不同致病力MDRV雙重RT-PCR檢測(cè)方法建立及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡研究
發(fā)布時(shí)間:2021-04-14 01:40
番鴨呼腸孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)是以感染番鴨出現(xiàn)“肝白點(diǎn)”為主要病變特征,并可引起軟腳,喜臥,趾、跗關(guān)節(jié)腫脹等癥狀的一種傳染性很強(qiáng)的病毒。2001年以來,本實(shí)驗(yàn)室分離出多株番鴨呼腸孤病毒,其中包括不同致病力的YB株和YJL株。經(jīng)測(cè)序分析,YB株與MDRV法國89026株的S4基因同源性達(dá)94%以上,而YJL株與禽呼腸孤病毒(Avian reovirus,ARV)S1133株、176株的S1基因之間同源率高達(dá)96%以上,YB株與YJL株之間S組基因同源性低于30%。YB毒株在臨床上表現(xiàn)為高致病力的特點(diǎn),能夠引起高的致死率,YJL毒株,在臨床上對(duì)番鴨表現(xiàn)為低致病力的特點(diǎn)。由于兩毒株在臨床癥狀上有著類似發(fā)病癥狀和致病機(jī)理,通過臨床診斷鑒別比較困難,所以建立一種快速、高效、特異的檢測(cè)方法對(duì)于臨床上區(qū)分不同致病力毒株具有重要意義。YJL株的S1基因編碼P10、P17和σ C三個(gè)蛋白,而YB株的S4基因編碼P10和σC兩個(gè)蛋白,不含有P17蛋白,且兩個(gè)毒株的P10蛋白基因的同源性極低。根據(jù)這2株病毒基因特點(diǎn),分別針對(duì)YB株P(guān)10蛋白基因和YJL株P(guān)17蛋白基因...
【文章來源】:福建農(nóng)林大學(xué)福建省
【文章頁數(shù)】:69 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
圖1單項(xiàng)PCR特異性擴(kuò)增結(jié)果??Fig.5.?Specific?amplification?res^Lts?of?single?PCR??
為288bp和441bp,位置與??預(yù)期大小相符。對(duì)這2株PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序獲得的序列,經(jīng)DNAstar軟件分析,??這些序列分別與原來的參考序列一致。??將YB株、YJL株與NCBI上公布的包括傳統(tǒng)毒株法國株89026在內(nèi)的6株??MDRV病毒株的P10蛋白基因和包括標(biāo)準(zhǔn)株美國S1133株、176ARV病毒株在內(nèi)??的6株ARV毒株的P17蛋白基因進(jìn)行同源序列比對(duì)(登錄號(hào)見表2-5),以得知??兩毒株在病原地域分布的地位和關(guān)系,2個(gè)蛋白基因核苷酸序列同源性分析及發(fā)??育進(jìn)化樹枝見圖2、圖3、圖4、圖5。由圖可知,YB毒株與傳統(tǒng)毒株國內(nèi)3株??MDRV毒株、法國89026株同源性均在94%以上,與YJL株、ARV?S1133株同??源性僅40%,從發(fā)育樹可知YB株與傳統(tǒng)法國株89026、國內(nèi)株ZJ2000、S12、??C4屬于同一進(jìn)化分支,YJL株與ARVS1133株屬于另外一進(jìn)化分支,關(guān)系較遠(yuǎn)。??而Y幾毒株與包括參考株美國S1133、加拿大株176在內(nèi)的國內(nèi)外幾株ARV毒??株同源性高達(dá)99%以上,從發(fā)育樹可知它們之間的演化距離只有0.4,說明其核??苷酸同源性很高。??表2-5?MDRV參考毒株??Table2-5?MDRV?reference?strains??毒株?ii?登錄號(hào)?ii?±ii?登錄號(hào)??Strain?Country?Accession?No.?Strain?Country?Accession?No.??MDRVYB-P10?中國福建?KC571174?ARV?SI?133?美國?AF330703??MDRV?89026?法國?AJ310526?ARV?PI00?美國?DQ868791??M
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【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]直接免疫熒光檢測(cè)禽呼腸孤病毒方法的建立[J]. 謝志勤,謝芝勛,劉加波,龐耀珊,鄧顯文,謝麗基,范晴. 中國動(dòng)物檢疫. 2012(11)
[2]一株新型鴨源呼腸孤病毒(TH11株)的分離與鑒定[J]. 陳宗艷,朱英奇,王世傳,李傳峰,李露,王玢繽,付玉志,高景鵬,王超,劉光清. 中國動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào). 2012(01)
