本研究以番鴨為研究對(duì)象,通過(guò)對(duì)番鴨精原干細(xì)胞（SSCs）的分離培養(yǎng)、鑒定以及體外培養(yǎng)體系的篩選,以期為將來(lái)進(jìn)行番鴨SSCs的長(zhǎng)期培養(yǎng)與遺傳操作提供基礎(chǔ)資料。1.以28-30胚齡番鴨為試驗(yàn)材料,通過(guò)兩步酶消化法結(jié)合差速貼壁法分離純化睪丸單細(xì)胞懸液,通過(guò)形態(tài)學(xué)鑒定、AKP染色以及特異表達(dá)基因的檢測(cè)證明分離出的單細(xì)胞懸液中存在SSCs。2.分別采用不同的飼養(yǎng)層及不同血清濃度體外培養(yǎng)SSCs,觀察其增殖水平及克隆生成率。SSCs在均含10%FBS的明膠包被的無(wú)飼養(yǎng)層、成纖維細(xì)胞（DEF）飼養(yǎng)層、支持細(xì)胞（Sertoli細(xì)胞）飼養(yǎng)層的培養(yǎng)體系中培養(yǎng)6d的增殖率平均為106.62%、125.14%、126.87%,細(xì)胞克隆率平均為3.30%、27.80%、29.85%;在使用Sertoli細(xì)胞飼養(yǎng)層并分別加入0%、5%、10%、15%FBS的培養(yǎng)體系中培養(yǎng)6d的增殖率平均為26.29%、123.81%、126.73%、119.12%,細(xì)胞克隆率平均為0、30.78%、28.08%、25.08%。不同飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系及血清含量不同的培養(yǎng)體系顯著優(yōu)于對(duì)照組（P<0.01）。培養(yǎng)于飼養(yǎng)層上,添加適當(dāng)... 

【文章來(lái)源】：福建農(nóng)林大學(xué)福建省

【文章頁(yè)數(shù)】：45 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１體外培養(yǎng)傳至第二代的ＤＥＦ?（４００Ｘ）??

圖２接種番鴨ＳＳＣｓ的Ｓｅｒｔｏｌｉ細(xì)胞詞養(yǎng)層（２００?Ｘ?）??Ｆｉｇ．２?Ｓｅｒｔｏｌｉ?ｃｅｌｌｓ?ｆｅｅｄｅｒ?ｌａｙｅｒｓ?ｓｅｅｄｉｎｇ?ｏｆ?ＳＳＣｓ?（２００?ＸＳＳＣｓ體外培養(yǎng)效果的影響??表３不同飼養(yǎng)層對(duì)番鴨ＳＳＣｓ體外培養(yǎng)效果的比?Ｔｈｅ?ｒａｔｅ?ｏｆ?ＳＳＣｓ?ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ?ａｎｄ?ＳＳＣｓ?ｃｏｌｏｎｙ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅ對(duì)照組?ＤＥＦ詞養(yǎng)層?ＳｅＣｏｎｔｒｏｌ?ＤＥＦ?ｆｅｅｄｅｒ?ｌａｙｅｒ?Ｓｅ１０６．６２±３．２１Ａ?１２５．１４±１．６６Ｂ，?Ａ?，?Ｂ３．３０?士?０．９３ａ?２７．８０±３．１８ｂ母表示有無(wú)顯著性差異。不同大寫(xiě)字母為極顯著（Ｐ＜０．０１），表示差異不顯著（Ｐ＞０．０５）。下表同。??ａｒｋｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｓａｍｅ?ｒｏｗ?ｓｈｏｗ?ｗｉｔｈ?ｏｒ?ｗｉｔｈｏｕｔ?ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ．?Ｔｈ

表明ＳＳＣｓ已經(jīng)開(kāi)始退化。在培養(yǎng)至６ｄ時(shí)ＳＳＣｓ細(xì)胞增殖率為１０６．６２％，細(xì)胞克隆率為３．３０％。??接種于ＤＥＦ飼養(yǎng)層上的ＳＳＣｓ在培養(yǎng)至４ｄ時(shí)開(kāi)始形成葡萄串狀或是巢狀的克隆團(tuán)族，??細(xì)胞數(shù)明顯多于無(wú)飼養(yǎng)層組（如圖４）。此時(shí)ＳＳＣｓ增值旺盛但貼壁不牢。培養(yǎng)至６ｄ時(shí)，飼??養(yǎng)層細(xì)胞貼壁不牢，開(kāi)始老化；部分ＳＳＣｓ有開(kāi)始分化的跡象，細(xì)胞內(nèi)形成空泡（如圖５），??隨即將ＳＳＣｓ傳代，然后接種于新的飼養(yǎng)層。此時(shí)ＳＳＣｓ細(xì)胞增殖率為１２５．１４％，細(xì)胞克隆??率為２７．８０％。傳代后２－３ｄ，大部分ＳＳＣｓ呈集落狀生長(zhǎng)，細(xì)胞邊緣不明顯，細(xì)胞數(shù)逐步下??降后趨于穩(wěn)定。細(xì)胞傳至第三代后細(xì)胞克隆能力下降，開(kāi)始分化、解離，隨換液丟失嚴(yán)重。??■丨■??圖４、５?ＤＦＥ詞養(yǎng)層組培養(yǎng)４ｄ和６ｄ的ＳＳＣｓ集落（４００Ｘ?）??Ｆｉｇ．４、５?ＳＳＣｓ?ｃｏｌｏｎｙ?ｆｏｒｍｅｄ?ｏｎ?ＤＥＦ?ｆｅｅｄｅｒ?ｌａｙｅｒｓ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?４ｄ?ａｎｄ?６ｄ?ｌａｔｅｒ?（４００?Ｘ）??接種于Ｓｅｒｔｏｌｉ細(xì)胞飼養(yǎng)層上培養(yǎng)４ｄ的ＳＳＣｓ在形態(tài)、貼壁時(shí)間和生長(zhǎng)情況等方面與ＤＥＦ??飼養(yǎng)層組均無(wú)明顯差異（如圖６）。在培養(yǎng)至６ｄ，?ＳＳＣｓ細(xì)胞增殖率為１２６．８７％，細(xì)胞克隆率??為?２９．８５％?（如圖?７）。??２２??

【參考文獻(xiàn)】：
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