病毒不能在細(xì)胞外繁殖,只有入侵到宿主細(xì)胞后才能復(fù)制并產(chǎn)生子代病毒粒子。病毒入侵宿主細(xì)胞時(shí)需要宿主細(xì)胞膜上受體蛋白的參與,同時(shí),這些受體蛋白也決定了不同病毒的宿主范圍及組織嗜性。因此,鑒定病毒的細(xì)胞受體,明確病毒的入侵機(jī)制,可為設(shè)計(jì)新型抗病毒藥物提供靶標(biāo),為疫苗研發(fā)提供新的思路,對(duì)病毒的防控和治療具有重要意義。豬瘟是由豬瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起的一種急性、烈性傳染病,在多個(gè)國(guó)家流行,給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。目前,在CSFV入侵方面的研究,僅發(fā)現(xiàn)了硫酸乙酰肝素酶（Heparan sulfate,HS）和層粘連蛋白（Laminin receptor,LamR）兩個(gè)吸附受體,且這兩個(gè)吸附受體都與CSFV的E^rns蛋白存在相互作用。然而,E1和E2蛋白足以介導(dǎo)CSFV的入侵,證明E^rns蛋白對(duì)CSFV的入侵不是必需的。同時(shí),還有研究表明,E2蛋白可能和某種細(xì)胞膜蛋白相互作用進(jìn)而促進(jìn)CSFV的入侵,但具體是哪種細(xì)胞膜蛋白尚不清楚。為了尋找影響CSFV入侵的細(xì)胞膜蛋白,我們分析了兩組CSFV感... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號(hào)對(duì)照表
第一章 緒論
    1.1 豬瘟與豬瘟病毒
        1.1.1 豬瘟
        1.1.2 豬瘟病毒
    1.2 豬瘟病毒囊膜蛋白的結(jié)構(gòu)及功能
        1.2.1 豬瘟病毒囊膜蛋白的結(jié)構(gòu)
        1.2.2 豬瘟病毒囊膜蛋白中的二硫鍵及其功能
        1.2.3 豬瘟病毒囊膜糖蛋白的糖基化修飾及其與病毒毒力的關(guān)系
        1.2.4 豬瘟病毒囊膜糖蛋白中的抗原表位
    1.3 豬瘟病毒入侵機(jī)制的研究進(jìn)展
        1.3.1 豬瘟病毒的吸附
        1.3.2 豬瘟病毒的入侵方式
        1.3.3 豬瘟病毒潛在的膜融合機(jī)制
    1.4 TAM受體蛋白
        1.4.1 TAM受體蛋白及其配體結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
        1.4.2 TAM受體的功能多樣性
        1.4.3 TAM受體蛋白與病毒感染
    1.5 本研究的目的和意義
第二章 MERTK促進(jìn)豬瘟病毒感染的機(jī)制研究
    2.1 材料和方法
        2.1.1 細(xì)胞、毒株和載體
        2.1.2 其他實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
        2.1.4 主要試劑的配制
        2.1.5 候選分子的siRNA設(shè)計(jì)及其序列
        2.1.6 siRNA下調(diào)及CSFV感染試驗(yàn)
        2.1.7 rCSFV-Rluc報(bào)告病毒的Rluc活性檢測(cè)
        2.1.8 細(xì)胞總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
        2.1.9 熒光定量RT-qPCR檢測(cè)不同靶基因的mRNA轉(zhuǎn)錄水平
        2.1.10 CSFV毒價(jià)的測(cè)定
        2.1.11 間接免疫熒光檢測(cè)CSFV試驗(yàn)
        2.1.12 內(nèi)源性MERTK蛋白的流式試驗(yàn)驗(yàn)證
        2.1.13 穩(wěn)定過表達(dá)MERTK的 PK-15 細(xì)胞系的構(gòu)建
        2.1.14 MERTK抗體封閉試驗(yàn)
        2.1.15 可溶性MERTK~(ED)-His蛋白和pGas6 蛋白的表達(dá)及純化
        2.1.16 可溶性MERTK~(ED)-His蛋白和LDC1267 對(duì)細(xì)胞活力的影響試驗(yàn)
        2.1.17 可溶性MERTK~(ED)-His蛋白阻斷試驗(yàn)
        2.1.18 豬源Gas6 蛋白和胎牛血清對(duì)CSFV感染影響的試驗(yàn)
        2.1.19 MERTK和 E2 蛋白的免疫共沉淀試驗(yàn)
        2.1.20 Western blotting試驗(yàn)
        2.1.21 可溶性MERTK~(ED)-His和 E2 蛋白的表面等粒子體共振(Surface plasmon resonance,SPR)試驗(yàn)
        2.1.22 MERTK和 CSFV E2 蛋白在293T細(xì)胞中的共定位試驗(yàn)
        2.1.23 可溶性MERTK~(ED)-His蛋白處理后對(duì)IFN-βmRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響
        2.1.24 抗MERTK多克隆抗體處理后對(duì)IFN-βmRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響
        2.1.25 MERTK在 CSFV入侵過程中的作用
        2.1.26 LDC1267抑制劑的處理試驗(yàn)
        2.1.27 MERTK在 MDBK和 BHK-21 細(xì)胞中的受體重建試驗(yàn)
        2.1.28 可溶性MERTK~(ED)-His對(duì) BVDV復(fù)制影響的檢測(cè)
        2.1.29 可溶性MERTK~(ED)-His對(duì)豬PRV TJ復(fù)制影響的檢測(cè)
        2.1.30 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.2.1 siRNA篩選結(jié)果
        2.2.2 確認(rèn)下調(diào)MERTK對(duì) CSFV復(fù)制的影響
        2.2.3 過表達(dá)MERTK對(duì) CSFV復(fù)制的影響
        2.2.4 抗體封閉對(duì)CSFV復(fù)制的影響
        2.2.5 可溶性MERTK~(ED)-His對(duì) CSFV復(fù)制的影響
        2.2.6 MERTK對(duì)基因2型CSFV復(fù)制的影響
        2.2.7 豬源Gas6 蛋白和胎牛血清對(duì)CSFV感染無(wú)影響
        2.2.8 MERTK與 CSFV E2 蛋白存在相互作用
        2.2.9 MERTK可促進(jìn)CSFV的入侵
        2.2.10 LDC1267對(duì)CSFV復(fù)制的影響
        2.2.11 LDC1267在CSFV感染后對(duì)宿主固有免疫的影響
        2.2.12 LDC1267對(duì)CSFV入侵的影響
        2.2.13 MERTK對(duì) PRV TJ和 BVDV復(fù)制的影響
    2.3 討論
第三章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬瘟病毒C株全長(zhǎng)cDNA感染性克隆的構(gòu)建及病毒拯救[J]. 鄒興啟,趙啟祖,范運(yùn)峰,朱元源,王琴,徐璐,范學(xué)政,寧宜寶.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(02)
[2]TAM受體的生物學(xué)功能[J]. 鄧婷婷,韓代書.  中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2010(04)
[3]豬瘟兔化弱毒疫苗的研究概況[J]. 吳文福,岑小清,任向陽(yáng).  廣東畜牧獸醫(yī)科技. 2009(06)
[4]從全長(zhǎng)cDNA克隆恢復(fù)豬瘟病毒方法的研究[J]. 范運(yùn)峰,趙啟祖,趙耘,鄒興啟,張仲秋,王琴,寧宜寶.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2009(06)
[5]豬瘟兔化弱毒疫苗——半個(gè)世紀(jì)的回顧[J]. 仇華吉,童光志,沈榮顯.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2005(08)



本文編號(hào)：3192088