[3]禽(番鴨)呼腸孤病毒TaqMan探針熒光RT-PCR檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[J]. 嚴(yán)進(jìn),關(guān)育芳,李中華,吳異健,吳寶成. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2009(11)
[4]番鴨呼腸孤病毒p10.8蛋白致細(xì)胞凋亡功能[J]. 張?jiān)?郭東春,耿宏偉,王鈺,魏萍. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2009(10)
[5]呼腸孤病毒科的系統(tǒng)發(fā)育分析[J]. 高芳鑾,范國成,謝荔巖,黃美英,吳祖建. 激光生物學(xué)報(bào). 2008(04)
[6]番鴨呼腸孤病毒誘導(dǎo)雛番鴨免疫器官細(xì)胞凋亡的研究[J]. 陳志勝,馬春全,盧玉葵,肖靜蕓. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2005(06)
[7]中國禽(番鴨)呼腸孤病毒分離株S1基因全序列分析[J]. 王劭,鄧國華,吳異健,吳寶成,陳化蘭. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2005(02)
[8]禽(番鴨)呼腸孤病毒誘導(dǎo)脾臟單核—巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞凋亡的超微觀察[J]. 姚金水,吳寶成,陳文列,陳家祥,吳異鍵. 福建農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2004(04)
[9]正呼腸孤病毒及其分類學(xué)依據(jù)研究進(jìn)展[J]. 張?jiān)?劉明,歐陽歲東,童光志. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2004(06)
[10]禽類呼腸孤病毒的分子生物學(xué)[J]. 劉文興,王劭,吳寶成. 畜牧獸醫(yī)科技信息. 2004(08)
碩士論文
[1]番鴨呼腸孤病毒S組基因序列分析及衣殼蛋白克隆表達(dá)[D]. 王劭.福建農(nóng)林大學(xué) 2005
[2]禽(雞源)呼腸孤病毒的分離與鑒定[D]. 梁英.福建農(nóng)林大學(xué) 2005
[3]番鴨呼腸孤病毒病診斷技術(shù)研究[D]. 王全溪.福建農(nóng)林大學(xué) 2004
本文編號(hào):3136403
【文章來源】:福建農(nóng)林大學(xué)福建省
【文章頁數(shù)】:69 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
圖1單項(xiàng)PCR特異性擴(kuò)增結(jié)果??Fig.5.?Specific?amplification?res^Lts?of?single?PCR??
為288bp和441bp,位置與??預(yù)期大小相符。對(duì)這2株PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序獲得的序列,經(jīng)DNAstar軟件分析,??這些序列分別與原來的參考序列一致。??將YB株、YJL株與NCBI上公布的包括傳統(tǒng)毒株法國株89026在內(nèi)的6株??MDRV病毒株的P10蛋白基因和包括標(biāo)準(zhǔn)株美國S1133株、176ARV病毒株在內(nèi)??的6株ARV毒株的P17蛋白基因進(jìn)行同源序列比對(duì)(登錄號(hào)見表2-5),以得知??兩毒株在病原地域分布的地位和關(guān)系,2個(gè)蛋白基因核苷酸序列同源性分析及發(fā)??育進(jìn)化樹枝見圖2、圖3、圖4、圖5。由圖可知,YB毒株與傳統(tǒng)毒株國內(nèi)3株??MDRV毒株、法國89026株同源性均在94%以上,與YJL株、ARV?S1133株同??源性僅40%,從發(fā)育樹可知YB株與傳統(tǒng)法國株89026、國內(nèi)株ZJ2000、S12、??C4屬于同一進(jìn)化分支,YJL株與ARVS1133株屬于另外一進(jìn)化分支,關(guān)系較遠(yuǎn)。??而Y幾毒株與包括參考株美國S1133、加拿大株176在內(nèi)的國內(nèi)外幾株ARV毒??株同源性高達(dá)99%以上,從發(fā)育樹可知它們之間的演化距離只有0.4,說明其核??苷酸同源性很高。??表2-5?MDRV參考毒株??Table2-5?MDRV?reference?strains??毒株?ii?登錄號(hào)?ii?±ii?登錄號(hào)??Strain?Country?Accession?No.?Strain?Country?Accession?No.??MDRVYB-P10?中國福建?KC571174?ARV?SI?133?美國?AF330703??MDRV?89026?法國?AJ310526?ARV?PI00?美國?DQ868791??M
