發(fā)布時間：2021-05-15 19:57

　　[目的]精子發(fā)生是在有性生殖的雄性動物睪丸的曲精管中發(fā)生的,且過程比較脆弱容易受到外來毒物的毒理作用。本文通過給小鼠染氟,目的是探討氟化鈉是否對雄性小鼠精子發(fā)生產(chǎn)生影響以及與其有關(guān)的Y染色體微缺失基因的表達產(chǎn)生影響,以便進一步研究氟化物對精子發(fā)生產(chǎn)生障礙的機理。[方法]本實驗將40只雄性健康的昆明小鼠（第八周）隨機分為四個組,分別為對照組（含NaF0ppm的蒸餾水）、低氟組（含NaF25ppm的蒸餾水）、中氟組（含NaF50ppm的蒸餾水）、高氟組（含NaF100ppm的蒸餾水）,且都是飼養(yǎng)11周。染氟期間對所有雄性小鼠的體重進行定期稱量并做好記錄。染氟結(jié)束后,對小鼠的股骨氟含量、睪丸臟器系數(shù)比、附睪臟器系數(shù)比、精子數(shù)目、精子畸形率、血清中睪酮含量和組織中睪酮含量分別進行測定；對小鼠睪丸組織做組織切片后進行形態(tài)學觀察；通過實時定量PCR（RT-PCR）對與精子發(fā)生有關(guān)的Y染色體微缺失基因mRNA表達定量分析；通過RT-PCR和酶聯(lián)免疫吸附法（Elisa）對HSF2的mRNA的表達和蛋白的表達進行定量分析。[結(jié)果]1.各染氟組雄性小鼠體重與對照組雄性小鼠體重相比結(jié)果沒有顯著性差異；股骨氟... 

【文章來源】：山西農(nóng)業(yè)大學山西省

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
前言
試驗內(nèi)容
    1 試驗材料
        1.1 試驗動物
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器和設(shè)備
        1.4 主要實驗溶液的配制
    2 試驗方法
        2.1 試驗動物模型的建立
        2.2 樣品的采集和前處理
            2.2.1 分離血清
            2.2.2 分離睪丸和附睪
            2.2.3 制備精子懸液
            2.2.4 制備睪丸勻漿
        2.3 主要觀察、測定項目與方法
            2.3.1 小鼠生長發(fā)育狀況的觀察及其生長性能的測定
            2.3.2 臟器系數(shù)的測定
            2.3.3 小鼠股骨氟含量的測定
            2.3.4 小鼠精子密度的測定
            2.3.5 精子畸形率的測定
            2.3.6 精子頭部畸形率的測定
            2.3.7 小鼠睪丸組織形態(tài)學觀察
            2.3.8 血清和組織中睪酮含量的測定
        2.4 小鼠睪丸Y染色體微缺失基因和HSF2 mRNA表達的檢測
            2.4.1 小鼠睪丸總RNA的提取
            2.4.2 睪丸總RNA質(zhì)量鑒定
            2.4.3 睪丸Y染色體微缺失基因和HSF2引物設(shè)計
            2.4.4 RT-PCR反應(yīng)體系建立
            2.4.5 RT-PCR擴增條件建立
        2.5 HSF2蛋白含量的測定
            2.5.1 小鼠睪丸蛋白的提取
            2.5.2 BCA法測定蛋白濃度
            2.5.3 ELISA檢測小鼠熱休克轉(zhuǎn)錄因子2(HSF2)蛋白的表達
        2.6 數(shù)據(jù)收集處理和分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 實驗動物的一般情況觀察及生長發(fā)育狀況的測定結(jié)果
        3.2 各組小鼠主要臟器重量及臟器系數(shù)測定結(jié)果
        3.3 小鼠股骨氟含量的測定結(jié)果
        3.4 小鼠附睪精子密度的測定結(jié)果
        3.5 小鼠附睪精子畸形率的測定結(jié)果
        3.6 小鼠附睪精子頭部畸形率的測定結(jié)果
        3.7 小鼠睪丸組織切片HE染色結(jié)果
        3.8 小鼠血清中睪酮含量的測定結(jié)果
        3.9 小鼠睪丸組織中睪酮含量的測定結(jié)果
        3.10 小鼠睪丸Y染色體微缺失基因和HSF2mRNA表達的檢測結(jié)果
            3.10.1 睪丸組織中總RNA質(zhì)量鑒定
            3.10.2 樣品擴增的動力學曲線
            3.10.3 樣品QRT-PCR溶解曲線
            3.10.4 氟對小鼠睪丸組織中DAZ,RBMY DDX3Y Sly,Ssty2,HSF2mRNA表達影響的結(jié)果
        3.11 HSF2蛋白含量的測定結(jié)果
    4 分析與討論
        4.1 動物模型的建立
        4.2 不同濃度的氟對雄性小鼠體重以及睪丸、附睪系數(shù)的影響
        4.3 氟化鈉對小鼠精液品質(zhì)的影響
        4.4 氟化鈉對雄性小鼠血清和睪丸睪酮激素水平的影響
        4.5 氟化鈉對雄性小鼠睪丸組織結(jié)構(gòu)的影響
        4.6 氟化鈉對雄性小鼠與精子發(fā)生有關(guān)的Y染色體微缺失基因
            4.6.1 氟化鈉對雄性小鼠精子發(fā)生的影響
            4.6.2 Y染色體微缺失基因?qū)影l(fā)生的影響及氟化鈉對這些基因的影響
全文結(jié)論
參考文獻
Abstract
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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[7]氟化鈉皮下注射制作家兔慢性氟中毒動物模型[J]. 張永興,王全平,王哲.  第四軍醫(yī)大學學報. 2003(24)
[8]氟致雄性大鼠生殖功能損害的實驗研究[J]. 崔留欣,姜春霞,王錫林,程學敏.  中國地方病學雜志. 2003(03)
[9]氟元素與人體健康[J]. 羅媛.  廣東微量元素科學. 2002(11)
[10]三氯化鋁對小鼠免疫功能影響的研究[J]. 黃波,韋小敏,陸繼培,雷珍蓮,王清海,莫立鳳.  衛(wèi)生毒理學雜志. 1998(03)

碩士論文
[1]鉛對小鼠Y染色體Sxrb區(qū)Ddx3y基因表達的影響[D]. 邵小翠.大連醫(yī)科大學 2011



本文編號：3188244