旨在研究腸道微生物對(duì)仔豬肝臟、空腸內(nèi)容物和糞便膽汁酸譜及仔豬膽汁酸代謝的影響。隨機(jī)選擇無(wú)菌剖腹產(chǎn)所得仔豬11頭,分為無(wú)菌豬組（GF組,5頭）和糞菌移植組（FMT組,6頭）。GF組始終保持無(wú)菌狀態(tài),FMT組在7日齡時(shí)口服植入健康豬源糞菌。42日齡時(shí),采集肝臟組織、空腸內(nèi)容物、新鮮糞便用于膽汁酸定量,肝臟組織與空腸組織進(jìn)行膽汁酸代謝相關(guān)基因定量。結(jié)果表明:相比于GF組,FMT組仔豬糞便中的總膽汁酸水平顯著高于GF組（P<0.01）;FMT仔豬空腸內(nèi)容物和糞便中次級(jí)膽汁酸占總膽汁酸的比例顯著高于GF仔豬（P<0.05）,肝臟中也發(fā)現(xiàn)同樣的趨勢(shì)（P<0.05）;相比于GF仔豬,FMT仔豬肝臟中CYP7A1、BAT、FXR等與膽汁酸合成、結(jié)合與轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因的下調(diào),腸道中轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白MRP2基因表達(dá)上調(diào)。由此可見(jiàn),腸道微生物的轉(zhuǎn)入與定植不僅能夠增加仔豬膽汁酸的排泄,提高次級(jí)膽汁酸占比,改變仔豬膽汁酸譜,而且還影響膽汁酸的肝腸循環(huán)過(guò)程。 

【文章來(lái)源】：生物技術(shù)通報(bào). 2020,36(10)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

肝臟、空腸內(nèi)容物和糞便中含量最高的10種膽汁酸

2.4 GF仔豬和FMT仔豬膽汁酸肝腸循環(huán)相關(guān)基因表達(dá)水平的差異研究利用qPCR技術(shù)分析了膽汁酸產(chǎn)生、結(jié)合和再吸收有關(guān)途徑的基因表達(dá)情況。FMT仔豬肝臟中膽汁酸合成關(guān)鍵酶:膽固醇7-羥化酶(Cholesterol 7-alpha hydroxy-lase,CYP7A1)基因的表達(dá)量相比GF仔豬下調(diào)(圖6),約為GF仔豬的37%(F=0.37±0.17,P<0.05,表5),而肝內(nèi)細(xì)胞色素P450家族成員27A1(Recombinant cytochrome p450 27A1,CYP27A1)并沒(méi)有受到顯著影響。與GF仔豬肝臟相比,FMT組仔豬肝臟中參與膽汁酸結(jié)合氨基酸的膽汁酸輔酶α合酶(Bile acid-CoA synthetase,BACS)基因及其上游調(diào)節(jié)因子肝細(xì)胞核因子4(Hepatocyte nuclear factor 4α,HNF4α)的表達(dá)量未受影響。同樣與膽汁酸結(jié)合相關(guān)的酶:膽汁酸氨基酸轉(zhuǎn)化酶(Bile acid transporter,BAT)在FMT仔豬肝臟基因表達(dá)量下調(diào),僅約為GF仔豬的43%(F=0.43±0.15,P<0.01,表5)。法尼醇X受體(farnesoid X receptor,FXR)在調(diào)節(jié)膽汁酸合成和體內(nèi)平衡方面起著關(guān)鍵作用,相比于GF仔豬,FMT仔豬肝臟的FXR表達(dá)水平顯著降低,為GF仔豬的48%(F=0.48±0.17,P<0.05),但其下游靶點(diǎn)小異二聚體伴侶(Small heterodimer partner,SHP)和肝受體同系物-1(Liver receptor homolog-1,LRH-1)的基因表達(dá)未受到影響。同樣被視為膽汁酸調(diào)節(jié)器的G蛋白偶聯(lián)受體(G protein-coupled receptor for bile acids,TGR5)在FMT仔豬肝臟中基因表達(dá)量相比GF仔豬下調(diào),僅為GF仔豬的57%(F=0.57±0.09,P<0.01),而在空腸中基因表達(dá)量未見(jiàn)顯著差異(P>0.05)。雖然FMT仔豬空腸組織中FXR及其分子靶點(diǎn)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子19(Fibroblast growth factor 19,FGF19)基因表達(dá)與GF豬并無(wú)顯著差異,但FGF19在FMT仔豬肝臟中的受體基因成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體4(Fibroblast growth factor receptor4,FGFR4)和KLOTHO-β(KLβ)相比GF仔豬均下調(diào),分別為GF仔豬的42%和25%(P<0.01)。與GF仔豬相比,FMT仔豬空腸組織中多耐藥相關(guān)蛋白-2(Multidrug resistance-associated protein-2,MRP2)基因表達(dá)量約為GF仔豬的1.86倍(F=1.86±0.37,P<0.05)。數(shù)據(jù)結(jié)果顯示,FMT仔豬空腸組織中鈉鹽依賴(lài)性膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)體(Apical sodium-dependent aile acid transporter,ASBT)基因的相對(duì)表達(dá)量約為GF仔豬的2.38倍,但由于此次試驗(yàn)個(gè)體較少,數(shù)據(jù)變異較大造成差異不顯著(P>0.05)。基底側(cè)轉(zhuǎn)運(yùn)體多藥耐藥蛋白 3(Multidrug resistance-associated protein 3,MRP3)和回腸膽汁酸結(jié)合蛋白(Ileal bile acid binding protein,IBABP)并未受到明顯影響。而肝臟中的其他轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白有機(jī)溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)體(Organic solute transporter α,OSTα)、膽鹽排泌泵(Bilesalt excretory pump,BSEP)、牛磺膽酸鈉共轉(zhuǎn)運(yùn)體(Na+/taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)、表達(dá)量組間差異不顯著(P>0.05)。有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽1(Organic anion transporting polypeptides1,OATP1)在FMT仔豬肝臟中的表達(dá)量是GF仔豬的4.99倍,但由于數(shù)據(jù)變異大而差異不顯著(P>0.05)。

仔豬(GF、FMT組)肝臟、空腸內(nèi)容物和糞便的膽汁酸種類(lèi)韋恩分析圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]無(wú)菌豬的制備與微生物質(zhì)量控制[J]. 孫靜,杜蕾,丁玉春,吳夢(mèng),羅林,楊松全,黃勇,曹浩然,鐘浩,劉作華,葛良鵬.  中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào). 2017(06)
[2]Bile acids:Chemistry,physiology,and pathophysiology[J]. Maria J Monte,Jose JG Marin,Alvaro Antelo,Jose Vazquez-Tato.  World Journal of Gastroenterology. 2009(07)



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