為提高原核表達傳染性法氏囊病毒（IBDV）VP2蛋白純度,在大腸桿菌中表達VP2蛋白,并對其進行純化方法優(yōu)化及其免疫原性分析。利用瓊脂擴散試驗（AGP）測定VP2蛋白效價并進行SDS-PAGE和Western blot鑒定;采用飽和硫酸銨溶液和離子交換層析對目的蛋白進行純化,并對純化填料、洗脫液離子強度及緩沖液的pH值進行優(yōu)化,以確定最佳純化條件。將純化的VP2蛋白免疫SPF雞,定期采血用ELISA方法測定其免疫抗體并進行病理組織檢測。SDS-PAGE及Western blot鑒定結果顯示,VP2分子質量約為50 ku,且具有良好反應原性,VP2蛋白可溶性表達的AGP效價為1∶16。純化結果顯示,利用強陰離子層析優(yōu)化鹽離子濃度及pH值可獲得純度較高的VP2蛋白,其質量濃度為0.6 mg/mL。純化的VP2蛋白加商業(yè)佐劑免疫雞28 d后,雞產(chǎn)生的特異性免疫抗體滴度最高,且攻毒后的保護率可達到80%,法氏囊無明顯病理組織損傷。綜上,利用大腸桿菌成功表達了VP2蛋白,純化的VP2蛋白純度較高且具有良好的免疫原性。 

【文章來源】：河南農(nóng)業(yè)科學. 2020,49(09)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

重組質粒pET28a-VP2的BamHⅠ和XhoⅠ雙酶切鑒定

VP2蛋白的可溶性表達結果

AGP效價檢測結果

【參考文獻】：
期刊論文
[1]雞傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白及其疫苗的研究進展[J]. 韓玉婷,何勇,許革學,朱艷平,馬秀園,王選年.  河南農(nóng)業(yè)科學. 2016(03)
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碩士論文
[1]傳染性法氏囊病強、弱毒衣殼蛋白的可溶性表達、純化及應用[D]. 高祥.中國農(nóng)業(yè)科學院 2017



本文編號：3133006