為實(shí)現(xiàn)多個(gè)基因在同一菌株中均一可溶性表達(dá),簡(jiǎn)化基因工程亞單位多聯(lián)多價(jià)疫苗中抗原生產(chǎn)的工藝步驟,本研究選用Ⅰ群4型禽腺病毒（FAdV-4） Fiber-2蛋白、雞傳染性法氏囊病病毒（IBDV） VP2蛋白和減蛋綜合征病毒（EDSV）Fiber蛋白3種來(lái)自不同禽病毒的抗原為研究對(duì)象,利用原核表達(dá)系統(tǒng),通過(guò)密碼子優(yōu)化、載體啟動(dòng)子改造和基因串聯(lián)順序優(yōu)化,獲得單一載體/多重轉(zhuǎn)錄單元的共表達(dá)重組質(zhì)粒。將共表達(dá)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）菌株,進(jìn)行3個(gè)基因的共表達(dá)。純化后的蛋白進(jìn)行Western blotting和蛋白活性檢測(cè)。結(jié)果表明,目的基因經(jīng)過(guò)密碼子優(yōu)化、載體啟動(dòng)子改造和基因串聯(lián)順序的優(yōu)化后,獲得均一可溶性共表達(dá)的3種蛋白,純化后蛋白純度大于80%,Western blotting分析和瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)表明串聯(lián)表達(dá)的3種蛋白具有免疫反應(yīng)性和抗原活性。文中通過(guò)目的基因密碼子優(yōu)化、表達(dá)載體啟動(dòng)子改造和基因串聯(lián)等關(guān)鍵技術(shù)的突破,首次實(shí)現(xiàn)了3種不同禽病毒抗原的高效、均一、可溶性串聯(lián)表達(dá)和純化,為基因工程亞單位多聯(lián)多價(jià)疫苗的研制奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：生物工程學(xué)報(bào). 2020,36(10)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：10 頁(yè)

【部分圖文】：

優(yōu)化前后重組蛋白表達(dá)的SDS-PAGE分析

將含有6種不同串聯(lián)順序重組載體(圖2)的E.coli BL21(DE3)同時(shí)培養(yǎng)，并用相同的誘導(dǎo)條件，誘導(dǎo)目的蛋白表達(dá)。破碎后樣品上清用12%SDS-PAGE檢測(cè)結(jié)果見圖3。結(jié)果顯示，不同串聯(lián)順序中FAd V Fiber-2蛋白、IBDV VP2蛋白和EDSV Fiber蛋白的可溶性表達(dá)情況差異比較明顯。其中，含有串聯(lián)表達(dá)重組載體p ET28a-F-E-I、p ET28a-E-I-F、p ET28a-E-F-I和p ET28a-I-E-F的菌株能夠?qū)崿F(xiàn)3種蛋白同時(shí)可溶性共表達(dá)(第2、4、5、6泳道)，含有串聯(lián)表達(dá)重組載體p ET28aF-I-E和p ET28a-I-F-E的菌株僅能實(shí)現(xiàn)FAd V Fiber-2蛋白和IBDV VP2蛋白的同時(shí)可溶性表達(dá)(第3、7泳道)。圖3 共表達(dá)蛋白的SDS-PAGE分析

圖2 串聯(lián)表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建使用灰度掃描軟件對(duì)上清中3種可溶性表達(dá)蛋白進(jìn)行分析，分析結(jié)果顯示，第6泳道中，3種蛋白的比例接近1︰1︰1，說(shuō)明含有串聯(lián)表達(dá)重組載體p ET28a-I-E-F的菌株，能夠獲得的可溶性表達(dá)相對(duì)較多，且比例接近目的蛋白。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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