目前利用奶牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù),建立奶牛子宮內(nèi)膜炎模型從而減少不可控因素來(lái)研究奶牛子宮內(nèi)膜炎疾病已成為國(guó)內(nèi)外普遍使用的一類方法,因此獲得高純度、同一性的子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞是體外研究的關(guān)鍵環(huán)節(jié),國(guó)內(nèi)外所使用方法主要是酶消化法、組織塊貼壁法和組織塊消化貼壁法。本文旨對(duì)先前的方法進(jìn)行改良,建立一種簡(jiǎn)便易行、培養(yǎng)周期短、細(xì)胞活性及形態(tài)良好的原代奶牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)。采用健康未孕奶牛子宮為試驗(yàn)材料,取下子宮內(nèi)膜組織,加入5 mL含2%雙抗、40%胰酶的DMEM/F12培養(yǎng)基,4℃消化12 h,再將組織移至25 cm²細(xì)胞培養(yǎng)瓶中貼壁培養(yǎng)。獲得原代細(xì)胞后,應(yīng)用角蛋白-18抗體對(duì)細(xì)胞進(jìn)行免疫組化熒光鑒定,并對(duì)第3代細(xì)胞采用CCK-8法測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)的D_{450 nm}值,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。結(jié)果顯示,培養(yǎng)至第8天,原代細(xì)胞基本鋪滿細(xì)胞培養(yǎng)瓶瓶底,有效地縮短了常規(guī)組織塊貼壁法的周期。通過(guò)角蛋白-18免疫組化熒光鑒定,原代上皮細(xì)胞的陽(yáng)性率可達(dá)98%以上,相比常規(guī)組織塊貼壁法來(lái)說(shuō),純度明顯提高,省去了細(xì)胞純化的操作步驟。細(xì)胞增殖狀態(tài),符合正常的分裂... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2020,47(03)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 主要儀器
    1.2 方法
        1.2.1 原代培養(yǎng)
        1.2.2 傳代
        1.2.3 鑒定
        1.2.4 生長(zhǎng)曲線
        1.2.5 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié) 果
    2.1 細(xì)胞生長(zhǎng)情況
    2.2 細(xì)胞傳代情況
    2.3 細(xì)胞角蛋白-18鑒定情況
    2.4 生長(zhǎng)曲線情況
3 討 論
4 結(jié) 論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]奶牛子宮內(nèi)膜炎診療學(xué)研究進(jìn)展[J]. 王鴻盛,武小虎,張世棟,王東升,嚴(yán)作廷.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2019(07)
[2]病原菌分子生物學(xué)診斷技術(shù)及其在奶牛子宮內(nèi)膜炎診斷中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 邵丹,張世棟,武小虎,王東升,董書偉,桑夢(mèng)琪,喻琴,嚴(yán)作廷.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2019(02)
[3]牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)及鑒定[J]. 詹同彤,楊健,蔡德霖,王相國(guó),梁鴻斌,谷傳慧,倪和民,郭勇.  中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào). 2018(11)
[4]奶牛子宮內(nèi)膜炎致病菌的分離鑒定、藥敏試驗(yàn)及致病力研究[J]. 龔團(tuán)蓮.  畜牧與飼料科學(xué). 2017(06)
[5]人子宮內(nèi)膜細(xì)胞原代培養(yǎng)與間質(zhì)細(xì)胞MTS比較[J]. 李露,史文靜,陶愛林,關(guān)綺蕙,周龍書.  中國(guó)婦幼保健. 2017(01)
[6]奶牛子宮內(nèi)膜炎病因?qū)W研究進(jìn)展[J]. 那立冬,王東升,董書偉,張世棟,閆寶琪,楊洪早,桑夢(mèng)琪,嚴(yán)作廷.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2016(09)
[7]奶牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)及鑒定[J]. 都日塔哈拉,曹金山,高龍,付長(zhǎng)其,郭羽麗.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2016(06)
[8]荷斯坦奶牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)[J]. 張世棟,王東升,王旭榮,潘虎,李宏勝,嚴(yán)作廷.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2013(04)
[9]細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 占今舜,邢月騰,張彬.  飼料博覽. 2013(01)
[10]奶牛和綿羊子宮內(nèi)膜細(xì)胞體外培養(yǎng)方法的研究[J]. 陳利平,樸學(xué)嬌,羅永,倪和民,劉云海,郭勇.  中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào). 2012(14)

博士論文
[1]奶牛子宮內(nèi)膜炎早期診斷及益生菌抗大腸桿菌誘導(dǎo)的子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞炎性損傷作用機(jī)理[D]. 劉明超.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017



本文編號(hào)：3157537