病毒不能在細胞外繁殖,只有入侵到宿主細胞后才能復制并產生子代病毒粒子。病毒入侵宿主細胞時需要宿主細胞膜上受體蛋白的參與,同時,這些受體蛋白也決定了不同病毒的宿主范圍及組織嗜性。因此,鑒定病毒的細胞受體,明確病毒的入侵機制,可為設計新型抗病毒藥物提供靶標,為疫苗研發(fā)提供新的思路,對病毒的防控和治療具有重要意義。豬瘟是由豬瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起的一種急性、烈性傳染病,在多個國家流行,給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴重的經濟損失。目前,在CSFV入侵方面的研究,僅發(fā)現了硫酸乙酰肝素酶（Heparan sulfate,HS）和層粘連蛋白（Laminin receptor,LamR）兩個吸附受體,且這兩個吸附受體都與CSFV的E^rns蛋白存在相互作用。然而,E1和E2蛋白足以介導CSFV的入侵,證明E^rns蛋白對CSFV的入侵不是必需的。同時,還有研究表明,E2蛋白可能和某種細胞膜蛋白相互作用進而促進CSFV的入侵,但具體是哪種細胞膜蛋白尚不清楚。為了尋找影響CSFV入侵的細胞膜蛋白,我們分析了兩組CSFV感... 

【文章來源】：中國農業(yè)科學院北京市

【文章頁數】：75 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號對照表
第一章 緒論
    1.1 豬瘟與豬瘟病毒
        1.1.1 豬瘟
        1.1.2 豬瘟病毒
    1.2 豬瘟病毒囊膜蛋白的結構及功能
        1.2.1 豬瘟病毒囊膜蛋白的結構
        1.2.2 豬瘟病毒囊膜蛋白中的二硫鍵及其功能
        1.2.3 豬瘟病毒囊膜糖蛋白的糖基化修飾及其與病毒毒力的關系
        1.2.4 豬瘟病毒囊膜糖蛋白中的抗原表位
    1.3 豬瘟病毒入侵機制的研究進展
        1.3.1 豬瘟病毒的吸附
        1.3.2 豬瘟病毒的入侵方式
        1.3.3 豬瘟病毒潛在的膜融合機制
    1.4 TAM受體蛋白
        1.4.1 TAM受體蛋白及其配體結構特點
        1.4.2 TAM受體的功能多樣性
        1.4.3 TAM受體蛋白與病毒感染
    1.5 本研究的目的和意義
第二章 MERTK促進豬瘟病毒感染的機制研究
    2.1 材料和方法
        2.1.1 細胞、毒株和載體
        2.1.2 其他實驗材料
        2.1.3 主要儀器設備
        2.1.4 主要試劑的配制
        2.1.5 候選分子的siRNA設計及其序列
        2.1.6 siRNA下調及CSFV感染試驗
        2.1.7 rCSFV-Rluc報告病毒的Rluc活性檢測
        2.1.8 細胞總RNA的提取及反轉錄
        2.1.9 熒光定量RT-qPCR檢測不同靶基因的mRNA轉錄水平
        2.1.10 CSFV毒價的測定
        2.1.11 間接免疫熒光檢測CSFV試驗
        2.1.12 內源性MERTK蛋白的流式試驗驗證
        2.1.13 穩(wěn)定過表達MERTK的 PK-15 細胞系的構建
        2.1.14 MERTK抗體封閉試驗
        2.1.15 可溶性MERTK~(ED)-His蛋白和pGas6 蛋白的表達及純化
        2.1.16 可溶性MERTK~(ED)-His蛋白和LDC1267 對細胞活力的影響試驗
        2.1.17 可溶性MERTK~(ED)-His蛋白阻斷試驗
        2.1.18 豬源Gas6 蛋白和胎牛血清對CSFV感染影響的試驗
        2.1.19 MERTK和 E2 蛋白的免疫共沉淀試驗
        2.1.20 Western blotting試驗
        2.1.21 可溶性MERTK~(ED)-His和 E2 蛋白的表面等粒子體共振(Surface plasmon resonance,SPR)試驗
        2.1.22 MERTK和 CSFV E2 蛋白在293T細胞中的共定位試驗
        2.1.23 可溶性MERTK~(ED)-His蛋白處理后對IFN-βmRNA轉錄水平的影響
        2.1.24 抗MERTK多克隆抗體處理后對IFN-βmRNA轉錄水平的影響
        2.1.25 MERTK在 CSFV入侵過程中的作用
        2.1.26 LDC1267抑制劑的處理試驗
        2.1.27 MERTK在 MDBK和 BHK-21 細胞中的受體重建試驗
        2.1.28 可溶性MERTK~(ED)-His對 BVDV復制影響的檢測
        2.1.29 可溶性MERTK~(ED)-His對豬PRV TJ復制影響的檢測
        2.1.30 數據統(tǒng)計學分析
    2.2 實驗結果
        2.2.1 siRNA篩選結果
        2.2.2 確認下調MERTK對 CSFV復制的影響
        2.2.3 過表達MERTK對 CSFV復制的影響
        2.2.4 抗體封閉對CSFV復制的影響
        2.2.5 可溶性MERTK~(ED)-His對 CSFV復制的影響
        2.2.6 MERTK對基因2型CSFV復制的影響
        2.2.7 豬源Gas6 蛋白和胎牛血清對CSFV感染無影響
        2.2.8 MERTK與 CSFV E2 蛋白存在相互作用
        2.2.9 MERTK可促進CSFV的入侵
        2.2.10 LDC1267對CSFV復制的影響
        2.2.11 LDC1267在CSFV感染后對宿主固有免疫的影響
        2.2.12 LDC1267對CSFV入侵的影響
        2.2.13 MERTK對 PRV TJ和 BVDV復制的影響
    2.3 討論
第三章 全文結論
參考文獻
致謝
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
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[3]豬瘟兔化弱毒疫苗的研究概況[J]. 吳文福,岑小清,任向陽.  廣東畜牧獸醫(yī)科技. 2009(06)
[4]從全長cDNA克隆恢復豬瘟病毒方法的研究[J]. 范運峰,趙啟祖,趙耘,鄒興啟,張仲秋,王琴,寧宜寶.  中國畜牧獸醫(yī). 2009(06)
[5]豬瘟兔化弱毒疫苗——半個世紀的回顧[J]. 仇華吉,童光志,沈榮顯.  中國農業(yè)科學. 2005(08)



本文編號：3192088