為提高原核表達(dá)傳染性法氏囊病毒（IBDV）VP2蛋白純度,在大腸桿菌中表達(dá)VP2蛋白,并對(duì)其進(jìn)行純化方法優(yōu)化及其免疫原性分析。利用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（AGP）測定VP2蛋白效價(jià)并進(jìn)行SDS-PAGE和Western blot鑒定;采用飽和硫酸銨溶液和離子交換層析對(duì)目的蛋白進(jìn)行純化,并對(duì)純化填料、洗脫液離子強(qiáng)度及緩沖液的pH值進(jìn)行優(yōu)化,以確定最佳純化條件。將純化的VP2蛋白免疫SPF雞,定期采血用ELISA方法測定其免疫抗體并進(jìn)行病理組織檢測。SDS-PAGE及Western blot鑒定結(jié)果顯示,VP2分子質(zhì)量約為50 ku,且具有良好反應(yīng)原性,VP2蛋白可溶性表達(dá)的AGP效價(jià)為1∶16。純化結(jié)果顯示,利用強(qiáng)陰離子層析優(yōu)化鹽離子濃度及pH值可獲得純度較高的VP2蛋白,其質(zhì)量濃度為0.6 mg/mL。純化的VP2蛋白加商業(yè)佐劑免疫雞28 d后,雞產(chǎn)生的特異性免疫抗體滴度最高,且攻毒后的保護(hù)率可達(dá)到80%,法氏囊無明顯病理組織損傷。綜上,利用大腸桿菌成功表達(dá)了VP2蛋白,純化的VP2蛋白純度較高且具有良好的免疫原性。 

【文章來源】：河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020,49(09)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒pET28a-VP2的BamHⅠ和XhoⅠ雙酶切鑒定

VP2蛋白的可溶性表達(dá)結(jié)果

AGP效價(jià)檢測結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雞傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白及其疫苗的研究進(jìn)展[J]. 韓玉婷,何勇,許革學(xué),朱艷平,馬秀園,王選年.  河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(03)
[2]雞傳染性法氏囊病病毒BC6/85株VP2基因的原核表達(dá)、純化及鑒定[J]. 劉丹,楊承槐,吳華偉,李啟紅,高金源,陳建,郎洪武.  中國獸藥雜志. 2015(05)

碩士論文
[1]傳染性法氏囊病強(qiáng)、弱毒衣殼蛋白的可溶性表達(dá)、純化及應(yīng)用[D]. 高祥.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2017



本文編號(hào)：3133006