犬瘟熱是一種接觸性傳染病,可侵害免疫系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng),甚至神經(jīng)系統(tǒng),導(dǎo)致全身性的病理變化,對(duì)寵物犬、毛皮動(dòng)物等存在巨大威脅。目前常用的膠體金檢測(cè)法不能有效區(qū)分疫苗免疫與動(dòng)物自然感染。為建立一種高效準(zhǔn)確的鑒別犬瘟熱病毒野毒株和疫苗株的檢測(cè)方法,本試驗(yàn)對(duì)從武漢地區(qū)收集已確診犬瘟熱的6只犬分離得到的野毒株以及3株廣泛使用的CDV疫苗株進(jìn)行全基因組測(cè)序,從氨基酸水平和堿基水平比對(duì)分析后,確定H基因?yàn)锳S-PCR引物設(shè)計(jì)的靶基因。通過對(duì)H基因進(jìn)行分型,發(fā)現(xiàn)武漢地區(qū)流行的CDV均為Asia-Ⅰ型,而疫苗株Y2為America-I型,疫苗株Y1和Y3均為America-II型。對(duì)比179株Asia-Ⅰ型（6株野毒株樣品+173株GenBank Asia-Ⅰ型）與3株疫苗株的CDV-H基因序列,采用AS-PCR技術(shù)（3′端錯(cuò)配）設(shè)計(jì)出1對(duì)能有效區(qū)分犬瘟熱Asia-Ⅰ型野毒株和疫苗株的特異性引物,上游引物序列為5′-TTAAATGATAATGACATAGTG-3′,下游引物序列為5′-CCTGGCAAGGCAAGA-3′。結(jié)果顯示該引物有較強(qiáng)的特異性,6株樣品野毒株均可擴(kuò)增出長894 bp的片段... 

【文章來源】：畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2020,51(10)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 主要毒株及樣品
        1.1.2 主要試劑與儀器
    1.2 方法
        1.2.1 病毒RNA提取與反轉(zhuǎn)錄
        1.2.2 PCR擴(kuò)增與測(cè)序
        1.2.3 AS-PCR引物設(shè)計(jì)
        1.2.4 靈敏性與特異性試驗(yàn)
        1.2.5 臨床樣品檢測(cè)
2 結(jié) 果
    2.1 基因堿基水平的同源性分析比較
    2.2 野毒株和疫苗株的分型結(jié)果
    2.3 H基因分析
    2.4 AS-PCR引物及優(yōu)化
    2.5 AS-PCR引物靈敏度和特異性檢測(cè)
    2.6 臨床樣本檢測(cè)
3 討 論
4 結(jié) 論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]采用ASPCR技術(shù)檢測(cè)抗藥性雨久花ALS突變基因堿基種類的探討[J]. 吳明根,金萬赫,許勇男.  安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2011(02)
[2]SYBR GreenⅠ熒光定量RT-PCR檢測(cè)犬瘟熱病毒方法的建立及應(yīng)用[J]. 黃國君,岳華,楊發(fā)龍,蘭道亮,湯承,盧建遠(yuǎn).  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2008(06)
[3]SYBR Green I熒光RT-PCR檢測(cè)犬瘟熱方法的建立和應(yīng)用[J]. 邵四海,孔繁德,吳德峰,陳瓊,徐淑菲,溫海.  生物技術(shù)通報(bào). 2008(01)
[4]犬瘟熱病毒RT-PCR檢測(cè)方法的建立[J]. 王金良,沈志強(qiáng),管宇,肖躍強(qiáng),趙元楷.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2006(12)
[5]等位基因特異PCR技術(shù)的研究與應(yīng)用[J]. 陳吉寶,景蕊蓮,員海燕,衛(wèi)波.  植物遺傳資源學(xué)報(bào). 2005(04)

博士論文
[1]不同宿主來源犬瘟熱病毒遺傳分析與生物學(xué)特性研究[D]. 李天松.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3166612