本研究擬以小鼠肌肉C2C12細(xì)胞系為研究材料,構(gòu)建骨骼肌細(xì)胞熱應(yīng)激模型,通過(guò)兩個(gè)試驗(yàn):1)考察熱應(yīng)激對(duì)小鼠肌肉C2C12細(xì)胞分化的影響,并考察在此過(guò)程中硒蛋白表達(dá)的變化;2)比較兩種不同硒源對(duì)小鼠肌肉C2C12熱應(yīng)激的緩解效應(yīng)并探索其可能機(jī)制。主要內(nèi)容及結(jié)果如下:實(shí)驗(yàn)一:熱應(yīng)激對(duì)小鼠C2C12成肌細(xì)胞分化及硒蛋白表達(dá)的影響。選擇小鼠C2C12成肌細(xì)胞作為試驗(yàn)材料,構(gòu)建肌肉細(xì)胞熱應(yīng)激模型,考察熱應(yīng)激對(duì)小鼠C2C12成肌細(xì)胞分化的影響,同時(shí)考察硒蛋白表達(dá)的變化。采用單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì):C2C12細(xì)胞首先于37 ^oC二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2³ d至鋪板率達(dá)到80%;然后分成2組進(jìn)行成肌分化誘導(dǎo):對(duì)照組于37.0 ^oC培養(yǎng)4、6、8 d;熱應(yīng)激組于41.5^oC培養(yǎng)4、6、8 d,采用定量PCR技術(shù)考察24個(gè)硒蛋白基因、2個(gè)分化相關(guān)基因、2個(gè)能量調(diào)控基因和2個(gè)凋亡基因表達(dá),采用Western-blot考察了HSP70、MYOGENIN蛋白及5個(gè)硒蛋白的表達(dá)。研究結(jié)果表明:（1）熱應(yīng)激抑制了C2C12細(xì)胞分化和損傷了... 

【文章來(lái)源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

2C12細(xì)胞分化模式圖

技術(shù)路線圖

圖 3 顯微鏡觀察熱應(yīng)激對(duì) C2C12 細(xì)胞分化的影響Fig.3 Microscope inspection of the myogenic differentiated C2C12 cells subject to HS.4.2 熱應(yīng)激對(duì)熱休克蛋白 70 及分化相關(guān)基因表達(dá)的影響熱應(yīng)激抑制成肌細(xì)胞 C2C12 分化為肌管，這可能是改變了分化相關(guān)基因表達(dá)所引起�？疾炝藷釕�(yīng)激對(duì) HSP70 和 4 個(gè)分化相關(guān)基因（AMPKα1、AMPKα2、MYOD、MYOGENIN）在 C2C12 細(xì)胞分化各個(gè)階段的影響，結(jié)果見(jiàn)圖 4。由圖中可見(jiàn)熱應(yīng)激顯著上調(diào)了（P＜0.01）C2C12 細(xì)胞 HSP70 mRNA 表達(dá)，下調(diào)了（P＜0.01）C2C12 細(xì)胞 MYOD 和 MYOGENIN mRNA 表達(dá)量。AMPKα1 和 AMPKα2顯示出 3 種表達(dá)模式：在熱應(yīng)激處理 4 d AMPKα1 和 AMPKα2 mRNA 表達(dá)顯著（P < 0.05 or 0.01）上調(diào)；在熱應(yīng)激處理 6 d 表達(dá)無(wú)差異（P > 0.05）；而在熱應(yīng)激處理 8 d AMPKα2 mRNA 表達(dá)顯著（P < 0.05）下調(diào)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[4]超營(yíng)養(yǎng)劑量硒對(duì)肉雞硒蛋白基因及胰島素信號(hào)相關(guān)基因表達(dá)的影響[D]. 黃曉鳳.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[5]富硒益生菌對(duì)高溫條件下仔豬生產(chǎn)性能、抗氧化能力和腸道菌群的影響[D]. 呂晨輝.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[6]母種豬補(bǔ)充不同硒源對(duì)后代乳豬生長(zhǎng)性能的影響及作用機(jī)理的探討[D]. 李星.浙江大學(xué) 2009
[7]有機(jī)硒和維生素E對(duì)地方雜交雞抗氧化和抗熱應(yīng)激性能的影響[D]. 劉風(fēng)民.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004



本文編號(hào)：3126270