磺胺二甲嘧啶單克隆抗體的制備及其免疫檢測方法的初步建立
發(fā)布時間:2021-04-11 21:06
磺胺二甲嘧啶(Sulfamethazine,SM2),屬于磺胺類藥物(Sulfonamides,SAs)中應(yīng)用比較廣泛的一種,含有對氨基苯磺酰胺的典型結(jié)構(gòu),SM2抑菌譜廣,見效快,且成本低廉,廣泛應(yīng)用于動物疾病的預(yù)防和治療。SM2還有促進動物生長的作用,因此,常作為飼料添加劑在動物生長過程中長期使用。SM2的過度使用會造成其在動物源性食品中大量殘留,嚴(yán)重危害人類健康,引起了世界各國廣泛的關(guān)注。因此,歐盟各國也對相關(guān)食品中的磺胺類藥物的殘留制定了最高允許值,規(guī)定總量不得高于100μg/kg,單個藥物不得高于25μg/kg。日本對食品中的SAs規(guī)定不得檢出。2002年12月我國農(nóng)業(yè)部公告第235號文件規(guī)定在所有食品動物的肌肉、脂肪、肝和腎中磺胺類藥物最高殘留限量為100μg/kg,并將磺胺二甲嘧啶列為獸藥殘留監(jiān)控的重點。目前,檢測SM2的方法有微生物法,物理化學(xué)法以及酶聯(lián)免疫檢測法(ELISA)等。其中微生物法檢測速度較快,但靈敏性和特異性差,物理化學(xué)法則存在樣品前處理繁瑣,需要昂貴儀器及專業(yè)操作等特點。酶聯(lián)免疫檢測法具有靈敏、快速、高通量的特點,不需要配備昂貴的的儀器,比較適合基層大量樣...
【文章來源】:河北師范大學(xué)河北省
【文章頁數(shù)】:53 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【部分圖文】:
磺胺類藥物的母核結(jié)構(gòu)
圖 1.2 常見 14 中磺胺類藥物結(jié)構(gòu)1.1.2 磺胺類藥物的作用機理磺胺類藥物為廣譜抑菌劑,結(jié)構(gòu)上類似對氨基苯甲酸(Para aminobenzoicacid,PABA),作用機理如下:PABA 和二氫喋啶在二氫葉酸合成酶的作用下,合成二氫葉酸;二氫葉酸在二氫葉酸還原酶的作用下,又生成四氫葉酸;四氫葉酸再進一步形成活化型四氫葉酸,也就是輔酶F,它能傳遞一碳基團參與嘌呤、嘧啶核苷酸合成;前奉愃幬锟膳c PABA 競爭性地作用于細菌體內(nèi)的二葉酸合成酶,阻礙了 PABA 作為原料合成細菌所需葉酸的過程,影響細菌核蛋白的合成,抑制細菌的生長繁殖。1.2 磺胺二甲嘧啶殘留現(xiàn)狀及危害1.2.1 磺胺二甲嘧啶在機體內(nèi)的代謝SM2 進入動物體內(nèi)后,腸道難吸收的主要以原形隨糞便排出,而且在環(huán)境中
圖1 SM2-BSA的合成路線圖2.3.2 人工合成抗原的鑒定2.3.2.1 偶聯(lián)物蛋白濃度測定采用考馬斯亮藍法測定BSA-SM2和OVA-SM2的蛋白濃度,以BSA不同濃度下對應(yīng)的吸光度作圖,以蛋白含量(μg)為橫坐標(biāo),以吸光度值(Abmax)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,測定合成的BSA-SM2和OVA-SM2的蛋白濃度。2.3.2.2 半抗原與蛋白偶聯(lián)比率的測定具體步驟如下,以BSA-SM2為例:①稱量140μgSM2,稀釋為1mL,然后倍比稀釋得2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625mg/ml系列濃度,分別進行紫外光譜掃描;②讀出不同濃度下對應(yīng)的吸光度Abmax,以濃度為橫坐標(biāo),對應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線;③將2.5mg/ml的BSA倍比稀釋,分別進行紫外光譜掃描;④讀出不同濃度下對應(yīng)的吸光度Abmax,作BSA濃度對吸光度的標(biāo)準(zhǔn)曲線;⑤將合成物SM2-BSA原液稀釋10倍后,測定其UV圖譜,得出吸光度 A0。⑥根據(jù)物質(zhì)
