本論文制備了兩種能識(shí)別喹諾酮類和磺胺類獸藥的單克隆抗體,并建立了分別檢測(cè)喹諾酮類和磺胺類藥物的酶聯(lián)免疫法分析方法。采用活化酯法直接將諾氟沙星與載體蛋白BSA偶聯(lián),制備人工免疫原并免疫小鼠。將小鼠的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合,通過(guò)篩選獲得雜交瘤細(xì)胞。應(yīng)用有限稀釋法進(jìn)行克隆,最終獲得一株能穩(wěn)定分泌識(shí)別喹諾酮類藥物抗體的細(xì)胞株4C6F6D。亞型鑒定為：重鏈,IgG3,輕鏈,Kappa。通過(guò)優(yōu)化抗體包被量、酶標(biāo)抗原的稀釋倍數(shù)、封閉液、pH等條件,建立了一種直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法。該方法的靈敏度IC50=0.45±0.07μg/L,檢出限IC15=0.09±0.02μg/L。CIP、NAL、ENR、PEF、ENO、OFL、 OXO、FLU、FLE和LOM的1C50值范圍為0.27-8.54μ/L,交叉反應(yīng)率為5.27-166.67%；MAR、SAR、DIF、GAT、PIP和SPA的IC50值范圍為14.21-88.13μg/L,交叉反應(yīng)率為0.51-3.17%。應(yīng)用活化酯法將兩種磺胺類人工半抗原與載體蛋白KLH進(jìn)行偶聯(lián),制備人工免疫原并免疫小鼠。將優(yōu)選后的小鼠脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合,... 

【文章來(lái)源】：天津科技大學(xué)天津市

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
    1.1 獸藥殘留概述
        1.1.1 動(dòng)物性食品中獸藥殘留現(xiàn)狀
        1.1.2 獸藥殘留產(chǎn)生的主要原因
        1.1.3 獸藥殘留的危害
        1.1.4 獸藥殘留控制措施
    1.2 喹諾酮類獸藥概述
        1.2.1 喹諾酮類藥物
        1.2.2 喹諾酮類藥物的危害
        1.2.3 喹諾酮類藥物殘留檢測(cè)方法研究進(jìn)展
    1.3 磺胺類藥物概述
        1.3.1 磺胺類藥物
        1.3.2 磺胺類藥物殘留的危害
        1.3.3 磺胺類藥物殘留檢測(cè)方法研究進(jìn)展
    1.4 單克隆抗體技術(shù)簡(jiǎn)介
        1.4.1 單克隆抗體
        1.4.2 單克隆抗體的應(yīng)用
        1.4.3 單克隆抗體制備技術(shù)最新進(jìn)展
    1.5 論文研究的目的及意義
    1.6 論研究的主要內(nèi)容
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 主要藥品和試劑
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.4 常用溶液的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 喹諾酮類藥物單克隆抗體制備及ELISA法的建立
        2.2.2 磺胺類藥物單克隆抗體制備及ELISA法的建立
3 結(jié)果與討論
    3.1 喹諾酮類藥物單克隆抗體制備及ELISA法建立
        3.1.1 喹諾酮類藥物人工抗原的設(shè)計(jì)
        3.1.2 小鼠抗血清效價(jià)及其特異性的測(cè)定
        3.1.3 雜交瘤細(xì)胞株的篩選和克隆
        3.1.4 單克隆抗體的亞型鑒定
        3.1.5 單克隆抗體的腹水純化
        3.1.6 喹諾酮類藥物直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法的建立
        3.1.7 喹諾酮類藥物直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法性能指標(biāo)的評(píng)價(jià)
    3.2 磺胺類單克隆抗體的制備與ELISA法的建立
        3.2.1 磺胺免疫原的合成
        3.2.2 磺胺包被原及酶標(biāo)抗原的合成
        3.2.3 小鼠抗血清效價(jià)及其特異性的測(cè)定
        3.2.4 雜交瘤細(xì)胞株的篩選和克隆
        3.2.5 單克隆抗體的亞型鑒定
        3.2.6 單克隆抗體的腹水純化
        3.2.7 磺胺類藥物間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法的建立
        3.2.8 磺胺類藥物直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法的建立
        3.2.9 磺胺類藥物間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法性能指標(biāo)的評(píng)價(jià)
        3.2.10 磺胺類藥物直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法性能指標(biāo)的評(píng)價(jià)
4 結(jié)論
5 展望
6 參考文獻(xiàn)
7 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文情況
8 致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]分泌抗恩諾沙星單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株的建立[D]. 龍淼.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3150355