為研究旋毛蟲Kazal型絲氨酸蛋白酶抑制劑基因的功能,通過電轉(zhuǎn)法將dsRNA導(dǎo)入旋毛蟲體內(nèi),應(yīng)用實時熒光定量PCR和Western-blot檢測經(jīng)dsRNA-TsKaSPI電轉(zhuǎn)法處理后肌幼蟲TsKaSPI基因轉(zhuǎn)錄和表達水平。體外培養(yǎng)觀察TsKaSPI基因沉默對肌幼蟲存活的影響。將dsRNA導(dǎo)入后的幼蟲經(jīng)口接種小鼠,觀察TsKaSPI基因沉默對幼蟲存活、發(fā)育及雌蟲生殖力的影響。實時熒光定量PCR和Western-blot檢測結(jié)果顯示,旋毛蟲肌幼蟲經(jīng)30μg/mL20dsRNA電轉(zhuǎn)處理后TsKaSPI基因的轉(zhuǎn)錄和表達分別降低63.36%和69.24%（P<0.05）。TsKaSPI基因在dsRNA-TsKaSPI轉(zhuǎn)入肌幼蟲后第1天轉(zhuǎn)錄水平明顯降低,第2和第3天仍處于較低的水平。PBS組、dseGFP對照組和dsRNA-TsKaSPI處理組的肌幼蟲死亡率分別為61%、58%、52%（P>0.05）。將dsRNA電轉(zhuǎn)處理的肌幼蟲接種小鼠后620d腸道成蟲和3520d肌幼蟲的減蟲率分別為36.22%和31.87%。PBS組、dseGFP對照組和dsRNA-TsKaSPI處理組的感染小... 

【文章來源】：中國獸醫(yī)科學(xué). 2020,50(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 蟲種、菌株及試劑
    1.2 旋毛蟲肌幼蟲的收集
    1.3 dsRNA的制備
    1.4 dsRNA的電轉(zhuǎn)法導(dǎo)入
    1.5 mRNA表達量的實時熒光定量PCR檢測
    1.6 TsKaSPI基因蛋白水平的Western-blot檢測
    1.7 TsKaSPI基因沉默對旋毛蟲幼蟲體外存活的影響
    1.8 TsKaSPI基因沉默對旋毛蟲體內(nèi)發(fā)育及雌蟲生殖力的影響
    1.9 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果
    2.1 T7啟動子連接目的片段及dsRNA的合成
    2.2 旋毛蟲肌幼蟲經(jīng)dsRNA電轉(zhuǎn)處理后TsKaSPI mRNA的轉(zhuǎn)錄水平
    2.3 旋毛蟲肌幼蟲經(jīng)ds RNA電轉(zhuǎn)處理后蛋白表達水平的變化
    2.4 dsRNA干擾TsKaSPI基因沉默對肌幼蟲存活、發(fā)育及雌蟲生殖力的影響
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3178808