為比較含有水貂阿留申病毒（ADV）VP2蛋白不同表位密度重組蛋白的抗原性,本研究將抗原表位肽的編碼序列進(jìn)行2、4、6、8重復(fù)串聯(lián),得到4個(gè)表位串聯(lián)體P2、P4、P6、P8,將其克隆到表達(dá)載體pET-30a（+）上,構(gòu)建4個(gè)重組質(zhì)粒,在大腸桿菌系統(tǒng)中誘導(dǎo)表達(dá);經(jīng)Western Blot和對(duì)流免疫電泳（CIEP）鑒定其抗原性。采用間接ELISA方法對(duì)各重組蛋白進(jìn)行抗原性分析比較。結(jié)果顯示,成功表達(dá)的3個(gè)重組蛋白PP4、PP6、PP8均具有良好的抗原性;8段表位肽串聯(lián)的重組蛋白PP8的抗原性最強(qiáng)。本研究制備的串聯(lián)重組蛋白為建立ADV血清學(xué)診斷方法提供了科學(xué)依據(jù)。 

【文章來源】：中國(guó)獸醫(yī)雜志. 2020,56(03)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

8個(gè)表位肽串聯(lián)體的DNA序列

SDS-PAGE結(jié)果顯示,重組蛋白PP2未能成功表達(dá)。Western Blot結(jié)果顯示,成功表達(dá)的3個(gè)重組蛋白大小符合預(yù)期,且均能夠被抗ADV陽性血清所識(shí)別(見圖4),同時(shí)這些重組蛋白不與抗ADV陰性血清反應(yīng)。另外,CIEP結(jié)果顯示,在商業(yè)抗原和3個(gè)重組蛋白與抗ADV陽性血清間均產(chǎn)生了肉眼可見的沉淀線,與抗ADV陰性血清間均未形成沉淀線。結(jié)果表明,3個(gè)重組蛋白均能與抗ADV陽性血清發(fā)生特異性反應(yīng),具有一定的抗原性。3.4 重組蛋白抗原性的ELISA分析

采用ELISA方法鑒定純化后的重組蛋白PP4、PP6和PP8的抗原性,結(jié)果顯示,3個(gè)重組蛋白與ADV陽性血清反應(yīng)OD450值均在2.0左右,呈現(xiàn)陽性;與陰性血清反應(yīng)的OD450值均在0.1左右,呈現(xiàn)陰性。圖5為在3種不同質(zhì)量濃度下3個(gè)重組蛋白的檢測(cè)結(jié)果P/N值。在3個(gè)重組蛋白中PP8的P/N值最高,PP6次之,PP4最低。結(jié)果表明,重組蛋白PP8的抗原性最強(qiáng)。圖5 ELISA比較不同抗原表位密度重組蛋白的抗原性

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬傳染性胃腸炎病毒S蛋白抗原表位C的串聯(lián)表達(dá)研究[J]. 于天飛,董慧瑩,張喜文,謝鵬宇,王有祺,孫婉姝.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2017(11)
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碩士論文
[1]水貂阿留申病檢測(cè)抗原的制備及間接ELISA檢測(cè)方法的建立[D]. 黃盼盼.吉林大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3121710