惡性腫瘤發(fā)病率正逐年增加,已成為目前人類的首要致死原因,腫瘤的治療愈加受到關(guān)注。S100A16基因為S100基因家族的特殊成員,與惡性腫瘤密切相關(guān)。早期研究表明該基因在腫瘤細胞中過表達,但后期研究發(fā)現(xiàn)其在不同腫瘤細胞中發(fā)揮不同作用,預(yù)示著S100A16基因在腫瘤中有特殊表達機制與功能作用。生長期梅花鹿鹿茸因其快速生長速度而成為惡性腫瘤研究的重要模型。該基因在鹿科動物基因的研究中鮮見報道,因此對梅花鹿S100A16基因研究具有重要意義。本研究根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫中牛、綿羊S100A16基因序列設(shè)計引物,以梅花鹿鹿茸頂端組織cDNA為模板,采用RT-PCR技術(shù)和分子克隆技術(shù)獲得S100A16基因的cDNA序列;通過Q-PCR技術(shù)對梅花鹿鹿茸生長前、中和后期間充質(zhì)組織中S100A16基因表達量的差異進行分析;構(gòu)建pEGFP-C1-S100A16真核表達載體并轉(zhuǎn)染293T細胞,通過Q-PCR技術(shù)分析過表達的S100A16基因?qū)?93T細胞中NOTCH1、ZEB1、ZEB2、NANOG、CDKN1A、PSMD9和TP53基因表達量的影響。研究結(jié)果表明:（1）梅花鹿S100A16基因CDS區(qū)全... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 梅花鹿功能基因的研究概況
        1.1.1 功能基因的早期研究概況
        1.1.2 骨化相關(guān)基因的研究概況
        1.1.3 腫瘤相關(guān)基因的研究概況
        1.1.4 再生相關(guān)基因的研究概況
        1.1.5 轉(zhuǎn)錄組的研究概況
    1.2 S100A16基因的研究現(xiàn)狀
        1.2.1 S100基因家族概述
        1.2.2 S100A16基因及其蛋白結(jié)構(gòu)特性的研究
        1.2.3 S100A16基因與腫瘤相關(guān)性的研究
        1.2.4 S100A16基因與肥胖相關(guān)性的研究
    1.3 目的意義
2 材料方法
    2.1 樣品采集
    2.2 RNA的提取、純化及反轉(zhuǎn)錄
    2.3 S100A16基因的T-A克隆
    2.4 S100A16蛋白的生物信息分析
    2.5 S100A16蛋白進化樹的構(gòu)建
    2.6 S100A16基因的Q-PCR分析
    2.7 pEGFP-C1-S100A16載體的構(gòu)建
        2.7.1 酶切位點的加入及T-A克隆
        2.7.2 克隆載體的擴增及提取
        2.7.3 真核載體的構(gòu)建、提取及鑒定
    2.8 細胞培養(yǎng)
        2.8.1 細胞復(fù)蘇
        2.8.2 細胞換液
        2.8.3 細胞傳代
    2.9 真核載體轉(zhuǎn)染293T細胞
    2.10 轉(zhuǎn)染方法的優(yōu)化
    2.11 細胞RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
    2.12 293T細胞中基因表達水平研究
3 結(jié)果
    3.1 S100A16基因的T-A克隆
    3.2 S100A16蛋白的生物信息分析
        3.2.1 蛋白的基本理化性質(zhì)
        3.2.2 蛋白的磷酸化位點及跨膜結(jié)構(gòu)
        3.2.3 蛋白的信號肽區(qū)域及亞細胞定位
        3.2.4 蛋白的功能結(jié)構(gòu)域
        3.2.5 蛋白的二級結(jié)構(gòu)
        3.2.6 蛋白的三級結(jié)構(gòu)
    3.3 S100A16蛋白進化樹的構(gòu)建結(jié)果
    3.4 S100A16基因的Q-PCR分析結(jié)果
    3.5 真核載體構(gòu)建結(jié)果
    3.6 熒光觀察結(jié)果
    3.7 293T細胞中基因表達水平研究的結(jié)果
        3.7.1 S100A16基因表達水平研究的結(jié)果
        3.7.2 互作基因表達水平研究的結(jié)果
4 討論
    4.1 S100A16基因克隆及生物信息分析
    4.2 S100A16蛋白氨基酸序列同源性分析
    4.3 S100A16基因的Q-PCR結(jié)果分析
    4.4 真核載體構(gòu)建結(jié)果分析
    4.5 真核載體轉(zhuǎn)染結(jié)果分析
    4.6 293T細胞中基因表達差異的分析
        4.6.1 NOTCH1、ZEB1和ZEB2基因表達差異的分析
        4.6.2 NANOG和TP53基因表達差異的分析
        4.6.3 CDKN1A和PSMD9基因表達差異的分析
結(jié)論
參考文獻
附錄
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝



本文編號：3168694