為研究旋毛蟲(chóng)Kazal型絲氨酸蛋白酶抑制劑基因的功能,通過(guò)電轉(zhuǎn)法將dsRNA導(dǎo)入旋毛蟲(chóng)體內(nèi),應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western-blot檢測(cè)經(jīng)dsRNA-TsKaSPI電轉(zhuǎn)法處理后肌幼蟲(chóng)TsKaSPI基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)水平。體外培養(yǎng)觀察TsKaSPI基因沉默對(duì)肌幼蟲(chóng)存活的影響。將dsRNA導(dǎo)入后的幼蟲(chóng)經(jīng)口接種小鼠,觀察TsKaSPI基因沉默對(duì)幼蟲(chóng)存活、發(fā)育及雌蟲(chóng)生殖力的影響。實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western-blot檢測(cè)結(jié)果顯示,旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)經(jīng)30μg/mL20dsRNA電轉(zhuǎn)處理后TsKaSPI基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)分別降低63.36%和69.24%（P<0.05）。TsKaSPI基因在dsRNA-TsKaSPI轉(zhuǎn)入肌幼蟲(chóng)后第1天轉(zhuǎn)錄水平明顯降低,第2和第3天仍處于較低的水平。PBS組、dseGFP對(duì)照組和dsRNA-TsKaSPI處理組的肌幼蟲(chóng)死亡率分別為61%、58%、52%（P>0.05）。將dsRNA電轉(zhuǎn)處理的肌幼蟲(chóng)接種小鼠后620d腸道成蟲(chóng)和3520d肌幼蟲(chóng)的減蟲(chóng)率分別為36.22%和31.87%。PBS組、dseGFP對(duì)照組和dsRNA-TsKaSPI處理組的感染小... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2020,50(05)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 蟲(chóng)種、菌株及試劑
    1.2 旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)的收集
    1.3 dsRNA的制備
    1.4 dsRNA的電轉(zhuǎn)法導(dǎo)入
    1.5 mRNA表達(dá)量的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)
    1.6 TsKaSPI基因蛋白水平的Western-blot檢測(cè)
    1.7 TsKaSPI基因沉默對(duì)旋毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)體外存活的影響
    1.8 TsKaSPI基因沉默對(duì)旋毛蟲(chóng)體內(nèi)發(fā)育及雌蟲(chóng)生殖力的影響
    1.9 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果
    2.1 T7啟動(dòng)子連接目的片段及dsRNA的合成
    2.2 旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)經(jīng)dsRNA電轉(zhuǎn)處理后TsKaSPI mRNA的轉(zhuǎn)錄水平
    2.3 旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)經(jīng)ds RNA電轉(zhuǎn)處理后蛋白表達(dá)水平的變化
    2.4 dsRNA干擾TsKaSPI基因沉默對(duì)肌幼蟲(chóng)存活、發(fā)育及雌蟲(chóng)生殖力的影響
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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