鼻氣管鳥疫桿菌環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)與SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法的建立及應(yīng)用
發(fā)布時(shí)間:2021-05-14 16:23
鼻氣管鳥疫桿菌(Ornithobacteriumr hinotrotracheale, ORT)可引起禽類以生長障礙、死亡率增加為特征的鼻氣管鳥疫桿菌病,菌體大小約為0.2μm×0.6~5.0μm,隸屬于rRNA第5超科。鼻氣管鳥疫桿菌是一種G-小短桿菌,具有多形性和不運(yùn)動(dòng)的特性,在普通培養(yǎng)基上基本不生長,在血液瓊脂上生長緩慢,5%-10%CO2條件下,于5%綿羊血液瓊脂37℃恒溫培養(yǎng)24h-48h后,可以觀察到針尖大小,具有不溶血特性的圓形灰白色或淺紅色的奶酪樣菌落,并可以產(chǎn)生一種似酪酸樣的氣味。感染ORT的禽類主要表現(xiàn)為呼吸異常、生長緩慢、死亡率高等特征,其剖檢變化以嚴(yán)重的單側(cè)或雙側(cè)纖維素性化膿性肺炎、壞死性肺炎、支氣管炎、氣囊炎等為特征。1981年,鼻氣管鳥疫桿菌首次被德國學(xué)者分離到,直至1994年,該菌才被正式稱作ORT。1986年以色列首次報(bào)道該國存在ORT,隨后荷蘭、比利時(shí)、美國、德國、法國、加拿大和日本相繼報(bào)道檢測到ORT抗體或分離到ORT。迄今為止,鼻氣管鳥疫桿菌病流行于許多發(fā)達(dá)國家,如歐洲、非洲及南非的國家,并有繼續(xù)上升趨勢,嚴(yán)重的威脅到養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展。國內(nèi)陳小玲等研究...
【文章來源】:山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省
【文章頁數(shù)】:63 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【文章目錄】:
中文摘要
Abstract
1 前言
1.1 鼻氣管鳥疫桿菌的研究進(jìn)展
1.1.1 ORT 的病原學(xué)研究
1.1.2 ORT 的流行病學(xué)
1.1.3 ORT 感染的診斷
1.1.4 ORT 的分離鑒定
1.1.5 防治措施
1.2 LAMP 的研究進(jìn)展
1.2.1 LAMP 原理
1.2.2 LAMP 檢測方法的引物設(shè)計(jì)
1.2.3 LAMP 檢測方法的應(yīng)用
1.3 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 的研究進(jìn)展
1.3.1 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 的基本原理
1.3.2 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 的檢測模式
1.3.3 熒光域值(THRESHOLD)與 CT 值
1.3.4 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 的應(yīng)用
1.3.5 熒光定量 PCR 和常規(guī) PCR 技術(shù)的區(qū)別
1.4 本課題研究的目的意義及內(nèi)容
2 材料和方法
2.1 材料
2.1.1 菌種及樣品
2.1.2 主要試劑
2.1.3 儀器設(shè)備
2.2 方法
2.2.1 鼻氣管鳥疫桿菌環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)快速檢測方法的建立與應(yīng)用
2.2.2 鼻氣管鳥疫桿菌 SYBR GREENⅠ熒光定量 PCR 檢測方法的建立及應(yīng)用
3 結(jié)果與分析
3.1 鼻氣管鳥疫桿菌環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)檢測方法的建立與應(yīng)用
3.1.1 優(yōu)化的 LAMP 反應(yīng)體系和反應(yīng)條件
3.1.2 LAMP 試驗(yàn)結(jié)果的判定
3.1.3 LAMP 擴(kuò)增產(chǎn)物的雙酶切鑒定
3.1.4 LAMP 的特異性試驗(yàn)
3.1.5 LAMP 的敏感性試驗(yàn)
3.1.6 LAMP 的臨床應(yīng)用
3.2 鼻氣管鳥疫桿菌 SYBR GREENⅠ熒光定量 PCR 檢測方法的建立及應(yīng)用
3.2.1 常規(guī)質(zhì)粒 PCR 鑒定結(jié)果
3.2.2 熒光定量 PCR 反應(yīng)條件的優(yōu)化
3.2.3 熒光定量 PCR 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
3.2.4 擴(kuò)增產(chǎn)物的溶解曲線分析
3.2.5 敏感性試驗(yàn)結(jié)果
3.2.6 特異性試驗(yàn)結(jié)果
3.2.7 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
3.2.8 ORT 樣本檢測試驗(yàn)結(jié)果
4 討論
4.1 鼻氣管鳥疫桿菌環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)檢測方法的建立與應(yīng)用
4.2 鼻氣管鳥疫桿菌 SYBR GREENⅠ熒光定量 PCR 檢測方法的建立及應(yīng)用
5 結(jié)論
附錄
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表論文情況
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]副豬嗜血桿菌與豬偽狂犬病毒、豬乙型腦炎病毒混合感染的診斷[J]. 劉志杰,周莉,曾智勇,李如舉. 黑龍江畜牧獸醫(yī). 2013(03)