【參考文獻】:
期刊論文
[1]沙丁胺醇單克隆抗體的制備及間接ELISA方法的建立[J]. 彭述輝,袁利鵬,孫遠明,雷紅濤,王保玲,徐振林,龐杰. 食品工業(yè)科技. 2010(07)
[2]磺胺二甲嘧啶人工抗原的合成與鑒定[J]. 張明洲,胡華軍,華加寧,方結(jié)紅,陳宗倫,俞曉平. 中國計量學(xué)院學(xué)報. 2009(04)
[3]磺胺二甲基嘧啶殘留快速檢測阻斷ELISA試劑盒的研制及其性能測定[J]. 張改平,劉慶堂,鄧瑞廣,楊蘇珍,李學(xué)伍,趙東,邢廣旭. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2009(01)
[4]磺胺二甲嘧啶競爭抑制ELISA法檢測[J]. 王穎,劉陽,周立波,柳增善. 中國公共衛(wèi)生. 2008(12)
[5]磺胺二甲基嘧啶人工抗原的合成及鑒定[J]. 劉慶堂,職愛民,張改平,鄧瑞廣,柴書軍,趙東,楊繼飛,陳現(xiàn)臣. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2008(02)
[6]動物組織中磺胺二甲嘧啶殘留ELISA試劑盒研制[J]. 李平,周洪斌,朱金連,肖震,丁貴平,宓曉黎,李利東,袁建興. 微生物學(xué)雜志. 2006(05)
[7]飼料中磺胺二甲嘧啶、磺胺六甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲惡唑的檢測方法[J]. 姜兆興,曹旭,李智瑾. 飼料工業(yè). 2005(20)
[8]克倫特羅小分子半抗原偶聯(lián)比率的測定方法研究[J]. 呂會田,樂加昌,陳存社. 中國飼料. 2005(07)
[9]高效液相色譜法測定牛奶中磺胺二甲嘧啶殘留量的研究[J]. 蔣定國,楊大進,王竹天,方從容,王玉蓮,文玉雪. 華南預(yù)防醫(yī)學(xué). 2004(02)
[10]高效液相色譜法測定雞肉中磺胺二甲嘧啶、磺胺甲噁唑[J]. 楊祖英,金社勝,劉文娟,王貴際. 衛(wèi)生研究. 2003(06)
碩士論文
[1]磺胺類藥物殘留ELISA快速檢測試劑盒的研制[D]. 劉百紅.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006
[2]克倫特羅單克隆抗體制備和殘留ELISA檢測方法及試劑盒研究[D]. 王帥兵.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005
本文編號:3131958
【文章來源】:河北師范大學(xué)河北省
【文章頁數(shù)】:53 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【部分圖文】:
磺胺類藥物的母核結(jié)構(gòu)
圖 1.2 常見 14 中磺胺類藥物結(jié)構(gòu)1.1.2 磺胺類藥物的作用機理磺胺類藥物為廣譜抑菌劑,結(jié)構(gòu)上類似對氨基苯甲酸(Para aminobenzoicacid,PABA),作用機理如下:PABA 和二氫喋啶在二氫葉酸合成酶的作用下,合成二氫葉酸;二氫葉酸在二氫葉酸還原酶的作用下,又生成四氫葉酸;四氫葉酸再進一步形成活化型四氫葉酸,也就是輔酶F,它能傳遞一碳基團參與嘌呤、嘧啶核苷酸合成;前奉愃幬锟膳c PABA 競爭性地作用于細菌體內(nèi)的二葉酸合成酶,阻礙了 PABA 作為原料合成細菌所需葉酸的過程,影響細菌核蛋白的合成,抑制細菌的生長繁殖。1.2 磺胺二甲嘧啶殘留現(xiàn)狀及危害1.2.1 磺胺二甲嘧啶在機體內(nèi)的代謝SM2 進入動物體內(nèi)后,腸道難吸收的主要以原形隨糞便排出,而且在環(huán)境中
