乳酸菌（Lactic Acid Bacteria,LAB）是一類以乳酸為主要代謝產(chǎn)物的厭氧菌。早在幾百年前,人們就利用乳酸菌生產(chǎn)酸奶等發(fā)酵食品,其安全特性已經(jīng)被廣泛認(rèn)可。近年來(lái),乳酸菌作為重組蛋白口服載體疫苗的潛力也備受關(guān)注。在過(guò)去的二十年中,許多乳酸菌菌株的生理學(xué)和遺傳學(xué)特性已經(jīng)被徹底地研究,一些菌株已經(jīng)完成全基因組測(cè)序,并且開(kāi)發(fā)出了多種基于乳酸乳球菌的遺傳表達(dá)工具,其中NICE基因調(diào)控表達(dá)系統(tǒng)（Nisin-controlled gene expression system,NICE）就是一種簡(jiǎn)便、可控的表達(dá)系統(tǒng),該系統(tǒng)通過(guò)納克量級(jí)的nisin（來(lái)自乳酸菌自身的一種34個(gè)氨基酸的天然細(xì)菌素）即可激活并誘導(dǎo)目的基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá),因此,該系統(tǒng)已被廣泛應(yīng)用于表達(dá)外源蛋白;此外,乳酸菌還有非誘導(dǎo)的組成型持續(xù)表達(dá)系統(tǒng)等。但是與相對(duì)成熟的酵母和大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)相比,乳酸菌表達(dá)系統(tǒng)普遍存在表達(dá)量不足、難以分泌等劣勢(shì),不利于重組乳酸菌的構(gòu)建和外源目的蛋白的表達(dá)。本研究獨(dú)創(chuàng)性地采用由NICE誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)和組成型持續(xù)表達(dá)系統(tǒng)組成的雙啟動(dòng)子串聯(lián)表達(dá)策略,構(gòu)建了由單一質(zhì)粒攜帶雙啟動(dòng)子串聯(lián)表達(dá)同一目的蛋白的新... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：53 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 乳酸菌概述
    1.2 乳酸菌作為載體
        1.2.1 菌株的選擇
        1.2.2 表達(dá)方式的選擇
        1.2.3 沙門氏菌侵襲蛋白R(shí)CK
        1.2.4 乳酸菌作為載體的展望
    1.3 傳染性法氏囊病(IBD)
        1.3.1 IBD概述
        1.3.2 IBD流行病學(xué)
        1.3.3 IBD疫苗研究現(xiàn)狀
    1.4 目的與意義
第二章 R-L.LACTIS-PGSA-VP2-RCK重組乳酸菌的構(gòu)建及其免疫效果的評(píng)價(jià)
    2.1 材料
        2.1.1 質(zhì)粒、菌株、毒株及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 主要試劑和儀器
    2.2 方法
        2.2.1 引物合成
        2.2.2 目的片段擴(kuò)增
        2.2.3 目的片段的膠回收純化
        2.2.4 NZ3900 感受態(tài)的制備
        2.2.5 重組質(zhì)粒pNZ8149-pgsA-VP2-RCK構(gòu)建
        2.2.6 電轉(zhuǎn)化構(gòu)建r-L.Lactis-pgsA-VP2-RCK重組乳酸菌
        2.2.7 r-L.Lactis-pgsA-VP2-RCK重組乳酸菌的篩選鑒定
        2.2.8 r-L.Lactis-pgsA-VP2-RCK重組乳酸菌的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.2.9 間接免疫熒光及流式細(xì)胞術(shù)鑒定蛋白錨定
        2.2.10 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        2.2.11 血清抗體滴度檢測(cè)
        2.2.12 血清中和抗體的檢測(cè)
        2.2.13 攻毒保護(hù)率
        2.2.14 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 目的基因片段的擴(kuò)增
        2.3.2 r-L.Lactis-pgsA-VP2-RCK重組乳酸菌的篩選及PCR鑒定
        2.3.3 r-L.Lactis-pgsA-VP2-RCK重組乳酸菌的酶切鑒定
        2.3.4 r-L.Lactis-pgsA-VP2-RCK重組乳酸菌的蛋白表達(dá)情況
        2.3.5 間接免疫熒光鑒定重組乳酸菌表面錨定目的蛋白
        2.3.6 流式細(xì)胞分析鑒定重組乳酸菌表面錨定目的蛋白
        2.3.7 血清ELISA抗體與中和抗體的檢測(cè)結(jié)果
        2.3.8 攻毒保護(hù)率
    2.4 討論
第三章 R-L.LACTIS-PNISA+P45-VP2-RCK重組乳酸菌的構(gòu)建及其免疫效果的評(píng)價(jià)
    3.1 材料
        3.1.1 質(zhì)粒、菌株、毒株及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 主要試劑和儀器
    3.2 方法
        3.2.1 引物合成
        3.2.2 目的片段擴(kuò)增
        3.2.3 重組質(zhì)粒pNZ8149-pnisA+p45-VP2-RCK的構(gòu)建
        3.2.4 電轉(zhuǎn)化構(gòu)建r-L.Lactis-pnisA+p45-VP2-RCK重組乳酸菌
        3.2.5 r-L.Lactis-pnisA+p45-VP2-RCK重組乳酸菌的篩選鑒定
        3.2.6 r-L.Lactis-pnisA+p45-VP2-RCK重組乳酸菌的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.2.7 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        3.2.8 血清抗體滴度檢測(cè)
        3.2.9 血清中和抗體檢測(cè)
        3.2.10 攻毒保護(hù)率
        3.2.11 法氏囊指數(shù)統(tǒng)計(jì)
        3.2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 目的基因片段的擴(kuò)增
        3.3.2 r-L.Lactis-pnisA+p45-VP2-RCK重組乳酸菌的篩選及PCR鑒定
        3.3.3 r-L.Lactis-pnisA+p45-VP2-RCK重組乳酸菌酶切鑒定
        3.3.4 r-L.Lactis-pnisA+p45-VP2-RCK重組乳酸菌蛋白表達(dá)情況
        3.3.5 血清ELISA抗體與中和抗體的檢測(cè)結(jié)果
        3.3.6 攻毒保護(hù)率
        3.3.7 法氏囊指數(shù)統(tǒng)計(jì)
    3.4 討論
第四章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]雞傳染性法氏囊病的研究進(jìn)展[J]. 李潭清,宋勤葉,楊潤(rùn)德,高軒,劉蘭亞.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2008(35)
[3]乳酸菌作為口服疫苗載體的研究進(jìn)展[J]. 余麗蕓,王桂華,唐彥君.  生物技術(shù)通報(bào). 2008(05)
[4]傳染性法氏囊病及其病原分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J]. 何秀苗,陽(yáng)秀英,韋平.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2007(02)
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本文編號(hào)：3164012