為建立犬瘟熱病毒（CDV）臨床快速檢測(cè)方法,針對(duì)CDV保守N基因依據(jù)重組酶聚合酶等溫?cái)U(kuò)增（RPA）引物設(shè)計(jì)原理進(jìn)行RPA引物探針設(shè)計(jì),通過(guò)反應(yīng)條件優(yōu)化、敏感性試驗(yàn)、特異性試驗(yàn)和臨床樣品檢測(cè),建立了CDV實(shí)時(shí)熒光RT-RPA檢測(cè)方法。結(jié)果顯示,反應(yīng)體系中M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶最適濃度為4 U/μL,所建CDV實(shí)時(shí)熒光RT-RPA檢測(cè)方法特異性較好,敏感性最低可檢測(cè)到5.68×10² copies/μL,高于國(guó)標(biāo)RT-PCR（GB/T 27532-2011）檢測(cè)方法。建立的CDV實(shí)時(shí)熒光RT-RPA檢測(cè)方法具有較高的敏感性和特異性、操作簡(jiǎn)便、20 min內(nèi)判定結(jié)果,可用于臨床犬瘟熱快速診斷,對(duì)犬瘟熱的防控具有重要意義。 

【文章來(lái)源】：動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2020,41(11)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

目標(biāo)基因擴(kuò)增結(jié)果

為篩選反轉(zhuǎn)錄酶最佳反應(yīng)濃度,選取M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶終濃度2、4、8 U/μL進(jìn)行RT-RPA熒光檢測(cè)。結(jié)果顯示,反轉(zhuǎn)錄酶在4 U/μL濃度下反應(yīng)起峰時(shí)間最短,峰值最高(圖2),因此本研究將M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶最適反應(yīng)濃度定為4 U/μL。2.3 CDV實(shí)時(shí)熒光RT-RPA特異性試驗(yàn)

結(jié)果顯示,經(jīng)實(shí)時(shí)熒光RT-RPA檢測(cè),CDV核酸樣品在反應(yīng)7 min后出現(xiàn)熒光信號(hào)顯著增強(qiáng),其他對(duì)照病毒核酸樣品均未檢測(cè)出熒光信號(hào)(圖3)。國(guó)標(biāo)RT-PCR檢測(cè)也僅有CDV核酸樣品出現(xiàn)特異性擴(kuò)增,其他對(duì)照病毒均無(wú)相應(yīng)條帶(圖4)。表明所建CDV RT-RPA檢測(cè)方法特異性較好。圖4 CDV RT-PCR特異性試驗(yàn)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 施奕,徐昌平,余蓓蓓,盧亦愚,梅玲玲.  病毒學(xué)報(bào). 2020(03)
[2]快速檢測(cè)犬瘟熱病毒的實(shí)時(shí)熒光RPA方法的建立[J]. 熊煒,王艷,王楷宬,蔣靜,黃保續(xù),田楨干,林穎崢,李健.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2019(01)
[3]犬瘟熱的研究進(jìn)展[J]. 朱慶賀,張鵬宇,王爽,陳曦,王觀悅,史同瑞.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2017(19)



本文編號(hào)：3147102