用轉基因動物生產藥用蛋白已取得突破性進展,具有廣闊的應用前景。與哺乳動物的乳腺生物反應器相比,家禽輸卵管作為生物反應器則具有個體小,產蛋量高,世代間隔小,易于規(guī)模化生產,禽蛋中蛋白含量相對較高等優(yōu)勢。但是基于禽類自身的生殖生理特點,雞輸卵管生物反應器的研究相對滯后,外源蛋白在輸卵管中缺乏獲得特異、高效率的表達調控手段。近幾年,轉基因家禽的制備在國內外多個研究機構取得了成功,如何使轉基因家禽高效率的生產重組蛋白,已成為決定家禽生物反應器能否進入應用領域的關鍵。本實驗擬篩選高效調控卵清蛋白基因表達的元件,并將其整合制備人工優(yōu)化啟動子,將能有效提高卵清蛋白的生產效率。本研究根據實驗室已有結果,選取雞輸卵管卵清蛋白基因上游調控序列和第一內含子作為研究對象,對其進行表達載體構建和優(yōu)化研究。本研究從以下幾方面開展：1、雞卵清蛋白基因上游調控序列表達載體的構建根據實驗室已有結果對雞卵清蛋白基因上游調控序列進行分析得出,-921-+38區(qū)域具有較高的表達活性,但失去了組織特異性,上游2.1kb具有較高的轉錄活性和組織特異性,3.1kb區(qū)域則具有更嚴密的組織特異性,長于3.1kb表達活性顯著降低。根據分... 

【文章來源】：南京農業(yè)大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：82 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 文獻綜述
    1.1 轉基因家禽的研究概況
    1.2 目前轉基因雞的制備方法
    1.3 雞輸卵管作為生物反應器的優(yōu)勢
    1.4 卵清蛋白基因結構及其表達調控機理
    1.5 卵清蛋白基因內含子功能的研究
    1.6 本課題研究概況
第二章 第一內含子系列變異報告載體的制備
    2.1 材料和儀器
    2.2 實驗方法
    2.3 實驗結果
    2.4 測序比對結果
    2.5 討論
第三章 雞卵清蛋白基因上游調控序列系列變異熒光素酶報告基因載體構建
    3.1 材料與試劑儀器
    3.2 試驗方法
    3.3 實驗結果
    3.4 討論
第四章 幾種重組報告基因載體表達活性測定
    4.1 材料與試劑儀器
    4.2 實驗方法
    4.3 實驗結果
    4.4 討論
第五章 雞原代輸卵管上皮細胞的培養(yǎng)
    5.1 材料與試劑儀器
    5.2 試驗步驟
    5.3 實驗結果
    5.4 討論
第六章 原代輸卵管上皮細胞電轉染條件的優(yōu)化
    6.1 材料試劑與儀器
    6.2 試驗方法
    6.3 實驗結果
    6.4 討論
全文結論
創(chuàng)新點
后續(xù)研究展望
參考文獻
致謝



本文編號：3144680