[2]豫南地區(qū)蛋雞鼻氣管鳥桿菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J]. 劉錦妮. 畜牧與獸醫(yī). 2012(12)
[3]鼻氣管鳥桿菌對SPF雛雞的致病性[J]. 吳海洋,刁有祥,劉霞,楊建朋,肖坡. 中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2012(08)
[4]家禽氣囊炎及其防治[J]. 李建海. 家禽科學(xué). 2012(08)
[5]禽鼻氣管鳥桿菌病的防治[J]. 崔兆強(qiáng),王照修,付文秀. 山東畜牧獸醫(yī). 2011(12)
[6]雞鼻氣管炎的防治措施[J]. 唐麗萍,林嵐嵐. 畜牧獸醫(yī)科技信息. 2011(09)
[7]禽呼腸孤病毒RT-LAMP快速檢測方法的建立[J]. 董嘉文,孫敏華,尚毅,胡奇林. 中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2011(07)
[8]疑似雞鼻氣管鳥桿菌的病例診斷[J]. 祁國紅. 北方牧業(yè). 2011(10)
[9]頑固性支氣管阻塞癥的診療報(bào)告[J]. 向天龍. 今日畜牧獸醫(yī). 2011(04)
[10]產(chǎn)志賀毒素Ⅱ型變異體大腸桿菌LAMP檢測方法的建立[J]. 馮瑜菲,朱穎,劉文鑫,江馗語,何麗麗,關(guān)瑋琨,胡文霞,師東方. 中國獸醫(yī)科學(xué). 2011(03)
博士論文
[1]鹿茸尖端組織的EST分析及其生長相關(guān)功能基因的表達(dá)[D]. 郝麗.東北林業(yè)大學(xué) 2010
碩士論文
[1]鴨瘟病毒SDWF株的分離鑒定及致病性研究[D]. 張坤.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[2]禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒感染對SPF雞主要免疫器官白細(xì)胞介素2產(chǎn)生的影響[D]. 李恩擴(kuò).山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[3]犬細(xì)小病毒LAMP檢測方法建立及其串聯(lián)表位卵黃抗體中和效力評價(jià)[D]. 關(guān)瑋琨.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[4]犬棘球絳蟲糞LAMP檢測方法的建立和應(yīng)用[D]. 倪興維.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2012
[5]實(shí)驗(yàn)動(dòng)物金黃色葡萄球菌LAMP檢測方法的建立及初步應(yīng)用[D]. 榮蓉.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2012
[6]犬瘟熱病毒LAMP檢測方法建立及其串聯(lián)表位卵黃抗體中和效力初步研究[D]. 何麗麗.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[7]深圳地區(qū)柯薩奇病毒A組16型的分子流行病學(xué)研究及RT-LAMP檢測方法的建立[D]. 宗文萍.南方醫(yī)科大學(xué) 2011
[8]鼻氣管鳥桿菌的分離鑒定及致病性研究[D]. 吳海洋.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[9]種鴨生殖系統(tǒng)新城疫病毒檢測及鴨新城疫病毒垂直感染動(dòng)物試驗(yàn)[D]. 李建俠.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[10]廣西雞鼻氣管鳥桿菌的分離和鑒定及其PCR診斷方法的研究[D]. 楊柳.廣西大學(xué) 2005
本文編號(hào):3185961
【文章來源】:山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省
【文章頁數(shù)】:63 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【文章目錄】:
中文摘要
Abstract
1 前言
1.1 鼻氣管鳥疫桿菌的研究進(jìn)展
1.1.1 ORT 的病原學(xué)研究
1.1.2 ORT 的流行病學(xué)
1.1.3 ORT 感染的診斷
1.1.4 ORT 的分離鑒定
1.1.5 防治措施
1.2 LAMP 的研究進(jìn)展
1.2.1 LAMP 原理
1.2.2 LAMP 檢測方法的引物設(shè)計(jì)
1.2.3 LAMP 檢測方法的應(yīng)用
1.3 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 的研究進(jìn)展
1.3.1 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 的基本原理
1.3.2 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 的檢測模式
1.3.3 熒光域值(THRESHOLD)與 CT 值
1.3.4 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 的應(yīng)用
1.3.5 熒光定量 PCR 和常規(guī) PCR 技術(shù)的區(qū)別
1.4 本課題研究的目的意義及內(nèi)容
2 材料和方法
2.1 材料
2.1.1 菌種及樣品
2.1.2 主要試劑
2.1.3 儀器設(shè)備
2.2 方法
2.2.1 鼻氣管鳥疫桿菌環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)快速檢測方法的建立與應(yīng)用
2.2.2 鼻氣管鳥疫桿菌 SYBR GREENⅠ熒光定量 PCR 檢測方法的建立及應(yīng)用
3 結(jié)果與分析
3.1 鼻氣管鳥疫桿菌環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)檢測方法的建立與應(yīng)用
