
作者簡介



本文編號：3194670