本論文制備了兩種能識別喹諾酮類和磺胺類獸藥的單克隆抗體,并建立了分別檢測喹諾酮類和磺胺類藥物的酶聯(lián)免疫法分析方法。采用活化酯法直接將諾氟沙星與載體蛋白BSA偶聯(lián),制備人工免疫原并免疫小鼠。將小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞進行融合,通過篩選獲得雜交瘤細胞。應用有限稀釋法進行克隆,最終獲得一株能穩(wěn)定分泌識別喹諾酮類藥物抗體的細胞株4C6F6D。亞型鑒定為：重鏈,IgG3,輕鏈,Kappa。通過優(yōu)化抗體包被量、酶標抗原的稀釋倍數、封閉液、pH等條件,建立了一種直接競爭ELISA法。該方法的靈敏度IC50=0.45±0.07μg/L,檢出限IC15=0.09±0.02μg/L。CIP、NAL、ENR、PEF、ENO、OFL、 OXO、FLU、FLE和LOM的1C50值范圍為0.27-8.54μ/L,交叉反應率為5.27-166.67%；MAR、SAR、DIF、GAT、PIP和SPA的IC50值范圍為14.21-88.13μg/L,交叉反應率為0.51-3.17%。應用活化酯法將兩種磺胺類人工半抗原與載體蛋白KLH進行偶聯(lián),制備人工免疫原并免疫小鼠。將優(yōu)選后的小鼠脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞進行融合,... 

【文章來源】：天津科技大學天津市

【文章頁數】：77 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
    1.1 獸藥殘留概述
        1.1.1 動物性食品中獸藥殘留現狀
        1.1.2 獸藥殘留產生的主要原因
        1.1.3 獸藥殘留的危害
        1.1.4 獸藥殘留控制措施
    1.2 喹諾酮類獸藥概述
        1.2.1 喹諾酮類藥物
        1.2.2 喹諾酮類藥物的危害
        1.2.3 喹諾酮類藥物殘留檢測方法研究進展
    1.3 磺胺類藥物概述
        1.3.1 磺胺類藥物
        1.3.2 磺胺類藥物殘留的危害
        1.3.3 磺胺類藥物殘留檢測方法研究進展
    1.4 單克隆抗體技術簡介
        1.4.1 單克隆抗體
        1.4.2 單克隆抗體的應用
        1.4.3 單克隆抗體制備技術最新進展
    1.5 論文研究的目的及意義
    1.6 論研究的主要內容
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 主要藥品和試劑
        2.1.2 主要儀器設備
        2.1.3 實驗動物
        2.1.4 常用溶液的配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 喹諾酮類藥物單克隆抗體制備及ELISA法的建立
        2.2.2 磺胺類藥物單克隆抗體制備及ELISA法的建立
3 結果與討論
    3.1 喹諾酮類藥物單克隆抗體制備及ELISA法建立
        3.1.1 喹諾酮類藥物人工抗原的設計
        3.1.2 小鼠抗血清效價及其特異性的測定
        3.1.3 雜交瘤細胞株的篩選和克隆
        3.1.4 單克隆抗體的亞型鑒定
        3.1.5 單克隆抗體的腹水純化
        3.1.6 喹諾酮類藥物直接競爭ELISA法的建立
        3.1.7 喹諾酮類藥物直接競爭ELISA法性能指標的評價
    3.2 磺胺類單克隆抗體的制備與ELISA法的建立
        3.2.1 磺胺免疫原的合成
        3.2.2 磺胺包被原及酶標抗原的合成
        3.2.3 小鼠抗血清效價及其特異性的測定
        3.2.4 雜交瘤細胞株的篩選和克隆
        3.2.5 單克隆抗體的亞型鑒定
        3.2.6 單克隆抗體的腹水純化
        3.2.7 磺胺類藥物間接競爭ELISA法的建立
        3.2.8 磺胺類藥物直接競爭ELISA法的建立
        3.2.9 磺胺類藥物間接競爭ELISA法性能指標的評價
        3.2.10 磺胺類藥物直接競爭ELISA法性能指標的評價
4 結論
5 展望
6 參考文獻
7 攻讀碩士學位期間發(fā)表論文情況
8 致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]分泌抗恩諾沙星單克隆抗體雜交瘤細胞株的建立[D]. 龍淼.吉林農業(yè)大學 2006



本文編號：3150355