發(fā)布時間：2021-04-25 23:55

　　為研究一種簡單快速分離蒙古馬睪丸支持細(xì)胞并保證其活性的基本方法,本試驗采集2歲蒙古馬睪丸組織于低溫環(huán)境下進(jìn)行機械分離,將1～3 g睪丸組織剪碎,采用重力沉淀法去除游離的紅細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞;使用0.1%膠原酶Ⅳ和0.25%胰蛋白酶+EDTA逐步進(jìn)行組織消化,并用含有10%胎牛血清的培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng);在接種后采用差異貼壁法分離純化支持細(xì)胞,使用Tris-HCl低滲法去除雜質(zhì)細(xì)胞,并采用堿性磷酸酶（AKP）染色、HE染色、實時熒光定量PCR方法進(jìn)行鑒定。結(jié)果顯示,支持細(xì)胞貼壁性能較強,培養(yǎng)24 h后大多數(shù)細(xì)胞開始貼壁,細(xì)胞形狀呈橢圓形;培養(yǎng)48 h后胞質(zhì)增多,折光性變強;培養(yǎng)3～4 d細(xì)胞胞質(zhì)展開緊密連接,此時細(xì)胞呈三角形,有明顯的核仁,培養(yǎng)6～7 d細(xì)胞生長狀態(tài)進(jìn)入穩(wěn)定期。實時熒光定量PCR結(jié)果顯示,GATA4和GDNF基因在培養(yǎng)細(xì)胞中極顯著表達(dá)（P<0.01）,AKP染色支持細(xì)胞呈陰性表達(dá),表明分離培養(yǎng)的細(xì)胞確為支持細(xì)胞。本試驗使用機械分離法與兩步酶消化法處理組織,可快速高效地獲得睪丸支持細(xì)胞,成功構(gòu)建了蒙古馬睪丸支持細(xì)胞體外培養(yǎng)方法。 

【文章來源】：中國畜牧獸醫(yī). 2020,47(09)北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 支持細(xì)胞組織的提取
    1.3 支持細(xì)胞的純化與傳代培養(yǎng)
    1.4 支持細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒定
    1.5 支持細(xì)胞堿性磷酸酶染色觀察
    1.6 蒙古馬睪丸支持細(xì)胞生長曲線測定
    1.7 實時熒光定量PCR鑒定
2 結(jié) 果
    2.1 蒙古馬支持細(xì)胞體外分離培養(yǎng)特征
    2.2 支持細(xì)胞生長曲線繪制
    2.3 支持細(xì)胞標(biāo)志基因檢測分析
3 討 論
    3.1 支持細(xì)胞體外培養(yǎng)
    3.2 支持細(xì)胞的鑒定方法
4 結(jié) 論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]MDCK細(xì)胞連續(xù)傳代培養(yǎng)的生長特性研究[J]. 竇曉霞,馬桂蘭,喬自林,王家敏,李倬.  甘肅畜牧獸醫(yī). 2019(04)
[2]支持細(xì)胞功能狀態(tài)調(diào)控精子發(fā)生的研究進(jìn)展[J]. 李丹婷,白利鵬,蔡欣,余樹民.  中華男科學(xué)雜志. 2018(09)
[3]成年小鼠睪丸支持細(xì)胞體外快速分離與培養(yǎng)[J]. 胡旭燕,伍瓊芳,張學(xué)宏.  江西醫(yī)藥. 2018(03)
[4]大鼠睪丸支持細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定[J]. 張倩,周可柔,胡倩倩,任曼,靳二輝,顧有方,李升和.  安徽科技學(xué)院學(xué)報. 2018(02)
[5]和田羊睪丸支持細(xì)胞的體外培養(yǎng)與分離鑒定[J]. 王帥,賈琦珍,張玲,王連群,陳根元.  西南農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2017(08)
[6]大鼠睪丸支持細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定[J]. 丁天云,張明,楊洋,簡少卿,陽剛,胡寶慶,文春根.  南昌大學(xué)學(xué)報(理科版). 2016(05)
[7]睪丸支持細(xì)胞對精原干細(xì)胞作用因子研究進(jìn)展[J]. 鄧偉民,孫大林,金保方.  中國男科學(xué)雜志. 2015(12)
[8]犢牛睪丸生殖干細(xì)胞與支持細(xì)胞體外共培養(yǎng)體系的建立[J]. 張倩,齊曉楠,楊文浩,叢霞,李華濤,曹榮峰,田文儒.  動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2015(11)
[9]仔豬睪丸支持細(xì)胞的體外生物學(xué)特性研究[J]. 劉歡歡,余樹民,夏娟,孫成亮,沈留紅,曹隨忠,左之才,馬曉平.  中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報. 2015(08)
[10]成年犬睪丸支持細(xì)胞體外分離培養(yǎng)的研究[J]. 葛秀國,張偉,丁向彬,李吉霞.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2014(15)

碩士論文
[1]支持細(xì)胞通過外泌體途徑維持精原干細(xì)胞存活的研究[D]. 杜健.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2017
[2]小鼠精原干細(xì)胞、支持細(xì)胞體外培養(yǎng)及白消安毒性影響研究[D]. 梁洺源.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[3]Gata4和Gata6在尼羅羅非魚類固醇生成和配子發(fā)生中作用研究[D]. 何雪.西南大學(xué) 2015



本文編號：3160326