leachii支原體可直接引起犢牛多發(fā)性關(guān)節(jié)炎和母牛乳房炎,與犢牛肺炎有關(guān),屬于支原體科（Mycoplasmataceae）、支原體屬（Mycoplasma）、絲狀支原體族（Mycoplasma mycoides）成員之一。其引起的犢牛多發(fā)性關(guān)節(jié)炎的致死率不高,但是對(duì)關(guān)節(jié)造成的不可逆性損傷,導(dǎo)致發(fā)病犢牛100%淘汰,對(duì)養(yǎng)牛業(yè)具有較大威脅。我國(guó)于2009年在患關(guān)節(jié)炎犢牛的關(guān)節(jié)液內(nèi)分離獲得leachii支原體。目前,國(guó)內(nèi)外對(duì)leachii支原體的研究主要集中于病原的分離鑒定、遺傳進(jìn)化分類以及致病性等方面,而對(duì)該病原的致病機(jī)理、傳播途徑以及防控措施的研究還鮮有報(bào)道。已有研究表明,支原體對(duì)宿主細(xì)胞的直接粘附是其感染的第一步,是研究支原體致病機(jī)制的重要方面,因此對(duì)leachii支原體粘附蛋白的篩選及鑒定有助于闡明其致病機(jī)制。本研究采用序列分析、同源性比對(duì)、蛋白表達(dá)及細(xì)胞粘附與粘附抑制試驗(yàn)等方法,篩選并鑒定leachii支原體的粘附蛋白。通過(guò)對(duì)leachii支原體全基因組序列的分析,并與其他支原體已鑒定的粘附蛋白進(jìn)行同源性比對(duì),假定lppA基因和eno基因編碼的LPPA蛋白和a-烯醇酶為leach... 

【文章來(lái)源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：53 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 支原體概述
        1.1.1 支原體的概念及特征
        1.1.2 支原體的分類
        1.1.3 支原體的分離鑒定
        1.1.4 支原體病的診斷
        1.1.5 支原體的致病機(jī)制
    1.2 支原體及其粘附蛋白的研究進(jìn)展
        1.2.1 人肺炎支原體（M.pneumonia,Mp）
        1.2.2 人生殖支原體（M.genitalium,Mg）
        1.2.3 豬肺炎支原體（M.opneumoniae,Mhp）
        1.2.4 牛支原體（M.bovis）
        1.2.5 絲狀支原體絲狀亞種SC小菌落型（M.mycoides subsp.Mycoides SC, MmmSC）
        1.2.6 山羊傳染性胸膜肺炎相關(guān)支原體
    1.3 leachii支原體概述
        1.3.1 發(fā)現(xiàn)與研究歷史
        1.3.2 致病性
        1.3.3 傳播途徑
        1.3.4 診斷
        1.3.5 防控
    1.4 研究的目的及意義
        1.4.1 leachii支原體粘附蛋白的篩選
        1.4.2 leachii支原體單克隆抗體的制備
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌株、載體、細(xì)胞及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 主要試劑及試劑盒
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
        2.1.4 主要試劑及配置方法
    2.2 方法
        2.2.1 leachii支原體的培養(yǎng)
        2.2.2 leachii支原體基因組的提取
        2.2.3 lppA基因及eno基因的PCR擴(kuò)增
        2.2.4 eno基因的定點(diǎn)誘變
        2.2.5 重組蛋白的表達(dá)與純化
        2.2.6 重組蛋白多克隆抗體的制備
        2.2.7 Western b1ot
        2.2.8 LPPA蛋白及a-烯醇酶的膜定位
        2.2.9 細(xì)胞粘附抑制試驗(yàn)
        2.2.11 重組蛋白特異性粘附試驗(yàn)
        2.2.12 leachii支原體全菌體免疫原的制備
        2.2.13 動(dòng)物的免疫接種
        2.2.14 雜交瘤細(xì)胞株的建立
        2.2.15 雜交瘤細(xì)胞的篩選
        2.2.16 腹水的制備
3 結(jié)果
    3.1 leachii支原體粘附蛋白的篩選與鑒定
        3.1.1 lppA和eno基因的獲得
        3.1.2 pET28a-lppA及pET28a-eno重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.1.3 重組質(zhì)粒pET28a-lppA和pET28a-eno的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.1.4 重組LPPA蛋白和a-烯醇酶的純化
        3.1.5 LPPA及a-烯醇酶的膜定位
        3.1.6 LPPA及a-烯醇酶的粘附特性
    3.2 leachii支原體單克隆抗體的制備
        3.2.1 leachii支原體單克隆抗體的反應(yīng)性
        3.2.2 leachii支原體單克隆抗體的效價(jià)
        3.2.3 leachii支原體單克隆抗體的亞類鑒定
        3.2.4 leachii支原體單克隆抗體的粘附抑制特性
4 全文結(jié)論
    4.1 leachii支原體粘附蛋白的篩選
    4.2 leachii支原體單克隆抗體的制備
5 討論
    5.1 LPPA蛋白與a-烯醇酶在leachii支原體粘附過(guò)程中的作用
    5.2 粘附蛋白與leachii支原體毒力的相關(guān)性
    5.3 粘附蛋白作為疫苗候選抗原的免疫保護(hù)性
    5.4 用單克隆抗體鑒定leachii支原體的粘附蛋白
    5.5 單克隆抗體在leachii支原體病診斷中的應(yīng)用
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]山羊傳染性胸膜肺炎的綜合防治[J]. 聶慶華,劉博宇,蔡亞南,張媛,趙權(quán).  吉林畜牧獸醫(yī). 2013(12)
[2]山羊傳染性胸膜肺炎雙價(jià)滅活疫苗的制備及應(yīng)用效果[J]. 文正常,王璇,潘淑惠,楊粵黔.  貴州農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(06)
[3]牛支原體病診斷方法的研究進(jìn)展[J]. 蔣勇,周蓓,黎曉敏.  飼料博覽. 2013(04)
[4]黏膜抗體在疫苗免疫效力評(píng)價(jià)中的前景[J]. 張亞,馮志新,張道華,劉茂軍,白方方,王海燕,邵國(guó)青.  生物技術(shù)通報(bào). 2012(02)
[5]家畜重要支原體病疫苗的研究進(jìn)展[J]. 張軒,儲(chǔ)岳峰,逯忠新.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2011(12)
[6]口蹄疫O型固相競(jìng)爭(zhēng)ELISA抗體檢測(cè)試劑盒的臨床應(yīng)用[J]. 柴靜,林密,周廣青,馮霞,馬軍武.  中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志. 2011(06)
[7]肺炎支原體P1蛋白的研究進(jìn)展[J]. 趙夢(mèng)楠,劉宗昂,王艦.  微生物學(xué)雜志. 2011(06)
[8]牛傳染性胸膜肺炎研究進(jìn)展[J]. 沈青春,韓明遠(yuǎn),王芳,寧宜寶.  中國(guó)奶牛. 2010(08)
[9]我國(guó)發(fā)生Leachii支原體引起的犢牛多發(fā)性關(guān)節(jié)炎[J]. 劉海軍,常繼濤,于力.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2010(06)
[10]生殖支原體致病機(jī)制研究現(xiàn)狀[J]. 劉紅芳,鐘山.  皮膚性病診療學(xué)雜志. 2010(02)

碩士論文
[1]牛支原體粘附相關(guān)因子-α-烯醇化酶的研究[D]. 宋志強(qiáng).中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2012



本文編號(hào)：3138127