發(fā)布時(shí)間：2021-04-21 20:59

　　雞馬立克氏病病毒（MDV）是禽類(lèi)皰疹病毒的典型代表,在雞群中極為常見(jiàn)。MDV感染后引起雞內(nèi)臟組織發(fā)生嚴(yán)重的淋巴瘤,伴隨顯著的免疫抑制,是養(yǎng)禽業(yè)的一個(gè)主要威脅。天然免疫是機(jī)體抵抗病毒感染的第一道防線(xiàn)。Ⅰ型干擾素（IFN）,特別是IFN-β,是天然免疫系統(tǒng)抗病毒作用的代表性細(xì)胞因子。在感染過(guò)程中,宿主細(xì)胞通過(guò)表面及胞內(nèi)的模式識(shí)別受體識(shí)別病原微生物中高度保守的病原相關(guān)分子模式,誘導(dǎo)IFN-β表達(dá),激活宿主天然免疫反應(yīng)。除Toll樣受體、RIG-Ⅰ樣受體、Nod樣受體等模式識(shí)別受體外,研究者近年來(lái)又發(fā)現(xiàn)了一系列DNA受體。宿主細(xì)胞DNA受體信號(hào)通路在機(jī)體抵抗DNA病毒、細(xì)菌以及抗腫瘤天然免疫中均發(fā)揮著關(guān)鍵作用。禽類(lèi)抗病毒天然免疫機(jī)制與哺乳動(dòng)物相比研究相對(duì)滯后,這在很大程度上限制了禽類(lèi)病毒性傳染病感染與免疫機(jī)制的研究以及防控措施的制定。本研究發(fā)現(xiàn)MDV感染后期,宿主細(xì)胞IFN-β的產(chǎn)生受到了抑制,表明MDV在感染過(guò)程中阻斷了 IFN-β信號(hào)通路。為了闡明cGAS-STING DNA受體信號(hào)通路在MDV誘導(dǎo)IFN-β中的作用,本研究通過(guò)RNA干擾技術(shù)下調(diào)cGAS和STING的表達(dá),發(fā)現(xiàn)當(dāng)兩者表達(dá)下... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 前言
    1.1 雞馬立克氏病（MD）及雞馬立克氏病病毒（MDV）
        1.1.1 雞馬立克氏�。∕D）的流行病學(xué)及防控
        1.1.2 雞馬立克氏病病毒（MDV）基因組及編碼蛋白
    1.2 宿主抗病毒天然免疫
        1.2.1 TLRs介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
        1.2.2 RLRs介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
        1.2.3 DNA受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
    1.3 病毒調(diào)控干擾素信號(hào)通路逃逸宿主抗病毒天然免疫
        1.3.1 病毒蛋白拮抗Ⅰ型干擾素產(chǎn)生
        1.3.2 病毒蛋白拮抗Ⅰ型干擾素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
        1.3.3 病毒蛋白的亞細(xì)胞定位與其干擾素應(yīng)答拮抗
    1.4 MDV調(diào)控DNA受體信號(hào)通路逃逸宿主抗病毒天然免疫
    1.5 本研究目的與意義
第2章 拮抗DNA受體信號(hào)通路的MDV蛋白的篩選
    2.1 材料和方法
        2.1.1 細(xì)胞、引物、試劑
        2.1.2 RNA抽提及反轉(zhuǎn)錄
        2.1.3 熒光定量PCR方法的檢測(cè)
        2.1.4 雞IFN-β的ELISA檢測(cè)
        2.1.5 MDV體外復(fù)制動(dòng)力學(xué)曲線(xiàn)的繪制
        2.1.6 外源DNA刺激DF1細(xì)胞后IFN-β的檢測(cè)
        2.1.7 RNA干擾實(shí)驗(yàn)
        2.1.8 熒光素酶活性檢測(cè)
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 MDV感染后期,宿主細(xì)胞IFN-β產(chǎn)生受到抑制
        2.2.2 禽類(lèi)細(xì)胞中存在DNA受體
        2.2.3 MDV通過(guò)cGAS-STING通路誘導(dǎo)IFN-β的產(chǎn)生
        2.2.4 cGAS或STING敲低抑制MDV誘導(dǎo)IFN-β的產(chǎn)生
        2.2.5 cGAS- STING雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)的建立
        2.2.6 拮抗宿主IFN-β產(chǎn)生的MDV病毒蛋白的篩選
    2.3 討論
第3章 MDV VP23蛋白逃逸DNA識(shí)別受體信號(hào)通路的分子機(jī)制
    3.1 材料和方法
        3.1.1 病毒、細(xì)胞及抗體
        3.1.2 主要儀器設(shè)備
        3.1.3 質(zhì)粒構(gòu)建
        3.1.4 熒光定量PCR
        3.1.5 雞IFN-β的檢測(cè)
        3.1.6 熒光素酶活性檢測(cè)
        3.1.7 RNA干擾實(shí)驗(yàn)
        3.1.8 VP23穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的構(gòu)建
        3.1.9 shRNA慢病毒干擾VP23實(shí)驗(yàn)
        3.1.10 免疫共沉淀與Western blotting實(shí)驗(yàn)
        3.1.11 激光共聚焦實(shí)驗(yàn)
        3.1.12 非變性蛋白膠實(shí)驗(yàn)
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 MDV VP23蛋白抑制cGAS-STING誘導(dǎo)的IFN-β表達(dá)
        3.2.2 MDV VP23蛋白抑制ISD誘導(dǎo)的IFN-β的產(chǎn)生
        3.2.3 VP23抑制病毒DNA觸發(fā)的IFN-β的產(chǎn)生并促進(jìn)病毒復(fù)制
        3.2.4 VP23敲低促進(jìn)IFN-β的產(chǎn)生并抑制病毒的復(fù)制
        3.2.5 VP23在轉(zhuǎn)錄因子IRF7水平抑制IFN-β表達(dá)
        3.2.6 VP23阻斷IRF7入核
        3.2.7 VP23與IRF7之間存在相互作用
        3.2.8 VP23競(jìng)爭(zhēng)性阻斷TBK1與IRF7之間的相互作用
        3.2.9 VP23與TBK1結(jié)合于IRF7的同一結(jié)構(gòu)域
    3.3 討論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]應(yīng)用雙重實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)雞馬立克氏病血清1型病毒[J]. 張穎,劉長(zhǎng)軍,秦運(yùn)安,張艷萍,張曉巍,郝永清.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2007(01)



本文編號(hào)：3152480