3.1.1 優(yōu)化的 LAMP 反應(yīng)體系和反應(yīng)條件
3.1.2 LAMP 試驗(yàn)結(jié)果的判定
3.1.3 LAMP 擴(kuò)增產(chǎn)物的雙酶切鑒定
3.1.4 LAMP 的特異性試驗(yàn)
3.1.5 LAMP 的敏感性試驗(yàn)
3.1.6 LAMP 的臨床應(yīng)用
3.2 鼻氣管鳥疫桿菌 SYBR GREENⅠ熒光定量 PCR 檢測方法的建立及應(yīng)用
3.2.1 常規(guī)質(zhì)粒 PCR 鑒定結(jié)果
3.2.2 熒光定量 PCR 反應(yīng)條件的優(yōu)化
3.2.3 熒光定量 PCR 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
3.2.4 擴(kuò)增產(chǎn)物的溶解曲線分析
3.2.5 敏感性試驗(yàn)結(jié)果
3.2.6 特異性試驗(yàn)結(jié)果
3.2.7 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
3.2.8 ORT 樣本檢測試驗(yàn)結(jié)果
4 討論
4.1 鼻氣管鳥疫桿菌環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)檢測方法的建立與應(yīng)用
4.2 鼻氣管鳥疫桿菌 SYBR GREENⅠ熒光定量 PCR 檢測方法的建立及應(yīng)用
5 結(jié)論
附錄
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表論文情況
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]副豬嗜血桿菌與豬偽狂犬病毒、豬乙型腦炎病毒混合感染的診斷[J]. 劉志杰,周莉,曾智勇,李如舉. 黑龍江畜牧獸醫(yī). 2013(03)
[2]豫南地區(qū)蛋雞鼻氣管鳥桿菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J]. 劉錦妮. 畜牧與獸醫(yī). 2012(12)
[3]鼻氣管鳥桿菌對SPF雛雞的致病性[J]. 吳海洋,刁有祥,劉霞,楊建朋,肖坡. 中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2012(08)
[4]家禽氣囊炎及其防治[J]. 李建海. 家禽科學(xué). 2012(08)
[5]禽鼻氣管鳥桿菌病的防治[J]. 崔兆強(qiáng),王照修,付文秀. 山東畜牧獸醫(yī). 2011(12)
[6]雞鼻氣管炎的防治措施[J]. 唐麗萍,林嵐嵐. 畜牧獸醫(yī)科技信息. 2011(09)
[7]禽呼腸孤病毒RT-LAMP快速檢測方法的建立[J]. 董嘉文,孫敏華,尚毅,胡奇林. 中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2011(07)
[8]疑似雞鼻氣管鳥桿菌的病例診斷[J]. 祁國紅. 北方牧業(yè). 2011(10)
[9]頑固性支氣管阻塞癥的診療報(bào)告[J]. 向天龍. 今日畜牧獸醫(yī). 2011(04)
[10]產(chǎn)志賀毒素Ⅱ型變異體大腸桿菌LAMP檢測方法的建立[J]. 馮瑜菲,朱穎,劉文鑫,江馗語,何麗麗,關(guān)瑋琨,胡文霞,師東方. 中國獸醫(yī)科學(xué). 2011(03)
博士論文
[1]鹿茸尖端組織的EST分析及其生長相關(guān)功能基因的表達(dá)[D]. 郝麗.東北林業(yè)大學(xué) 2010
碩士論文
[1]鴨瘟病毒SDWF株的分離鑒定及致病性研究[D]. 張坤.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[2]禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒感染對SPF雞主要免疫器官白細(xì)胞介素2產(chǎn)生的影響[D]. 李恩擴(kuò).山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[3]犬細(xì)小病毒LAMP檢測方法建立及其串聯(lián)表位卵黃抗體中和效力評價(jià)[D]. 關(guān)瑋琨.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[4]犬棘球絳蟲糞LAMP檢測方法的建立和應(yīng)用[D]. 倪興維.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2012
[5]實(shí)驗(yàn)動(dòng)物金黃色葡萄球菌LAMP檢測方法的建立及初步應(yīng)用[D]. 榮蓉.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2012
[6]犬瘟熱病毒LAMP檢測方法建立及其串聯(lián)表位卵黃抗體中和效力初步研究[D]. 何麗麗.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[7]深圳地區(qū)柯薩奇病毒A組16型的分子流行病學(xué)研究及RT-LAMP檢測方法的建立[D]. 宗文萍.南方醫(yī)科大學(xué) 2011
[8]鼻氣管鳥桿菌的分離鑒定及致病性研究[D]. 吳海洋.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[9]種鴨生殖系統(tǒng)新城疫病毒檢測及鴨新城疫病毒垂直感染動(dòng)物試驗(yàn)[D]. 李建俠.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[10]廣西雞鼻氣管鳥桿菌的分離和鑒定及其PCR診斷方法的研究[D]. 楊柳.廣西大學(xué) 2005
本文編號(hào):3185961
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