片形吸蟲病是由大片形吸蟲和肝片形吸蟲寄生在草食性哺乳動物或人的肝膽內(nèi)引起的一種人畜共患寄生蟲病。硫氧還蛋白谷胱甘肽還原酶（TGR）是片形吸蟲氧化還原系統(tǒng)中一個非常重要的抗氧化酶,TGR抑制物的研究和篩選可為研發(fā)抗大片形吸蟲的新藥物提供理論依據(jù)。本研究利用PCR技術(shù)從大片形吸蟲cDNA中擴增得到FgTGR基因,并將細菌的硒代半胱氨酸插入元件（SECIS）融合到FgTGR的開放閱讀框末端,形成嵌合基因FgTGR-SECIS,構(gòu)建FgTGR的重組原核表達質(zhì)粒pET-28a（+）-FgTGRsec,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至BL21（DE3）感受態(tài)細胞進行誘導(dǎo)表達得到重組蛋白rFgTGR。將重組質(zhì)粒與硒蛋白表達工程質(zhì)粒pSUABC共轉(zhuǎn)化至BL21（DE3）感受態(tài)細胞進行誘導(dǎo)表達,在表達過程中添加亞硒酸鈉和L-半胱氨酸,得到重組硒蛋白（rFgTGRsec）。通過His-tag蛋白純化磁珠分別對兩種蛋白進行純化。建立了rFgTGRsec的TrxR、GR、GrxR三種酶活性檢測體系,通過測定DTNB和NADPH的吸光值變化,分別計算rFgTGRsec的TrxR、GR和GrxR活性。在金屬催化氧化系統(tǒng)（MCO）... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

FgTGR與FgTGR-SECIS基因的克隆

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第二章大片形吸蟲硫氧還蛋白谷胱甘肽還原酶的表達純化19圖2-2菌落PCR鑒定泳道1-10：單克隆菌落PCR結(jié)果M：DNAmarker（2000bp）Fig.2-2PCRidentificationofbacterialcoloniesLane1-10:PCRproductofbacterialcolonies;M:DNAmarker（2000bp）如圖2-3所示，質(zhì)粒pET28a(+)-FgTGR-SECIS經(jīng)過酶切后在電泳圖中顯示兩條條帶。圖2-3質(zhì)粒pET28a(+)-FgTGR-SECIS的酶切鑒定泳道1：完整質(zhì)粒；泳道2-5：酶切后的質(zhì)粒；M：DNAmarker（10,000bp）Fig.2-3IdentificationoftherecombinantplasmidpET28a(+)-FgTGR-SECISbyrestrictionenzymedigestLane1:Plasmidwithoutenzymedigestion;Lane2-5:Productsofrestrictionenzymedigestion;M:DNAmarker（10,000bp）

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第二章大片形吸蟲硫氧還蛋白谷胱甘肽還原酶的表達純化19圖2-2菌落PCR鑒定泳道1-10：單克隆菌落PCR結(jié)果M：DNAmarker（2000bp）Fig.2-2PCRidentificationofbacterialcoloniesLane1-10:PCRproductofbacterialcolonies;M:DNAmarker（2000bp）如圖2-3所示，質(zhì)粒pET28a(+)-FgTGR-SECIS經(jīng)過酶切后在電泳圖中顯示兩條條帶。圖2-3質(zhì)粒pET28a(+)-FgTGR-SECIS的酶切鑒定泳道1：完整質(zhì)粒；泳道2-5：酶切后的質(zhì)粒；M：DNAmarker（10,000bp）Fig.2-3IdentificationoftherecombinantplasmidpET28a(+)-FgTGR-SECISbyrestrictionenzymedigestLane1:Plasmidwithoutenzymedigestion;Lane2-5:Productsofrestrictionenzymedigestion;M:DNAmarker（10,000bp）

【參考文獻】：
期刊論文
[1]大理地區(qū)大片形吸蟲的最適中間宿主研究[J]. 方文,李天美,李婷,張劍萍,郝明明,劉榆華,陳紹榮.  中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2019(03)
[2]肝片吸蟲病藥物治療的研究進展[J]. 王超,宋正己.  中國熱帶醫(yī)學(xué). 2019(03)
[3]阿苯達唑片與吡喹酮片治療肝吸蟲的臨床療效和副作用分析[J]. 韋肖龍,譚瑞斌.  現(xiàn)代醫(yī)學(xué)與健康研究電子雜志. 2018(13)
[4]三氯苯達唑的國內(nèi)外研究與應(yīng)用現(xiàn)狀[J]. 李成應(yīng),焦偉麗,溫錦芳.  中國畜牧獸醫(yī)文摘. 2017(05)
[5]羊肝片吸蟲病藥物防治模式試驗探討[J]. 李文彩,羅生金.  中獸醫(yī)學(xué)雜志. 2015(05)
[6]肝片形吸蟲對牛的危害和防治措施[J]. 趙立權(quán),趙克平,楊忠寶.  當(dāng)代畜牧. 2015(24)
[7]原核表達系統(tǒng)中硒代半胱氨酸表達效率的檢測[J]. 張磊,李大鵬,許會靜,李艷.  中國西部科技. 2015(01)
[8]大理地區(qū)肝片形吸蟲感染中間宿主實驗研究[J]. 方文,李天美,李科榮,陳鳳,劉榆華.  中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2014(04)
[9]阿苯達唑和三氯苯噠唑?qū)θ梭w大片形吸蟲的驅(qū)蟲效果比較[J]. 方文,陳鳳,劉宏坤,楊瓊,楊琳.  中國血吸蟲病防治雜志. 2014(01)
[10]金諾芬抗日本血吸蟲活性機制及其細胞毒性的探討[J]. 劉建,胡薇,徐斌,王吉鵬,王樹奇,王小寧.  中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2012(06)

博士論文
[1]硫氧還蛋白谷胱甘肽還原酶（TGR）在日本血吸蟲生長發(fā)育中部分功能的研究[D]. 韓艷輝.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014

碩士論文
[1]Furoxan衍生物抑制日本血吸蟲TGR活性及殺蟲作用研究[D]. 郭晴晴.山東大學(xué) 2019
[2]以血吸蟲TGR為靶標的呋咱衍生物以及青蒿素—呋咱類化合物的設(shè)計與合成[D]. 李恭銘.山東大學(xué) 2018
[3]金諾芬對斑馬魚胚胎的發(fā)育毒性研究[D]. 高曉艷.延邊大學(xué) 2017
[4]基于SjTGR蛋白酶活性的抗血吸蟲抑制劑研究[D]. 黃符燕.贛南師范學(xué)院 2015
[5]豬帶絳蟲硫氧還蛋白過氧化物酶的原核表達及其生物學(xué)特性分析[D]. 尹才.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[6]日本血吸蟲硫氧還蛋白谷胱甘肽還原酶的表達及其功能研究[D]. 宋麗君.江蘇省血吸蟲病防治研究所 2011



本文編號：3123858