00M?segment?S4.seq??[-1-…MDRVYBPIO.seq???—MDRVS12P10.seq??-??MDRVC4P10.seq???r?ARVS1133?segment?Slseq??,一?^?MDRVYJLseamentSl.seq??79.2?■■■■■■■■?"??i?i?i?i?i?i?i?i??70?60?50?40?30?20?10?0??Nucleotide?Substitutions?(x100)??圖3?P10基因發(fā)育進(jìn)化樹??Fig.?3?PIO?gene?phylogenetic?tree??Percent?Identity??1?2?3.4?5?6?7.??1?99?g?'?99/-{?99,8 ̄|99.5?]99i?|39.3?I?"l?—?l.fDRV?Fujian?YJL.seq??:_|||?99.S?丨100.0丨?99.3?i?99.3?丨?99.9?丨?T?—?ARV?China?C-98.seq??§?3?:?0.9?丨?0.4?99.8?I?99.1?丨?99.0?199.7?丨?3?ARV?Guang?R1.seq??〇-?4?0.2?|?0?0?!?0?2?MB?9^8?|?99.8?llOQ.O!?4?ARV?Taiwan?918?seq??^?5?0.5?l?0.7?0.9?l?0.2?"Mi?99.9?i?99.-1?:?ARV?US祆?S1133.seq??6?Q.6?0.?? ̄1.0?}?oT]?Q.1?Ml?99-3?[—6_—?ARV?USA?P100.seq??7?!?0.7?〇
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]直接免疫熒光檢測(cè)禽呼腸孤病毒方法的建立[J]. 謝志勤,謝芝勛,劉加波,龐耀珊,鄧顯文,謝麗基,范晴. 中國動(dòng)物檢疫. 2012(11)
[2]一株新型鴨源呼腸孤病毒(TH11株)的分離與鑒定[J]. 陳宗艷,朱英奇,王世傳,李傳峰,李露,王玢繽,付玉志,高景鵬,王超,劉光清. 中國動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào). 2012(01)
[3]禽(番鴨)呼腸孤病毒TaqMan探針熒光RT-PCR檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[J]. 嚴(yán)進(jìn),關(guān)育芳,李中華,吳異健,吳寶成. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2009(11)
[4]番鴨呼腸孤病毒p10.8蛋白致細(xì)胞凋亡功能[J]. 張?jiān)?郭東春,耿宏偉,王鈺,魏萍. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2009(10)
[5]呼腸孤病毒科的系統(tǒng)發(fā)育分析[J]. 高芳鑾,范國成,謝荔巖,黃美英,吳祖建. 激光生物學(xué)報(bào). 2008(04)
[6]番鴨呼腸孤病毒誘導(dǎo)雛番鴨免疫器官細(xì)胞凋亡的研究[J]. 陳志勝,馬春全,盧玉葵,肖靜蕓. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2005(06)
[7]中國禽(番鴨)呼腸孤病毒分離株S1基因全序列分析[J]. 王劭,鄧國華,吳異健,吳寶成,陳化蘭. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2005(02)
[8]禽(番鴨)呼腸孤病毒誘導(dǎo)脾臟單核—巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞凋亡的超微觀察[J]. 姚金水,吳寶成,陳文列,陳家祥,吳異鍵. 福建農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2004(04)
[9]正呼腸孤病毒及其分類學(xué)依據(jù)研究進(jìn)展[J]. 張?jiān)?劉明,歐陽歲東,童光志. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2004(06)
[10]禽類呼腸孤病毒的分子生物學(xué)[J]. 劉文興,王劭,吳寶成. 畜牧獸醫(yī)科技信息. 2004(08)
碩士論文
[1]番鴨呼腸孤病毒S組基因序列分析及衣殼蛋白克隆表達(dá)[D]. 王劭.福建農(nóng)林大學(xué) 2005
[2]禽(雞源)呼腸孤病毒的分離與鑒定[D]. 梁英.福建農(nóng)林大學(xué) 2005
[3]番鴨呼腸孤病毒病診斷技術(shù)研究[D]. 王全溪.福建農(nóng)林大學(xué) 2004
本文編號(hào):3136403
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