發(fā)布時間：2021-04-23 20:24

　　為了解鸚鵡禽多瘤病毒（APV）陜西分離株（SX-2018株）VP1基因的分子特征,并建立可用于臨床的快速靈敏的APV檢測方法,本研究通過PCR擴(kuò)增了SX-2018株VP1基因序列,并與22株國內(nèi)外參考株進(jìn)行了核苷酸同源性比較和遺傳進(jìn)化分析。結(jié)果顯示:擴(kuò)增的SX-2018株VP1基因全長為1 032 bp,與其他APV分離株核苷酸相似度為99.1%～100.0%;遺傳進(jìn)化分析顯示SX-2018株屬于CladeⅡ分支。設(shè)計針對VP1基因的特異性引物（209 bp）并構(gòu)建其相應(yīng)的質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品,以不同濃度的該質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品為模板擴(kuò)增并繪制了標(biāo)準(zhǔn)曲線,通過條件優(yōu)化建立了APV SYBR Green熒光定量PCR檢測方法。結(jié)果顯示:建立的熒光定量PCR方法僅特異性擴(kuò)增APV,與鸚鵡其它常見病毒無交叉反應(yīng),特異性強(qiáng);對質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品檢測的最低濃度達(dá)5.4×101拷貝/μL,為常規(guī)PCR的100倍;組內(nèi)組間變異系數(shù)分別小于0.5%、1.5%,重復(fù)性好。利用該方法與常規(guī)PCR方法對疑似APV感染的30份樣品進(jìn)行檢測并比較,結(jié)果顯示:建立的APV SYBR Green熒光定量PCR檢測方法與常規(guī)PCR的符合率為86... 

【文章來源】：中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2020,42(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 病毒株和臨床樣品
    1.2 主要試劑
    1.3 APV VP1基因克隆與序列分析
        1.3.1 VP1基因克隆
        1.3.2 VP1基因序列分析
    1.4 重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的構(gòu)建與鑒定
    1.5 熒光定量PCR程序優(yōu)化
    1.6 熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    1.7 特異性試驗
    1.8 敏感性試驗
    1.9 重復(fù)性試驗
    1.1 0 臨床樣品檢測
2 結(jié)果
    2.1 APV VP1基因克隆與分析
    2.2 重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的構(gòu)建結(jié)果
    2.3 熒光定量PCR程序優(yōu)化
    2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    2.5 特異性試驗結(jié)果
    2.6 敏感性試驗結(jié)果
    2.7重復(fù)性試驗結(jié)果
    2.8 臨床樣品檢測
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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鸚鵡幼雛病病毒福建株VP1基因的克隆及序列分析[J]. 萬春和,程龍飛,傅光華,施少華,陳紅梅,傅秋玲,劉榮昌,林建生,黃瑜.  中國畜牧獸醫(yī). 2018(06)
[2]小太陽鸚鵡禽多瘤病毒感染病例分析[J]. 李芳韜,孫洪磊.  國際病毒學(xué)雜志. 2017 (04)
[3]青島即墨鸚鵡幼雛病的診斷及病毒VP1基因序列分析[J]. 蔣文明,莊青葉,馬青霞,曹玉飛,侯廣宇,劉均華,陳繼明,黃保續(xù).  中國動物檢疫. 2008(12)
[4]我國一株鸚鵡新病毒的理化性質(zhì)及鑒定[J]. 夏葦,馮峰,王旭,趙林.  華中師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2000(02)
[5]我國一株鸚鵡病毒的鑒定及其生化特性[J]. 夏葦,馮鋒,李天憲,陳繩亮,趙林.  中國病毒學(xué). 1999(03)

碩士論文
[1]禽類多瘤病毒晚期基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制的研究[D]. 高奎.中南民族大學(xué) 2013
[2]鸚鵡幼雛病病毒全序列分析及VP1基因克隆與表達(dá)[D]. 寇錚.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004



本文編號：3155981