圖1 SM2-BSA的合成路線圖2.3.2 人工合成抗原的鑒定2.3.2.1 偶聯(lián)物蛋白濃度測定采用考馬斯亮藍法測定BSA-SM2和OVA-SM2的蛋白濃度,以BSA不同濃度下對應(yīng)的吸光度作圖,以蛋白含量(μg)為橫坐標(biāo),以吸光度值(Abmax)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,測定合成的BSA-SM2和OVA-SM2的蛋白濃度。2.3.2.2 半抗原與蛋白偶聯(lián)比率的測定具體步驟如下,以BSA-SM2為例:①稱量140μgSM2,稀釋為1mL,然后倍比稀釋得2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625mg/ml系列濃度,分別進行紫外光譜掃描;②讀出不同濃度下對應(yīng)的吸光度Abmax,以濃度為橫坐標(biāo),對應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線;③將2.5mg/ml的BSA倍比稀釋,分別進行紫外光譜掃描;④讀出不同濃度下對應(yīng)的吸光度Abmax,作BSA濃度對吸光度的標(biāo)準(zhǔn)曲線;⑤將合成物SM2-BSA原液稀釋10倍后,測定其UV圖譜,得出吸光度 A0。⑥根據(jù)物質(zhì)
【參考文獻】:
期刊論文
[1]沙丁胺醇單克隆抗體的制備及間接ELISA方法的建立[J]. 彭述輝,袁利鵬,孫遠明,雷紅濤,王保玲,徐振林,龐杰. 食品工業(yè)科技. 2010(07)
[2]磺胺二甲嘧啶人工抗原的合成與鑒定[J]. 張明洲,胡華軍,華加寧,方結(jié)紅,陳宗倫,俞曉平. 中國計量學(xué)院學(xué)報. 2009(04)
[3]磺胺二甲基嘧啶殘留快速檢測阻斷ELISA試劑盒的研制及其性能測定[J]. 張改平,劉慶堂,鄧瑞廣,楊蘇珍,李學(xué)伍,趙東,邢廣旭. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2009(01)
[4]磺胺二甲嘧啶競爭抑制ELISA法檢測[J]. 王穎,劉陽,周立波,柳增善. 中國公共衛(wèi)生. 2008(12)
[5]磺胺二甲基嘧啶人工抗原的合成及鑒定[J]. 劉慶堂,職愛民,張改平,鄧瑞廣,柴書軍,趙東,楊繼飛,陳現(xiàn)臣. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2008(02)
[6]動物組織中磺胺二甲嘧啶殘留ELISA試劑盒研制[J]. 李平,周洪斌,朱金連,肖震,丁貴平,宓曉黎,李利東,袁建興. 微生物學(xué)雜志. 2006(05)
[7]飼料中磺胺二甲嘧啶、磺胺六甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲惡唑的檢測方法[J]. 姜兆興,曹旭,李智瑾. 飼料工業(yè). 2005(20)
[8]克倫特羅小分子半抗原偶聯(lián)比率的測定方法研究[J]. 呂會田,樂加昌,陳存社. 中國飼料. 2005(07)
[9]高效液相色譜法測定牛奶中磺胺二甲嘧啶殘留量的研究[J]. 蔣定國,楊大進,王竹天,方從容,王玉蓮,文玉雪. 華南預(yù)防醫(yī)學(xué). 2004(02)
[10]高效液相色譜法測定雞肉中磺胺二甲嘧啶、磺胺甲噁唑[J]. 楊祖英,金社勝,劉文娟,王貴際. 衛(wèi)生研究. 2003(06)
碩士論文
[1]磺胺類藥物殘留ELISA快速檢測試劑盒的研制[D]. 劉百紅.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006
[2]克倫特羅單克隆抗體制備和殘留ELISA檢測方法及試劑盒研究[D]. 王帥兵.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005
本文編號:3131958
本文鏈接:http://sikaile.net/yixuelunwen/dongwuyixue/3131958.html
最近更新
教材專著