發(fā)布時(shí)間：2021-05-12 12:49

　　旨在探究自噬調(diào)節(jié)因子Atg5和Beclin1在胚胎早期發(fā)育過程中的表達(dá)模式及胚胎的不同生產(chǎn)方式對(duì)兩種因子表達(dá)的影響。本研究將6～8周齡雌性小鼠進(jìn)行超數(shù)排卵,分為2組,一組收集小鼠卵母細(xì)胞,孤雌激活處理后進(jìn)行體外培養(yǎng);另一組超排小鼠與公鼠1∶1合籠,第2天收集小鼠受精卵進(jìn)行體外培養(yǎng);分別在2細(xì)胞期、4～8細(xì)胞期、桑葚胚期和囊胚期收集不同階段小鼠孤雌激活胚胎和自然受精胚胎。提取RNA和蛋白,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR、Western blot等方法檢測自噬關(guān)鍵因子Atg5和Beclin1的表達(dá),通過間接免疫熒光法檢測Atg5和Beclin1在小鼠囊胚中的表達(dá)定位。結(jié)果顯示,小鼠自然受精和孤雌激活胚胎在發(fā)育各時(shí)期均可表達(dá)Atg5和Beclin1,表達(dá)量在胚胎發(fā)育的早期呈現(xiàn)出較高的水平,其中二者的表達(dá)在小鼠自然受精胚胎中從2細(xì)胞期起逐漸降低,而在孤雌激活胚胎的4～8細(xì)胞階段表達(dá)量最高,與同期自然受精胚胎差異極顯著（P<0.01）;從4細(xì)胞期開始,各時(shí)期孤雌激活胚胎中Atg5和Beclin1蛋白表達(dá)水平均高于自然受精胚胎,差異極顯著（P<0.01）;在囊胚中,滋養(yǎng)層細(xì)胞和內(nèi)細(xì)胞團(tuán)中均可檢... 

【文章來源】：畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2020,51(12)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：11 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要材料
    1.2 主要試劑
    1.3 主要方法
        1.3.1 小鼠受精卵的采集和培養(yǎng)
        1.3.2 小鼠卵母細(xì)胞獲取和孤雌激活胚胎的培養(yǎng)
        1.3.3 小鼠胚胎RNA的提取和反轉(zhuǎn)錄
        1.3.4 qRT-PCR技術(shù)檢測Atg5和Beclin1基因的相對(duì)表達(dá)量
        1.3.5 Western blot檢測Atg5、Beclin1蛋白的相對(duì)表達(dá)量
        1.3.6 Atg5、Beclin1在小鼠囊胚中的表達(dá)定位檢測
        1.3.7 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié) 果
    2.1 小鼠胚胎體外培養(yǎng)
    2.2 核酸電泳檢測Atg5和Beclin1基因PCR產(chǎn)物特異性
    2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測Atg5和Beclin1基因在各發(fā)育時(shí)期孤雌激活胚胎和自然受精胚胎中的表達(dá)
    2.4 Western blot檢測Atg5和Beclin1蛋白在各發(fā)育時(shí)期孤雌激活胚胎和自然受精胚胎中的表達(dá)
    2.5 間接免疫熒光檢測Atg5和Beclin1蛋白在小鼠不同來源囊胚中的表達(dá)定位
3 討 論
4 結(jié) 論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]表皮生長因子（EGF）對(duì)小鼠卵丘細(xì)胞自噬及胞吞相關(guān)蛋白表達(dá)的影響[J]. 馬睿,王萌,李秦,何翃閎,王靖雷,崔燕,余四九,潘陽陽.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2020(01)
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[4]慢性缺氧誘導(dǎo)小鼠心肌細(xì)胞自噬及其機(jī)制[J]. 劉超,蹇朝,孟永勝,彭文林,朱昀,姜云瀚,羅桂平,唐富琴,肖穎彬.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2017(09)
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碩士論文
[1]Class Ⅲ PI3K/Beclin-1自噬通路參與mmLDL上調(diào)小鼠腸系膜動(dòng)脈ETA受體的研究[D]. 陳琛.南華大學(xué) 2019
[2]小鼠孤雌激活胚胎葡萄糖及主要氨基酸代謝水平的分析[D]. 王棟娜.華北理工大學(xué) 2015
[3]Atg5-/-小鼠胚胎成纖維細(xì)胞耐受活性氧誘導(dǎo)的非自噬依賴的細(xì)胞凋亡及其機(jī)制[D]. 孫向玨.浙江大學(xué) 2010
[4]水牛供體細(xì)胞組蛋白乙�；c核移植胚胎發(fā)育能力相關(guān)性的研究[D]. 羅嬋.廣西大學(xué) 2007



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