發(fā)布時(shí)間：2021-05-17 13:35

　　A型流感病毒的M基因可編碼M1基質(zhì)蛋白和M2離子通道蛋白,它們在病毒感染時(shí)發(fā)揮重要功能。最近先后從蝙蝠體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了H17N10和H18N11兩種新亞型,據(jù)報(bào)道在蝙蝠體內(nèi)能檢測到其它亞型的A型流感病毒,其中H9亞型陽性最高,那么同時(shí)存在于蝙蝠體內(nèi)極有可能發(fā)生重組,而重組病毒的潛在危害無法預(yù)料,因此本實(shí)驗(yàn)嘗試探索蝙蝠流感病毒與其它亞型重組之后的特性。論文第一部分通過表面基因及M基因的替換、病毒拯救、細(xì)胞生長和小鼠致病性試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)在MDCK細(xì)胞和小鼠體內(nèi),哺乳動物來源流感病毒（PR8,Bat17）的M基因較禽源流感病毒（A2093/H9N2）的M基因,可以顯著增強(qiáng)嵌合蝙蝠流感病毒的復(fù)制能力和致病力;而在DF1禽源細(xì)胞上,則反之,禽源M基因替換蝙蝠源病毒（Bat17）的M基因后可以增強(qiáng)其在DF1細(xì)胞上的復(fù)制能力,這表明M基因是影響嵌合蝙蝠流感病毒致病性的一個(gè)關(guān)鍵因素。論文第二部分通過相應(yīng)的單抗或多抗進(jìn)行免疫印跡和免疫熒光鑒定Bat和A2093兩種亞型的M1、M2基因的原核表達(dá)載體和真核表達(dá)載體,以及拯救的病毒。結(jié)果顯示,兩種亞型病毒的M1蛋白無論是原核表達(dá)、真核表達(dá)還是病毒感染其結(jié)果一致,而兩種... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略語表
1 前言
    1.1 流感病毒的生物學(xué)特性
        1.1.1 流感病毒的形態(tài)
        1.1.2 流感病毒的復(fù)制
    1.2 流感病毒HA、NA、M基因與蛋白的功能
        1.2.1 血凝素HA
        1.2.2 神經(jīng)氨酸酶NA
        1.2.3 基質(zhì)蛋白M
    1.3 流感病毒的變異
        1.3.1 抗原漂移
        1.3.2 基因重排
    1.4 反向遺傳學(xué)
    1.5 包裝信號
    1.6 蝙蝠流感的現(xiàn)狀
    1.7 H9N2禽流感的現(xiàn)狀
    1.8 研究目的與意義
2 重組嵌合蝙蝠流感病毒的生物學(xué)特性研究
    2.1 材料
        2.1.1 細(xì)胞、菌液、雞胚和小鼠
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 方法
        2.2.1 嵌合蝙蝠流感病毒的重組與拯救
        2.2.2 重組病毒血凝實(shí)驗(yàn)(HA)初步鑒定
        2.2.3 重組病毒基因測序鑒定
        2.2.4 重組嵌合蝙蝠流感病毒在細(xì)胞上的生物學(xué)特性
        2.2.5 重組嵌合蝙蝠流感病毒在動物體內(nèi)的生物學(xué)特性
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 嵌合蝙蝠流感病毒表面基因質(zhì)粒的構(gòu)建結(jié)果
        2.3.2 轉(zhuǎn)染后細(xì)胞病變結(jié)果
        2.3.3 重組病毒擴(kuò)增及HA鑒定結(jié)果
        2.3.4 重組病毒基因組PCR結(jié)果并測序鑒定
        2.3.5 病毒滴度TCID_(50)的測定結(jié)果
        2.3.6 病毒在MDCK、DF1細(xì)胞上的生長曲線結(jié)果
        2.3.7 病毒對小鼠致病性的結(jié)果
    2.4 討論與小結(jié)
        2.4.1 討論
        2.4.2 小結(jié)
3 蝙蝠流感病毒與H9N2禽流感病毒M蛋白的免疫原性比較
    3.1 材料
        3.1.1 載體、質(zhì)粒、細(xì)胞和病毒
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 抗體
        3.1.4 主要儀器
    3.2 方法
        3.2.1 M1、M2氨基酸比對
        3.2.2 M1、M2原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.3 M1、M2真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.4 M1、M2原核誘導(dǎo)表達(dá)
        3.2.5 M1、M2原核誘導(dǎo)表達(dá)鑒定方法
        3.2.6 M1、M2真核轉(zhuǎn)染表達(dá)與病毒感染
        3.2.7 間接免疫熒光(IFA)檢測
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 M1、M2氨基酸進(jìn)化樹
        3.3.2 M1、M2重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
        3.3.3 M1、M2原核表達(dá)蛋白考馬斯亮藍(lán)染色鑒定
        3.3.4 M1、M2原核表達(dá)蛋白的免疫印跡鑒定
        3.3.5 IFA鑒定
    3.4 討論與小結(jié)
        3.4.1 討論
        3.4.2 小結(jié)
4 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]新型蝙蝠流感病毒研究進(jìn)展[J]. 許凱迪,陳鴻軍.  中國動物傳染病學(xué)報(bào). 2016(06)
[2]H9N2病毒研究進(jìn)展[J]. 周虹妤,裴磊,毛愛民,馮嘉林,孫科敏.  中國畜牧獸醫(yī)文摘. 2016(06)
[3]蝙蝠甲型流感病毒H17N10新亞型的研究進(jìn)展[J]. 譚偉,謝芝勛.  病毒學(xué)報(bào). 2015(01)
[4]流感病毒抗原變異的生物學(xué)研究進(jìn)展[J]. 葛少欽.  河北職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2005(02)
[5]禽流感病毒的變異與效應(yīng)[J]. 胡勇,林治華,吳勝昔.  重慶三峽學(xué)院學(xué)報(bào). 2005(03)
[6]用反向遺傳操作技術(shù)產(chǎn)生致弱的H5亞型重組流感病毒[J]. 盧建紅,龍進(jìn)學(xué),邵衛(wèi)星,韋棟平,劉秀梵,張艷梅.  微生物學(xué)報(bào). 2005(01)
[7]禽流感概述及其控制[J]. 郝俊虎,王仙琴,閆永利,馬昕,李萍.  獸藥與飼料添加劑. 2004(06)
[8]H9N2亞型禽流感病毒的致病特性研究[J]. 郭霄峰,廖明,辛朝安.  華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2001(03)
[9]甲型流感病毒抗原變異的機(jī)理[J]. 楊春,余佳.  國外醫(yī)學(xué).病毒學(xué)分冊. 1999(03)

博士論文
[1]禽源H9N2 AIV對哺乳動物的感染及其引起肺部細(xì)胞因子與蛋白組變化的研究[D]. 黃蓉.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014

碩士論文
[1]重組蝙蝠流感病毒的生物學(xué)特性的研究[D]. 陳瑩瑩.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2017
[2]H9N2亞型禽流感病毒反向遺傳操作系統(tǒng)的建立及對哺乳動物致病性的研究[D]. 陳海平.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號：3191854