地衣芽孢桿菌是飼料上常用的益生菌之一,在地衣芽孢桿菌發(fā)酵生產(chǎn)中噬菌體的感染現(xiàn)象非常普遍。本文對地衣芽孢桿菌噬菌體性狀以及抗噬菌體菌株的誘變篩選進行了研究。得到如下結果：（1）通過分離純化,從地衣芽孢桿菌菌粉中得到2種噬菌體,命名為DB01和DB02,兩種噬菌體對三株地衣芽孢桿菌TC侵染能力弱,宿主專一性強。經(jīng)純化培養(yǎng)后噬菌體的濃度最高達109pfu/mL以上。（2）研究了生產(chǎn)環(huán)境噬菌體的分布及殺滅方法。生產(chǎn)工廠的土壤、空氣、塵埃中地衣芽孢桿菌噬菌體平均含量分別達到1.7×105pfu/g、2.9×103pfu/g、6.0×104pfu/g,種類豐富。100℃濕熱處理5min不能完全殺滅噬菌體;1.4%漂白粉在實驗室可完全殺滅噬菌體,工廠使用2%漂白粉消毒,仍有極少量噬菌體存活。（3）研究了噬菌體和溫度對地衣芽孢桿菌的影響。菌體長得越好,噬菌體的數(shù)量越少。噬菌體污染嚴重時,菌數(shù)只能維持在50億左右。北海從三月到到七月平均氣溫從19℃到34℃,平均氣溫28℃為臨界點,高于臨界點菌數(shù)可維持在100億以上。（4）研究了紫外線+亞甲基胍復合誘變條件。紫外線：20w紫外燈,距離40cm,照射3mm... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 噬菌體定義
    1.2 噬菌體分類
        1.2.1 烈性噬菌體和溫和噬菌體
        1.2.2 按照噬菌體的核酸類型分類
    1.3 噬菌體侵染過程和細菌的噬菌體防御體系
        1.3.1 噬菌體侵染細菌的過程
    1.4 噬菌體的防御體系
        1.4.1 常見的噬菌體防御體系
        1.4.2 CASS-噬菌體的新防御體系
    1.5 噬菌體對發(fā)酵工業(yè)危害
    1.6 抗噬菌體污染的措施
        1.6.1 預防措施
        1.6.2 感染噬菌體后的處理辦法
    1.7 地衣芽孢桿菌應用
    1.8 地衣芽孢桿菌的發(fā)酵工藝
        1.8.1 地衣芽孢桿菌的固體發(fā)酵
        1.8.2 地衣芽孢桿菌的液體發(fā)酵
    1.9 抗噬菌體菌株篩選的研究進展
    1.10 本研究的目的
    技術路線
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌株和噬菌體
        2.1.2 培養(yǎng)基
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器
    2.2 方法
        2.2.1 噬菌體的分離純化及原液制備
        2.2.2 噬菌體效價測定
        2.2.3 互染實驗
        2.2.4 環(huán)境抽樣檢測：土壤、塵埃、積水和空氣
        2.2.5 殺滅環(huán)境中的噬菌體
        2.2.6 噬菌體和溫度對芽孢桿菌生長的影響的測定方法
        2.2.7 地衣芽孢桿菌的亞甲基胍誘變育種方法
        2.2.8 雙層瓊脂篩選法
        2.2.9 復合誘變方法
        2.2.10 梯度篩選培養(yǎng)基制作方法
        2.2.11 測菌株的生長曲線方法
        2.2.12 傳代對比測試方法
        2.2.13 生長能力的檢測方法
3 結果與分析
    3.1 地衣芽孢桿菌噬菌體分離純化及性狀研究
        3.1.1 地衣芽孢桿菌噬菌體分離純化
        3.1.2 地衣芽孢桿菌噬菌體效價
        3.1.3 地衣芽孢桿菌噬菌體生長水平
        3.1.4 噬菌體對枯草芽孢桿菌的交叉感染能力
    3.2 地衣芽孢桿菌各株系的噬菌體抗性
    3.3 生產(chǎn)環(huán)境噬菌體檢測結果
        3.3.1 土壤中噬菌體分析
        3.3.2 塵埃中噬菌體分析
        3.3.3 積水中噬菌體分析
        3.3.4 消毒前后噬菌體分析
    3.4 噬菌體殺滅試驗
        3.4.1 水浴殺滅噬菌體
        3.4.2 漂白粉對噬菌體的死滅效果
    3.5 噬菌體和溫度對芽孢桿菌生長的影響
        3.5.1 地衣芽孢桿菌菌體與噬菌體的關系
        3.5.2 地衣芽孢桿菌菌數(shù)與溫度的關系
    3.6 亞甲基胍誘變條件選擇和誘變的結果
        3.6.1 不同濃度亞甲基胍處理出發(fā)菌株
        3.6.2 相同濃度亞甲基胍處理出發(fā)菌株不同時間
        3.6.3 亞甲基胍單一因素誘變結果
    3.7 復合誘變中紫外線照射的條件
    3.8 復合誘變篩選的菌株
        3.8.1 復合誘變實驗結果
        3.8.2 穩(wěn)定性檢測
        3.8.3 誘變菌株的傳代直徑
    3.9 抗性菌株效價的提高
        3.9.1 抗性菌株的抗性
        3.9.2 抗性菌株抗性提高后的抗性
    3.10 抗性菌株遺傳穩(wěn)定性的提高和生產(chǎn)能力
        3.10.1 菌株的生長曲線
        3.10.2 菌株的傳代對比
        3.10.3 生長能力的測試結果
4 結論與討論
    4.1 噬菌體性狀的研究
    4.2 對多種噬菌體感染的菌株選用誘變方法
        4.2.1 常用的誘變方法
        4.2.2 選擇誘變方法
    4.3 工廠噬菌體污染
        4.3.1 噬菌體污染途徑
        4.3.2 環(huán)境消毒和空氣凈化
    4.4 篩選是誘變育種的關鍵
        4.4.1 篩選方法的選擇
        4.4.2 遺傳穩(wěn)定性和生產(chǎn)能力
    4.5 展望
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
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博士論文
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本文編號：3132506