豬傳染性胃腸炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV）能引起豬傳染性胃腸炎（Transmissible gastroenteritis of swine,TGE）,主要以腹瀉、嘔吐和嚴(yán)重脫水等為典型的臨床癥狀,且容易同其他病原發(fā)生合并感染,對養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展構(gòu)成巨大威脅。TGEV在體外感染宿主細(xì)胞不僅能引起細(xì)胞發(fā)生典型的病變效應(yīng)（cytopathic effect,CPE）,還能誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生I型干擾素。對于致細(xì)胞CPE的分子機(jī)制和誘導(dǎo)干擾素產(chǎn)生的機(jī)制,前人已經(jīng)做過一些探究。腫瘤抑制因子（tumor suppressor）p53從被發(fā)現(xiàn)以來就一直是人們研究的熱點。對于其在抗腫瘤、應(yīng)激、細(xì)胞周期調(diào)控、病毒感染及天然免疫方面的研究已經(jīng)非常深入。已知多種病毒感染都能激活p53,且能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,以發(fā)揮機(jī)體的先天防御作用。p53的磷酸化也可以引起干擾素激活通路的活化,進(jìn)而誘導(dǎo)干擾素的產(chǎn)生。TGEV感染豬腎細(xì)胞（PK-15）后可引起p53顯著上調(diào)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。那么p53在TGEV早期感染進(jìn)程中對干擾素的產(chǎn)生發(fā)揮了怎樣的作用?是何種... 

【文章來源】：海南師范大學(xué)海南省

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)
    1.2 p53 研究進(jìn)展
    1.3 p53 與干擾素(interferon,IFN)誘導(dǎo)通路
    1.4 Toll樣受體通路
    1.5 RIG-I樣受體通路
    1.6 IFN-β及其調(diào)控
第二章 p53 的敲除鑒定對TGEV誘生IFN-β的影響
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細(xì)胞株
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇
        2.2.2 p53 敲除及陽性穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選
        2.2.3 基因測序和Western Blot方法鑒定
        2.2.4 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.5 TGEV的增殖
        2.2.6 細(xì)胞計數(shù)
        2.2.7 TGEV TCID50 的測定
        2.2.8 病毒接種和樣品收集
        2.2.9 細(xì)胞培養(yǎng)上清中IFN-β濃度測定
        2.2.10 總RNA提取和反轉(zhuǎn)錄
        2.2.11 熒光定量PCR測定IFN-β表達(dá)量
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 p53 的測序鑒定
        2.3.2 p53的Western Blot方法鑒定
        2.3.3 病毒的TCID50
        2.3.4 IFN-β的基因定量
        2.3.5 上清培養(yǎng)液IFN-β測定
    2.4 討論
第三章 p53對TGEV誘生IFN-β的RIG-I受體通路和TLR受體通路的調(diào)控作用研究
    3.1 實驗材料
        3.1.1 病毒與細(xì)胞
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要設(shè)備
    3.2 方法
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 時間梯度感染樣品處理
        3.2.3 RLR通路抑制劑(BX795)處理
        3.2.4 TLR通路抑制劑(resveratrol,白藜蘆醇)處理
        3.2.5 總RNA提取和反轉(zhuǎn)錄
        3.2.6 熒光定量PCR
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 p53在TGEV感染過程中上調(diào)TLR通路中TRIF,TRAM表達(dá)
        3.3.2 p53在TGEV感染過程中上調(diào)RLR通路的RIG-I/MDA-5/IPS-1 表達(dá)
    3.4 討論
第四章 p53對IFN-β信號通路及病毒復(fù)制的影響
    4.1 實驗材料
        4.1.1 病毒與細(xì)胞
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要設(shè)備
    4.2 方法
        4.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.2.2 時間梯度感染樣品處理
        4.2.3 干擾素誘導(dǎo)劑poly(I:C)處理
        4.2.4 外源IFN-β處理
        4.2.5 總RNA提取和反轉(zhuǎn)錄
        4.2.6 熒光定量PCR
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 p53對TGEV感染后干擾素誘導(dǎo)基因表達(dá)的影響
        4.3.2 p53 在低病毒載量感染時對TGEV復(fù)制的影響
        4.3.3 p53-/-PK-15 細(xì)胞中poly(I:C)刺激的抗病毒作用
    4.4 討論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
附件


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]豬傳染性胃腸炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3a和3b融合表達(dá)及對細(xì)胞周期的影響[J]. 梁亞冰,張琪,常嶸,童德文,許信剛.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(02)
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博士論文
[1]p53在I型干擾素介導(dǎo)的先天性抗甲型流感病毒中的作用研究[D]. 朱紫祥.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2013
[2]豬流感病毒感染細(xì)胞內(nèi)p53活性變化機(jī)制解析[D]. 王曉杜.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2010

碩士論文
[1]重組融合蛋白TAT-p53對乙型肝炎病毒（HBV）的抑制作用研究[D]. 初驍宇.安徽大學(xué) 2015



本文編號：3167809